专利名称：一种茶皂素中皂苷的定量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种检测技术，尤其涉及一种茶皂素中皂苷的定量检测方法。
背景技术：
茶皂素又称茶皂苷、茶皂甙，是由七种配基、四种配糖体和二种有机羧酸组成的一种五环三萜类皂苷，主要来源于山茶科植物(如茶、山茶、油茶)。茶皂素具有抗菌、抗氧化、抗高胆固醇高血脂、湿润发泡等性能，在医药、建材、水产、农药、化妆品、洗涤剂等行业用途广泛，作为一种绿色环保型非离子表 面活性剂，具有良好的应用前景。我国是世界油茶产量最多的国家，目前油茶林面积达到360万公顷，占全国木本食用油料面积的80%以上,每年榨油后剩下的油茶籽柏有50多万吨，而油茶籽柏含茶皂素10 20%，为生产茶皂素提供了丰富的原料。近年来国内外对油茶籽柏和茶皂素的市场需求呈现出所未有的增长趋势，促进了油茶籽柏深加工产业的快速发展。与此同时，茶皂素产品质量越来越受关注，其中皂苷含量已成为国内外贸易的主要定价依据。为满足出口市场需求，国家质量监督检验检疫总局于2006年颁布了《中华人民共和国出入境检疫检疫行业标准出口茶皂素中皂苷含量的测定》(下称《SN/T1852-2006标准》)，但该标准所采用的重量分析法(化学法)只适用于皂苷含量为30% 70%的茶皂素产品，不适用于皂苷含量较低的油茶籽柏中提取的茶皂素的检测，且该方法不具有检测内销产品的强制效力。因此，目前国内市场茶皂素的定量检测尚缺乏国家标准，也缺乏相关行业标准和地方标准。过去文献报道的茶皂素中皂苷的定量检测方法主要有重量分析法、香草醛-浓硫酸比色法、荧光光度法、速差分光光度法、薄层扫描法、HPLC法和液相色谱一飞行时间质谱(LC/T0F-MS)联用仪法等，但对这些方法的适用范围和精确性比较迄今未见专门研究。而从油茶饼柏中提取茶皂素，历史上已有许多研究研究报道和专利技术公布，如“溶剂提取和选择性分离一体化制备茶皂素的新工艺”(公开发明专利号200710168737. 4，2007，颜流水、罗旭彪、邰建东、涂新满、俞斌，2007)，“一种茶皂素的提取方法”(授权发明专利号ZL99115525. 4,方夏敏，2008)，但相关专利一般只涉及提取精制利用，而没有适合于油茶籽柏、茶皂素粗提物和高纯度茶皂素检测方法。近年来，用正丁醇等从茶柏中提取残油工艺已非常成熟，在许多油脂企业形成规模化，但尚未见有茶皂素定量测定的报道。同时，从油茶籽柏中提取茶皂素时，因含有油脂、树脂、蛋白质、多糖、丹宁酸等许多杂质，使得茶皂素产品粘度大、含量不高、色泽深黑，茶籽中皂素的含量因品种、栽培环境以及定量方法的不同而存在差异，给茶皂素的定量分析造成很多困难，因此迄今国内外尚未见统一的成熟检测方法。而在茶皂素研究和生产过程中，定量测定非常重要，不仅要求检测方法不仅精确度高、简单、便于操作，而且适用面要广，尤其要适用于缺乏检测设备的地区和企业。为此，我们进行了油茶籽柏中提取的茶皂素中的皂苷含量的检测方法研究，以期为制订检测方法标准提供科学依据。
发明内容
鉴于现茶皂素定量测定存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种茶皂素中皂苷的定量检测方法，该方法不仅精确度高、简单、便于操作，而且适用面要广，尤其适用于缺乏检测设备的地区和企业。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种茶皂素中皂苷的定量检测方法，该方法包括以下步骤
