专利名称：高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，属于分析化学领域。
背景技术：
琥乙红霉素，又名红霉素琥乙酯，属大环内酯类抗生素。作为青霉素过敏患者治疗下列感染的替代用药，适用于白喉及白喉带菌者；溶血性链球菌、肺炎链球菌等所致的急性扁桃体炎、急性咽炎、鼻窦炎；溶血性链球菌所致猩红热、蜂窝织炎；气性坏疽、炭疽、放线 菌病；破伤风；梅毒；李斯特菌病等。琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的测定常用抗生素微生物检定法红霉素项下(管碟法或浊度法)测定，在中国药典2010版第二部中对其有详细描述，该方法繁琐，试验周期长，稳定性差，重现性差。高效液相色谱法适于分析高沸点不易挥发的、分子量大、受热不稳定易分解的、不同机型的有机化合物；合成的和天然的高分子化合物；生物活性物质和多种天然产物，具有快速分离分析、重复性好等特点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，从而准确测定其含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。为了实现上述目的本发明采用如下技术方案
一种高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，该方 法采用的色谱条件为
色谱柱=C18柱，尺寸为250 X 4. 6mm,填料粒径为5 y m ;
流动相甲醇和磷酸二氢钠溶液，磷酸二氢钠溶液的浓度为0. 01-0. lmol/L，且甲醇和磷酸二氢钠溶液体积比为35:60-70，pH值为6. 5 ;
紫外检测器的检测波长215nm ；
流动相流速1. OmL/min ；
柱温35°C ；
进样体积20u L。所述的磷酸二氢钠溶液的浓度为0. 05mol/L。所述的甲醇和磷酸二氢钠溶液体积比为35:65。所述的pH值用三乙胺来调节。在高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量之前，将琥乙红霉素制剂做以下处理取适量琥乙红霉素制剂研细，准确称量，用流动相溶解并稀释至每I. OmL流动相含0. 5mg研细的琥乙红霉素制剂，用频率为20kHz 80kHz、功率为50 200W超声波处理5 IOmin后，用0. 45 ii m微孔滤膜过滤。该方法适合于所有的琥乙红霉素制剂形式，包括颗粒、胶囊、分散片等。本发明的有益效果
本发明可准确测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素的含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。
图I为实施例中琥乙红霉素标准曲线图； 图2为实施例中琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的色谱图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例I、仪器与试剂
仪器采用皖仪LC3000B型高效液相色谱仪，配UV3000B紫外检测器；色谱分离系统由皖仪LCS3000Q工作站控制。试剂琥乙红霉素标准品(中国药品生物制品检定所)，甲醇(色谱纯)，超纯水，三乙胺(色谱纯)，磷酸二氢钠(分析纯)，琥乙红霉素制剂-琥乙红霉素胶囊(利君制药)。0. 05mol/L磷酸二氢钠溶液准确称取7. 80gNaH2P04 2H20，用少量超纯水溶解，定容至IOOOmL,再经溶剂过滤器过滤处理。流动相溶液按甲醇0. 05mol/L磷酸二氢钠的体积比为35:65的比例配置流动相溶液，用三乙胺调节溶液pH值至6. 5。琥乙红霉素标准溶液取琥乙红霉素约IOOmg精密称定,放置于IOOmL容量瓶中，加流动相溶解，再用流动相定容至刻度，配制成浓度为I. Omg/mL,作为标准品溶液，放置于冰箱中保存备用。样品溶液取琥乙红霉素胶囊4粒，精密称量，研细，准确称取适量，用流动相溶解并稀释至每I. OmL含0. 5mg,超声溶解,过0. 45 y m微孔滤膜后,在实验设定条件下进行HPLC测定。2、含量测定方法的建立
(I)波长选择
采用皖仪LCS3000Q工作站的波长扫描功能，发现琥乙红霉素在195±lnm、210±lnm、482±lnm有显著吸收。考虑到其他干扰组分的影响，经多次试验，选用215nm作为琥乙红霉素样品的检测波长。(2)流动相的选择
对甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸盐缓冲液、乙腈-磷酸盐缓冲液、甲醇-醋酸铵水溶液等作为流动相进行考察，经过多次试验后，发现采用体积比为35:65的甲醇和0. 05mol/L磷酸二氢钠溶液(三乙胺调PH值至6. 5)为流动相的分离效果最佳。(3)定性试验
利用相对保留时间法及添加标准物质法定性，比较标准溶液、加标样品溶液和样品溶液在相同的色谱条件下的色谱图的相对保留时间来定性。实验结果表明，三种溶液中琥乙红霉素的出峰时间是一致的。(4)标准曲线和相关系数
精确量取上述配制的标准溶液2. 0,3. 0,5. 0,7. 0,10. OmL,分别放置于IOmL的容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇勻，得到0. 2mg/mL,0. 3mg/mL,0. 5mg/mL,0. 7mg/mL, I. Omg/mL。在上述色谱条件下，浓度由低到高，分别进样6次，进样体积20 yL，记录数据。以平均峰面积(y)为纵坐标，浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，见附图I。计算线性回归方程y=1954443. lx+110768. 5，r=0. 9995。结果表明琥乙红霉素在进样量0. 2_1. Omg/mL范围内线性关系良好。(5)样品的测定及重复性试验
取琥乙红霉素制剂样品溶液，依照上述的色谱条件，将样品注入高效液相色谱仪中，根据LCS3000Q工作站的记录结果，其色谱图见附图2。进样6次后，根据色谱图，记录实验数据，其进样结果见下表I :
权利要求
1.一种高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，其特征在于该方法采用的色谱条件为 色谱柱=C18柱，尺寸为250 X 4. 6mm,填料粒径为5 μ m ; 流动相甲醇和磷酸二氢钠溶液，磷酸二氢钠溶液的浓度为O. 01-0. lmol/L，且甲醇和磷酸二氢钠溶液体积比为35:60-70，pH值为6. 5 ； 紫外检测器的检测波长215nm ； 流动相流速1. OmL/min ； 柱温35°C ； 进样体积20μ L。
2.根据权利要求书I所述的高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，其特征在于所述的磷酸二氢钠溶液的浓度为O. 05mol/L。
3.根据权利要求书I所述的高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，其特征在于所述的甲醇和磷酸二氢钠溶液体积比为35:65。
4.根据权利要求书I所述的高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，其特征在于所述的pH值用三乙胺来调节。
5.根据权利要求书I所述的高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，其特征在于在高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量之前，将琥乙红霉素制剂做以下处理精密称取适量琥乙红霉素制剂研细，用流动相溶解并稀释至每I.OmL流动相含O. 5mg研细的琥乙红霉素制剂，用频率为20kHz 80kHz、功率为50 200W超声波处理5 IOmin后,用O. 45 μ m微孔滤膜过滤。
6.根据权利要求书I所述的高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，其特征在于该方法适合于所有的琥乙红霉素制剂形式，包括颗粒、胶囊、分散片坐寸ο
全文摘要
本发明公开了一种高效液相色谱法测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素含量的方法，主要是通过采用反相高效液相色谱法，其色谱条件为色谱柱为C18柱，尺寸为250×4.6mm，填料粒径为5μm；流动相为甲醇和0.05mol/L磷酸二氢钠溶液，且甲醇和0.05mol/L磷酸二氢钠溶液体积比为35:65，用三乙胺调pH值至6.5；所用紫外检测器的检测波长为215nm；流速为1.0mL/min；进样体积为20μL，柱温为35℃。本发明可准确测定琥乙红霉素制剂中琥乙红霉素的含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。
文档编号G01N30/02GK102854259SQ20121026492
公开日2013年1月2日 申请日期2012年7月29日 优先权日2012年7月29日
发明者尹杨青, 黄文平 申请人:安徽皖仪科技股份有限公司