一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析技术领域，涉及一种叔丁基肼盐酸盐的定量分析方法，具体涉及 一种利用柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方法。
【背景技术】
[0002] 叔丁基肼盐酸盐（Tertbutylhydrazinehydrochloride)，又名特丁基肼盐酸 盐，是一种重要的农药中间体；是合成抑食肼（RH-5849)、虫酰肼（Tebufenozide)、氯虫酰 餅（Halofenozide)、甲氧虫酰餅（Methoxyfenozide)、环虫酰餅（Chromafenozide)及_螨 灵（Pyridben)等杀虫剂的重要原料。由于叔丁基肼盐酸盐在生产过程中引入较多的盐酸 肼且不易分离。因此，对叔丁基肼盐酸盐的质量控制，直接影响到合成产物的质量。
[0003] 目前报道的叔丁基肼盐酸盐的测定方法主要有三种：（1)碘量法(氧化还原滴定）； (2)将叔丁基肼盐酸盐衍生化后利用气相色谱法进行测定 [1]; (3)利用离子色谱法检测叔 丁基肼盐酸盐[2]。
[0004] 以上三种方法均有不足之处。方法一测定过程中，由于叔丁基肼盐酸盐生产过程 中会引入盐酸肼的干扰，影响含量测定结果的准确性；方法二测定过程中，衍生物的沸点较 高，且溶剂影响较大；方法三中采用的离子色谱仪价格昂贵，不利用推广。
[0005] 本发明采用普及率较高的高效液相色谱仪，柱前衍生化法对叔丁基肼盐酸盐进行 测定。该方法精密度高，重现性好，准确度高，样品处理简单易行，方便可靠。
【发明内容】
[0006] 本发明所述的柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方法，采用高 效液相色谱仪检测，外标法进行定量。
[0007] 具体步骤包括。
[0008] (1)叔丁基肼盐酸盐对照品溶液的配置：取叔丁基肼盐酸盐对照品（> 98%) -定 量，精密称定，配制成10mg/mL的叔丁基肼盐酸盐对照品溶液。
[0009] (2)叔丁基肼盐酸盐样品溶液的配置：取叔丁基肼盐酸盐(约90%)适量，精密称 定，配制成约10mg/mL的叔丁基肼盐酸盐样品溶液。
[0010] (3)衍生试剂的配置：所述的衍生试剂为苯甲醛。取苯甲醛(分析纯)适量，配制成 40mg/mL的苯甲醛的无水乙醇溶液。
[0011] (4)衍生方法：取上述叔丁基肼盐酸盐溶液一定量置25mL容量瓶中，加入等体积 衍生试剂和PH=5. 0的磷酸盐缓冲溶液lmL，置恒温水浴振荡器中，30°C振摇90min。放冷， 甲醇定容至刻度。
[0012] (5)色谱条件：所述的高效液相色谱仪为依利特1201高效液相色谱仪，紫外可变 检测器；HypersilBDSC18 (5ym，4. 6X250mm)色谱柱；柱温25°C;流动相为甲醇；流速为 1.OmL/min;检测波长为298nm;进样量20yL(定量环）。
[0013] (6)测定方法：分别取叔丁基肼盐酸盐对照品溶液0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7mL置 25mL容量瓶中，按照步骤（4)衍生方法反应结束后，分别取0. 5mL置lOmL容量瓶中，甲醇定 容，0.45ym滤膜过滤。按照步骤（5)色谱条件进行分析，记录峰面积。采用外标法绘制叔 丁基肼盐酸盐浓度-叔丁基肼盐酸盐衍生物峰面积标准曲线，并得出标准曲线回归方程。
[0014] 另取叔丁基肼盐酸盐样品溶液适量，按照步骤（4)衍生方法反应结束后，分别取 0. 5mL置10mL容量瓶中，甲醇定容，0. 45ym滤膜过滤。按照步骤（5)色谱条件进行分析， 记录峰面积。根据步骤（6)中回归方程计算叔丁基肼盐酸盐浓度，进而根据叔丁基肼盐酸 盐样溶液配制方法计算得出叔丁基肼盐酸盐的含量。
[0015] 所述衍生试剂为苯甲醛。
[0016] 所述叔丁基肼盐酸盐与衍生试剂用量为1:3-1:5;优选1:4。
[0017] 所述衍生反应温度为30 °C。
[0018] 所述衍生反应时间为90min。
[0019] 所述衍生反应条件为PH=5. 0。
[0020]所述色谱柱温度为25-35°C，此温度范围内，其他色谱条件不变的情况下，叔丁基 肼盐酸盐衍生物均能与其他杂质实现完全分离。
[0021] 所述色谱柱温度优选25 °C。
[0022] 所述流动相为甲醇、水。在其他色谱条件不变的情况下，甲醇和水的比例在 100:0-70:30范围内，叔丁基肼盐酸盐均能与其他杂质实现完全分离，且系统适用性实验 满足含量测定的要求。
[0023] 所述流动相为甲醇。
[0024] 所述流动相流速在0. 8mL/min-1. 2mL/min范围内，叔丁基肼盐酸盐衍生物均能 与其他杂质实现完全分离。
[0025] 所述流动相流速为1. 0mL/min。
[0026] 所述检测波长为298nm。
[0027] 所述检测方法中每次测量进样量为20yL。
[0028] 本发明与现有技术相比，利用柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐 的方法的建立，能完全消除样品中主要杂质盐酸肼的干扰，保证了测量结果的准确性；该方 法衍生反应条件温和、反应进行完全；具有较高的精密度；重现性和重复性良好；实验仪器 设备普及率高且操作方法简便易行，方便可靠。
【附图说明】
[0029] 图1衍生试剂高效液相色谱图。
[0030] 图2盐酸肼衍生物高效液相色谱图。
[0031] 图3叔丁基肼盐酸盐对照品高效液相色谱图。
[0032] 图4叔丁基肼盐酸盐样品高效液相色谱图。
[0033] 图5实施实例一叔丁基肼盐酸盐标准曲线。
[0034] 图6实施实例二叔丁基肼盐酸盐标准曲线。
[0035] 图7实施实例三叔丁基肼盐酸盐标准曲线。