(O称取粉状油茶籽柏样品3. (Γ3. 5g，置于三角烧瓶中，加入25 mL氢氧化钠甲醇溶液，上接蛇形冷凝管，置通风橱中沸水浴中回流2 h，取出冷却至室温；所述氢氧化钠甲醇溶液由氢氧化钠10 g溶于20 mL水后加入80 mL甲醇制备得到；
(2)用质量百分比为20%的盐酸溶液调节步骤1制备的溶液至pH约等于7，加入20mL甲醇，然后缓慢加入7 mL盐酸(P =1.18 g/mL)，置沸水浴中回流1 h，移去冷凝管，置通风橱中，水浴30 min挥去甲醇至终体积约30 mL ；
(3)将步骤2制备的溶液立即倾注于1000mL烧杯中，加入500 mL蒸馏水混匀，另用煮沸的蒸馏水洗涤三角烧瓶，并入烧杯中，待充分冷却、沉淀后，过滤；
(4)滤渣用蒸馏水洗至中性，烘干，置于滤纸筒内，以105±2°C下恒重的索氏抽提浸瓶接收，用丙酮作助剂于75°C水浴上用索氏抽提法抽提2h，回收丙酮；
(5)将索氏抽提浸瓶和瓶塞置烘箱中105°C±2°C干燥2h，取出、加塞，放入干燥器中冷却O. 5 h后称量；重复，直至恒重；
(6)空白试验随同试样做空白试验；
(7)皂苷含量(即质量分数)按SN/T1852-2006规定的以下公式计算得到
权利要求
1.一种茶皂素中皂苷的定量检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤 (O称取粉状油茶籽柏样品3. (Γ3. 5g，置于三角烧瓶中，加入25 mL氢氧化钠甲醇溶液，上接蛇形冷凝管，置通风橱中沸水浴中回流2 h，取出冷却至室温；所述氢氧化钠甲醇溶液由氢氧化钠10 g溶于20 mL水后加入80 mL甲醇制备得到； (2)用质量百分比为20%的盐酸溶液调节步骤I制备的溶液至pH约等于7，加入20mL甲醇，然后缓慢加入7 mL盐酸(P=1.18 g/mL)，置沸水浴中回流I h，移去冷凝管，置通风橱中，水浴30 min挥去甲醇至终体积约30 mL ； (3)将步骤2制备的溶液立即倾注于1000mL烧杯中，加入500 mL蒸馏水混匀，另用煮沸的蒸馏水洗涤三角烧瓶，并入烧杯中，待充分冷却、沉淀后，过滤； (4)滤渣用蒸馏水洗至中性，烘干，置于滤纸筒内，以105±2°C下恒重的索氏抽提浸瓶接收，用丙酮作助剂于75°C水浴上用索氏抽提法抽提2h，回收丙酮； (5)将索氏抽提浸瓶和瓶塞置烘箱中105°C±2°C干燥2h，取出、加塞，放入干燥器中冷却O. 5 h后称量；重复，直至恒重，得到恒重后索氏抽提浸瓶与抽提物质量； (6)空白试验随同试样做空白试验，得到空白残留物质量； (7)皂苷含量(即质量分数)按SN/T1852-2006规定的以下公式计算得到
全文摘要
本发明公开了一种茶皂素中皂苷的定量检测方法，取油茶籽粕或茶皂素提取物3.0~3.5g，经碱、酸水解，溶于水，将水解液倾注在水中使之沉淀析出，测得皂苷元质量，再换算成皂苷质量分数。本发明具有检测设备简单，成本低、操作简便，精确度高，可直接测定的特点，适合于油茶籽粕、茶皂素粗提物和高纯度茶皂素检测。该方法尤其适用缺少仪器设备、检测人员文化程度不高的创业中小企业。
文档编号G01N5/02GK102621027SQ20121007699
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月22日 优先权日2012年3月22日
发明者刘松柏, 沈立荣, 祝洪刚, 蒋炎阳, 陈莹 申请人:浙江大学