一种采用高效液相色谱法测定样品中甲卡西酮含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及刑侦领域毒品检测领域，特别涉及采用高效液相色谱法测定样品中甲 卡西酮含量的方法。
【背景技术】
[0002] 甲卡西酮是近年来出现的对人体有相当危害的新型毒品。这种危害不仅影响人体 的生理状况，还会影响人的心理活动，过量还会导致死亡。甲卡西酮的滥用不仅对人体有危 害，而且对社会的发展也会造成不利影响。在国家食品药品监管总局、公安部、国家卫生计 生委发布的2007版《麻醉药品和精神药品品种目录》中，将甲卡西酮列为一类精神药品予 以管制。
[0003] 甲卡西酮系统化学命名为：N-甲基卡西酮，其化学结构式如式（1)所示：
[0005] 现有技术有采用气相色谱/质谱联用法、红外光谱分析法、高效液相色谱法以及 液质联用技术等测定甲卡西酮样品含量。其中，在利用液相色谱法检测的过程中，仍然存在 检测时间长，检测效率低下的技术问题，导致刑侦工作效率的降低。故急需一种高精度的， 并能够在更短时间内实现样品中甲卡西酮检测的方法。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明在于提供一种精密度高、检测时间短的高效液相色谱法测定甲 卡西酮样品含量的方法。
[0007] 本发明是通过如下技术方案实现的：一种采用高效液相色谱法测定样品中甲卡西 酮含量的方法，其包括如下步骤：
[0008] (1)工作液的配制；
[0009] (2)样品溶液的配制；
[0010] ⑶检测条件的设置；
[0011] ⑷样品中甲卡西酮含量的测定；
[0012] (5)实验结果计算，
[0013] 其中，步骤（3)中，色谱柱采用反相苯基色谱柱，流动相为A-I~5mM乙酸铵缓冲 液：B-乙腈，A:B = (20 ~40) : (60-80)，流速为 I. 0-1. 5mL/min。
[0014] 上述方法的步骤（3)中，步骤（3)中，A-pH = 5. 0的4mM乙酸铵缓冲液乙腈， A:B = 20:80，流速为 I. 2mL/min。
[0015] 上述方法采用内标法定量，选择2-苯乙胺作为内标物质。
[0016] 上述方法的步骤（1)中，取甲卡西酮标准储备溶液，用质量浓度为0. lmg/mL的 内标物质的溶液依次稀释成甲卡西酮质量浓度分别为〇. 5、0. 1、0. 05、0. 01、0. 005、0. 001、 0. 0005mg/mL的系列标准溶液，并保持内标溶液的浓度均为0. 01mg/mL。
[0017] 上述方法的步骤（2)中：称取样品，加入流动相溶解，振荡，离心，离心后取上清 液，加入内标物质，并加入流动相，振荡均匀后即得到样品溶液；流动相与步骤（3)中的流 动相相同。
[0018] 上述方法采用外标法定量，其中，步骤（1)中，取甲卡西酮标准储备溶液，依次稀 释成质量浓度分别为〇. 5、0. 1、0. 05、0. 01、0. 005、0. 001、0. 0005mg/mL的系列标准溶液。
[0019] 上述方法的步骤（2)中：称取样品，加入流动相溶解，振荡，离心，离心后取上清 液，加入流动相，振荡均匀后即得到样品溶液；流动相与步骤（3)中的流动相相同。
[0020] 上述方法的步骤（3)中色谱柱规格为250mmX 4. 6mm，5 μ m，柱温为35°C，检测波长 254nm〇
[0021] 上述方法中，流动相使用前经0. 45 μπι微孔过滤膜过滤后放入超声波清洗器中超 声10~15min，充分脱出流动相中的气体。
[0022] 上述方法中，在向样品中加入流动相之前，使用苯甲醚、二氯甲烷和乙醚的混合溶 液萃取样品中的甲卡西酮，苯甲醚、二氯甲烷和乙醚的体积比为5:2:1. 5,向分离出的有机 相中加入HCl质量分数为15%的盐酸，除去有机相后将剩余物置于35°C快速浓缩仪上浓 缩至干。
[0023] 本发明的有益效果是：