[0036] 图8衍生时间与衍生物峰面积关系图。
【具体实施方式】
[0037] 实施实例一。
[0038] 对照品溶液的配制：精密称取叔丁基肼盐酸盐对照品0. 1000g(精确至 0.OOOlg)，置10ml容量瓶中，用超纯水溶解并定容至刻度。配制成10mg/mL的对照品溶液。
[0039] 样品溶液的配制：精密称取叔丁基肼盐酸盐样品0. 1100g(精确至0. 0001g)，置 l〇ml容量瓶中，用超纯水溶解并定容至刻度。配制成含叔丁基肼盐酸盐约10mg/mL的样品 溶液。
[0040] 衍生试剂的配制：称取苯甲醛0. 40g(精确至0. 01g)，置10ml容量瓶中，用无水乙 醇溶解并定容至刻度。配制成含苯甲醛40mg/mL的衍生试剂。
[0041] 标准曲线的绘制：分别准确量取对照品溶液0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7mL置25mL容量 瓶中，加入等量的衍生试剂和PH=5. 0的磷酸盐缓冲溶液lmL，置恒温水浴振荡器中，30°C振 摇90min。放冷，甲醇定容至刻度。取衍生溶液lmL置10mL容量瓶中，甲醇定容。0.45ym 滤膜过滤后，按照步骤（5)中色谱条件测定3次并记录峰面积。结果如表1所示。
[0042] 表1标准曲线测定实验结果。
【主权项】
1. 一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方法，其特征在于：采用 柱前衍生化、高效液相色谱法进行测定、外标法定量分析，具体步骤包括： (1) 分别配制叔丁基肼盐酸盐对照品、样品及衍生试剂溶液，分别量取一定量对照品 溶液，加入等体积的衍生试剂溶液、PH5.O缓冲溶液；30°C振摇90min;放冷，甲醇定容至刻 度； (2) 分别量取一定量衍生试液，采用高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐衍生物并记 录峰面积，外标法绘制叔丁基肼盐酸盐浓度-叔丁基肼盐酸盐衍生物峰面积标准曲线，得 出标准曲线回归方程； (3) 量取一定量叔丁基肼盐酸盐样品溶液，按照步骤（1)的衍生方法衍生结束后，采用 高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐衍生物，并记录峰面积，根据步骤（2)中回归方程计算 并得出叔丁基肼盐酸盐含量； 所述色谱条件为：高效液相色谱仪为依利特1201高效液相色谱仪，紫外可变检测器；HypersilBDSC18 (5ym，4.6X250mm)色谱柱；柱温 25-35°C;流动相为 70% -100% (v/v) 甲醇水溶液；流速为〇. 8 -I. 2mL/min;检测波长为298nm;进样量20yL。
2. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方 法，其特征在于：所述的衍生试剂为苯甲醛。
3. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的 方法，其特征在于：所述的叔丁基肼盐酸盐与衍生试剂用量为1:3-1:5 (w/w)。
4. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方 法，其特征在于：所述的衍生反应温度为30°C。
5. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方 法，其特征在于：所述的衍生反应时间为90min。
6. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方 法，其特征在于：所述的衍生反应条件为PH=5. 0。
7. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方 法，其特征在于：所述色谱柱温度为25- 35°C。
8. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方 法，其特征在于：所述流动相为甲醇：水=100:0- 70:30。
9. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方 法，其特征在于：所述流动相流速为0. 8mL/min-I. 2mL/min。
10. 根据权利要求1所述的一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的 方法，其特征在于：所述检测波长为298nm。
【专利摘要】本发明公开了一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方法。以苯甲醛为衍生试剂，PH=5.0、30℃反应90min。采用依利特1201高效液相色谱仪，紫外可变检测器；Hypersil BDS C18（5μm,4.6×250mm）色谱柱；柱温25—35℃；流动相为70%—100%（v/v）甲醇水溶液；流速为0.8—1.2mL/min；检测波长为298nm；进样量20μL进行测定，并记录峰面积。采用外标法绘制叔丁基肼盐酸盐浓度-叔丁基肼盐酸盐衍生物峰面积标准曲线，得出标准曲线回归方程。进而计算得出叔丁基肼盐酸盐含量。本发明能够排除含量测定过程中盐酸肼的干扰，对叔丁基肼盐酸盐进行准确定量。该方法衍生反应进行完全，操作简便易行，方便可靠，且易于普及推广，具有较高的准确度和精密度。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104820056
【申请号】CN201510242105
【发明人】刘立业, 丁元生, 史晋宜, 刘巧玉
【申请人】吉林化工学院
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月14日