一种高效液相色谱法分离测定依折麦布及有关物质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法分离和测定依折麦 布及有关物质的方法。
【背景技术】
[0002] 依折麦布是降胆固醇药物，可单独或与HMG-CoA还原酶抑制剂(他汀类）联合应 用于治疗原发性(杂合子家族性或非家族性）高胆固醇血症，可降低总胆固醇、低密度脂蛋 白胆固醇、载脂蛋白、非高密度脂蛋白胆固醇；还可用于纯合子家族性高胆固醇血症的治 疗。分子式为C 24H21F2NO3，化学名为1- (4-氟苯基）-3 (R) - [3- (4-氟苯基）-3 (S)-羟丙基]_ 4 (S)-(4-羟苯基）-2-吖丁啶（氮杂环丁烷）酮，其化学结构式如下：
在依折麦布合成过程中，会产生一些相关的杂质物质如生产过程中产生的副产物或中 间体或降解产物等，这些杂质可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，目前，已知 的杂质物质有6种，分别为：有关物质1 (副广物杂质)、有关物质2 (副广物杂质)、有关物质 3 (中间体杂质)、有关物质4 (中间体杂质)、有关物质5 (既是副产物又是降解杂质)和有关 物质6 (降解杂质)，这6种杂质物质的结构式如下：
对于依折麦布合成工艺中引入的上述副产物和中间体，在依折麦布原料药中需要进行 质量控制，而依折麦布相关的降解杂质需要在依折麦布原料药及制剂中进行质量控制，因 此，实现依折麦布及有关物质的分离和测定对依折麦布原料及制剂的生产和贮存具有重要 的意义。
[0003] 目前对于依折麦布有关物质的分析检测方法有进口注册标准（JX20070201 )，采用 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0. 〇5mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈：四氢呋喃（65 :25 : 10)为流动相进行等度洗脱，流速为I. 〇ml/min，检测波长为232nm，柱温为25°C，进样体积 为30 μ 1，检测时间为主峰保留时间的2倍，但是，该标准的方法对上述的有关物质3和有关 物质4不能检出；在碱降解试验中，有关物质6和其他降解杂质不能分离。
[0004] 另外，申请号为201210337025. 1的发明专利中公开了一种用液相色谱法分离测 定依折麦布有关物质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比 例的酸性水溶液-有机相为流动相，定量测定依折麦布及其有关物质的含量，酸性水溶液 的酸为磷酸、碳酸、甲酸、乙酸中的一种，有机相为甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇中的一种；申请 号为201410015689. 5的发明专利公开了一种用液相色谱法分离测定依折麦布中间体有关 物质化学纯度的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的磷 酸水溶液-有机相为流动相，定量测定依折麦布中间体及其有关物质的含量，有机相为甲 醇、乙腈、丙醇、异丙醇中的一种；但是同样，采用申请号为201210337025. 1的发明专利中 公开的方法和申请号为201410015689. 5的发明专利中公开的方法均不能完全分离检测上 述杂质，说明目前现有技术中公开的方法均不能同时适用于上述的6种杂质的检测。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高效液相色谱法分离测定依折麦布及有关 物质的方法，该方法适用于上述6种有关物质的分离和检测，可同时实现上述6种有关物质 的分离和检测，提高了分离检测的效率。
[0006] 为实现上述目的，本发明的技术方案为： 一种高效液相色谱法分离测定依折麦布及有关物质的方法，所述高效液相色谱法分析 过程中采用的色谱柱是以苯基硅烷键合硅胶为填料，以溶液A和有机溶剂B按一定比例混 合为流动相进行洗脱；所述的溶液A为酸的水溶液、乙腈和甲醇的混合溶液。
[0007] 本发明所述的方法适用于上述的6种杂质的分离和测定，可用于单独检测某一种 杂质，也可同时分离和检测这6种杂质，与现有技术相比，本发明的方法更快捷，提高了效 率，具有显著的进步性。
[0008] 上述的方法中，所述酸为磷酸、甲酸、乙酸、柠檬酸和三氟乙酸中的一种或多种，优 选为磷酸。
[0009] 上述的方法中，所述酸的水溶液的体积百分浓度为0. 05-0. 15%，优选为0. 1%。
[0010] 上述的方法中，所述有机溶剂B为乙腈和/或甲醇，优选为乙腈。
[0011] 本发明所述的高效液相色谱方法为反相液相色谱法，采用的色谱柱是以苯基硅烷 键合硅胶为填料，所述苯基硅烷键合硅胶颗粒粒径为3-5 μ m，优选粒径为5 μ m。所述的 苯基硅烷键合硅胶色谱柱柱长为150-250mm，优选为250mm。采用所述的色谱柱进行分离 时，色谱柱适用的柱温范围为20-40°C，优选为30°C。在本发明的一个【具体实施方式】中， 色谱柱为苯基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（Phenomenex Luna Phenyl Hexyl,型号为 250mmX4. 6mm,5 μ m)〇
[0012] 优选的，本发明所述的一种高效液相色谱法分离测定依折麦布及有关物质的方 法，当采用所述流动相进行洗脱时，流动相的流速为0. 5-1. 5ml/min，优选为1.0 ml/min。
[0013] 上述方法中，优选的，所述溶液A中酸的水溶液、乙腈和甲醇的体积比为 40-55:35-50:10,更优选的，所述溶液A中酸的水溶液、乙腈和甲醇的体积比为48:42:10。
[0014] 上述的方法中，以溶液A和有机溶剂B按一定比例混合为流动相进行梯度洗脱，所 述梯度比例为： Omin，溶液A与有机溶剂B的体积比为100:0 ; 25min，溶液A与有机溶剂B的体积比为100:0 ; 35min，溶液A与有机溶剂B的体积比为55:45 ; 45min，溶液A与有机溶剂B的体积比为55:45 ; 46min，溶液A与有机溶剂B的体积比为100:0 ; 55min，溶液A与有机溶剂B的体积比为100:0。
[0015] 洗脱时，流动相的流速为0· 5-1. 5ml/min，优选为1.0 ml/min。
[0016] 洗脱后采用紫外检测器进行检测，DAD检测器和VWD均适用，检测波长为232nm。
[0017] 本发明所述的一种高效液相色谱法分离测定依折麦布及有关物质的方法，在进行 高效液相色谱法分析之前，对照品或待测样品均需先溶解，在本发明中，采用所述的溶液A 溶解对照品或待测样品。
[0018] 本发明所述的方法，在一个【具体实施方式】中，按照以下方法实现： 取依折麦布、有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物质6 对照品各适量，用〇. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折麦布 200 μ g、有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5和有关物质6各2 μ g 的系统适用性溶液。
[0019] 取依折麦布对照品，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解，配制成每1ml 含〇. 2 μ g的对照品溶液。
[0020] 取待测样品（依折麦布或含依折麦布药物组合物）适量，用0.1%磷酸溶液-乙 腈-甲醇（48:42:10)溶解，配制成每1ml含依折麦布200 μ g的供试品溶液，分别取系统 适用性溶液、供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，按本发明色谱条件(色谱柱填料 为苯基硅烷键合硅胶，柱长为250mm，检测波长为232nm，以0· 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇 (48:42:10)和乙腈为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱的比例如表1所示，流动相的流速为 1.0 ml/min，色谱柱柱温箱温度为30°C，进样体积为30 μ 1)进行测定，按带校正因子的对照 品外标法计算供试品中各已知杂质的含量，按对照品外标法计算供试品中其他单个杂质的 含量,总杂质为各已知杂质与其他单个杂质之和。
[0021] 本发明的方法还可对依折麦布碱降解杂