[0024] 1)现有技术中，由于甲卡西酮与黄麻碱在色谱检测中难于分离，为了确保获得良 好的分离度，只能采取降低流速的方式，提高分离度、改善峰形，导致甲卡西酮的检测时间 通常在20分钟以上；而发明人通过大量试验发现，导致现有技术中检测时间长的主要因 素在于流动相中酸性改性剂选择的不当，有机相比例不能过高，通过筛选大量改性剂，发明 人发现当使用酸性乙酸铵缓冲液时，可以通过增加有机相比例，大大缩短检测时间，同时还 能确保待测物质甲卡西酮与相关杂质黄麻碱的高分离度、高理论塔板数等技术效果，通过 试验证明，本发明可以将甲卡西酮的检测时间缩短至12分钟左右，将近现有技术用时的一 半，大大提高检测效率，为实际中刑侦工作的有效开展提供了有力保障。
[0025] 2)本发明采用了内标法定量，相比于现有技术中的外标法定量，由于内标法避免 了由于进样的一致性及样品歧视效应导致的偶然误差，因而，它的分析精密度比较高，是一 种比较理想的定量分析方法，本发明中标准工作曲线R2达到1 ;其中，内标物质种类的确 定是建立内标分析方法中的难点之一，内标物种类将直接影响检测结果的精确度、准确性， 内标选择不当将直接导致检测无法实现，发明人通过大量试验，确定2-苯乙胺作为内标物 质，其与甲卡西酮分离度良好，实现了甲卡西酮的精确定量。
【附图说明】
[0026] 图1是甲卡西酮及其合成前体麻黄碱的液相色谱图，1-甲卡西酮，2-黄麻碱；
[0027] 图2是甲卡西酮和内标的液相色谱图，1-甲卡西酮，2-内标；
[0028] 图3是甲卡西酮的内标工作曲线；
[0029] 图4甲卡西酮的紫外吸收光谱；
[0030] 图5水-甲醇（90:10)液相图谱；
[0031] 图6 pH = 3. 5的甲酸水溶液-乙腈（95:5)液相图谱；
[0032] 图7 pH = 4的甲酸水溶液-乙腈（95:5)液相图谱；
[0033] 图8 0. 05 %三氟乙酸做为流动相的液相图谱；
[0034] 图9 150mm苯基柱的液相图谱；
[0035] 图10卡西酮、麻黄碱、甲卡西酮和4-甲基甲卡西酮的混标图；
[0036] 图11三氟乙酸做为流动相的液相色谱图；
[0037] 图12A-图12C各缓冲盐浓度与柱效曲线。
【具体实施方式】
[0038] 实施例1:内标法定量检测
[0039] 本发明采用高效液相色谱法测定样品中甲卡西酮含量的方法，包括如下步骤：
[0040] (1)工作液的配制：取甲卡西酮标准储备溶液，用质量浓度为0. lmg/mL的内标 物质2-苯乙胺的溶液依次稀释成甲卡西酮质量浓度分别为0. 5、0. 1、0. 05、0. 01、0. 005、 0. 001、0. 0005mg/mL的系列标准溶液，并保持内标溶液的浓度均为0. 01mg/mL。
[0041] (2)样品溶液的配制：称取样品检材约45mg(本实施例的样品检材是使用甲卡西 酮标准品与其它物质混合后制备的，甲卡西酮含量为51. 32wt% )，用瓶口移液器加入20mL 流动相提取，振荡10分钟，离心5分钟，离心后用ImL移液器吸取上清液lmL，加入约0.1 mg 内标物质2-苯乙胺，并用瓶口移液器加入IOmL流动相，振荡均匀后取I. 5mL装自动进样 瓶，即得到样品溶液；
[0042] (3)检测条件的设置：采用Agilent Z:〇rbax?: SB-Phenyl色谱柱，规格为 250mmX4. 6mm, 5 μπι，色谱条件：A-pH = 5. O的4mM乙酸铵缓冲液：B-乙腈=20:80【本发 明中，乙酸铵缓冲液是以乙酸根的浓度计算，4mM即为4mmol/L，乙酸铵缓冲溶液与乙腈的 比例为体积比】，流速I. 2mL/min，柱温35°C，检测波长254nm ;
[0043] (4)样品中甲卡西酮含量的测定，取样品溶液5yL进样检测；
[0044] (5)实验结果计算，利用内标法定量计算，即利用标准工作曲线，最终得到的待测 甲卡西酮样品中甲卡西酮的质量含量为：51. 22wt%。
[0045] 其中，流动相使用前经0. 45 μπι微孔过滤膜过滤后放入超声波清洗器中超声10~ 15miη，充分脱出流动相中的气体。
[0046] 结果显示，甲卡西酮拖尾因子1. 586,理论塔板数为13726,甲卡西酮峰形较好，和 麻黄碱能完全分开，液相色谱图如图1所示。
[0047] 实施例2 :外标法定量检测
[0048] (1)工作液的配制；取甲卡西酮标准储备溶液，依次稀释成质量浓度分别为0. 5、 0· 1、0· 05、0· 01、0· 005、0· 001、(X 0005mg/mL 的系列标准溶液。
[0049] (2)样品溶液的配制：称取样品检材约45mg(本实施例的样品检材是使用甲卡西