质进行分离测定，碱降解待测样品的制备 如下： 取依折麦布适量，置量瓶中，加0.0 lmol/L乙醇制氢氧化钠溶液IOml使溶解，密塞，于 55°C加热15分钟，取出，立即加0. lmol/L盐酸溶液2ml，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇 (48:42:10)溶解，配制成每1ml含依折麦布200 μ g的供试品溶液，取30 μ 1注入高效液相 色谱仪，按照上述的色谱条件完成依折麦布碱降解杂质的测定。
[0022] 表1梯度洗脱溶液A与有机溶剂B的体积
本发明的有益效果在于：（I)本发明的一种高效液相色谱法分离测定依折麦布及有关 物质的方法，该方法对上述的6种有关物质均能适用，可以同时对其中的一种或多种有关 物质进行分离检测，与现有技术相比，提高了分离检测的效率；（2)利用本发明的方法检测 依折麦布碱降解杂质，能更准确、更有效地将有关物质6和其他降解杂质有效分离开，进口 注册标准（JX20070201)方法却不能分离有关物质6和其他降解杂质。
[0023] 因此本发明的方法与现有技术相比，检测结果更准确，从而能更精准的确保依折 麦布原料及其制剂的质量可控，并最终确定产品的安全有效。
[0024]
【附图说明】 图1为实施例1和实施例2中系统适用性溶液的HPLC图（图中12. 910出峰为依折麦 布）； 图2为实施例1中测定依折麦布有关物质HPLC图（图中12. 704出峰为依折麦布）； 图3为实施例2中测定依折麦布片有关物质HPLC图（图中12. 717出峰为依折麦布）； 图4为对比例1中系统适用性溶液HPLC图（图中30. 443出峰为依折麦布）； 图5为对比例1中有关物质3和有关物质4混合溶液HPLC图； 图6为实施例3中采用本发明方法测定依折麦布碱降解溶液HPLC图（图中13. 365出 峰为依折麦布）； 图7为对比实施例2中采用进口注册标准方法测定依折麦布碱降解溶液HPLC图（图中 27.981出峰为依折麦布）； 图8为对比实施例2中采用本发明方法测定碱降解溶液中RRTL 52峰的收集液HPLC 图； 图9为对比实施例2中保留时间为17. 498min峰的[M+H]质谱图； 图10为对比实施例2中保留时间为17. 498min峰的[M-Η]质谱图。
[0025]
【具体实施方式】 所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所 举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
【发明内容】
对实施方案进行非本质的改进和 调整，仍属于本发明的保护范围。
[0026] 以下实施例中，本发明的方法中，采用的仪器及色谱条件如下： (1)高效液相色谱仪：Waters-2695-2487 (Waters); 检测器：UV ; 色谱工作站：Empower。
[0027] (2)色谱柱：以苯基硅烷键合硅胶为填充剂，硅胶颗粒粒径为5 μ m，色谱柱柱长 250mm，直径为 4. 6mm。
[0028] (3)质谱仪：API3000 ; 工作站：Analystl. 4. 2 ; 尚子源：ESI ;。
[0029] (4)流动相 溶液A :0. 1%磷酸溶液、乙腈和甲醇按体积比48 :42 :10混合； 有机溶剂B :乙腈。
[0030] (5)检测条件 流动相：溶液A和有机溶剂B按照下表所示的体积比例进行混合作为流动相进行梯度 洗脱； 流动相流速：1.0ml/min ; 柱温箱温度：30°C ; 洗脱后检测器检测波长：232nm ; 进样量：30 μ 1。
[0031] 实施例1依折麦布原料药有关物质的测定 取依折麦布、有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物质6 对照品各适量，用〇. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折麦布 200 μ g，有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5和有关物质6各2 μ g 的系统适用性溶液。
[0032] 取依折麦布对照品，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解并配制成每 Iml含0. 2 μ g的对照品溶液。
[0033] 取依折麦布原料药适量，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解，配制成 每1ml含依折麦布200 μ g的供试品溶液。
[0034] 分别取系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱 条件进行测定，记录色谱图，结果见图1和图2。按带校正因子的对照品外标法计算供试品 中各已知杂质的含量，按对照品外标法计算供试品中其他单个杂质的含量，总杂质为各已 知杂质与其他单个杂质之和。
[0035] 计算公式如下： 100 (C/ff) (FAt/As)； 式中：C为对照品洛液中依折麦布浓度，μ g/ml ; W为供试品溶液浓度，μ g/ml ; At为供试品溶液中各杂质峰的峰面积； As为对照品洛液中依折麦布峰面积； F为各杂质的校正因子。
[0036] 实施例2依折麦布制剂(依折麦布片）中有关物质的测定 取依折麦布、有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物质6 对照品各适量，用〇. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折麦布 200 μ g，有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5和有关物质6各2 μ g 的系统适用性溶液。
[0037] 取依折麦布对照品，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解并配制成每 Iml含0. 4 μ g的对照品溶液。
[0038] 取依折麦布片研细，取适量，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)超声处理 30分钟（随时振摇)，配制成每1ml含依折麦布200 μ g的供试品溶液，分别取系统适用性溶 液、对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，结 果见图1和图3。按带校正因子的对照品外标法计算供试品中各已知杂质的含量，按对照品 外标法计算供试品中其他单个杂质的含量，总杂质为各已知杂质与其他单个杂质之和。
[0039] 计算公式如下： 100 (C/ff) (FAt/As)； 式中：C为对照品洛液中依折麦布浓度，μ g/ml ; W为供试品溶液浓度，μ g/ml ; At为供试品溶液中各杂质峰的峰面积； As为对照品洛液中依折麦布峰面积； F为各杂质的校正因子。
[0040] 对比实施例1进口注册标准（JX20070201)测定依折麦布有关物质 进口注册标准（JX20070201)测定依折麦布有关物质的色谱条件为： 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（Hypersil BDS C18)，柱长150mm，直径4. 6mm，十八烷 基硅烷键合硅胶颗粒粒径为5 μ m。
[0041] 流动相：0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液、乙腈、四氢呋喃按照体积比65 :25 :10的比 例混合为流动相。
[0042] 检测波长：232nm ; 进样量：30μ 1 ; 检测时间：主峰的2倍保留时间。
[0043] 取依折麦布、有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物 质6对照品各适量，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折 麦布200 μ g，有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5和有关物质6各 2μ g的系统适用性溶液，取该溶液注入液相色谱仪，按进口注册标准（JX20070201)的色谱 条件进行测定，记录色谱图，结果见图4。
[0044] 图4和实施例1中图1相比，检出已知杂质峰的个数为4个，有两个已知杂质有关 物质3和有关物质4未检出。
[0045] 另外再取有关物质3和有关物质4对照品各适量，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇 (48:42:10)溶解，配制成每1ml含有关物质3和有关物质4各20 μ g的