专利名称：铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法
技术领域：
本发明涉及水体叶绿素a检测技术领域，尤其是一种廉价的、且能够在线实时对水体中叶绿素a的含量进行测定的方法。
背景技术：
对于水体中叶绿素a含量的测定，相较于紫外分光光度法、高效液相色谱法等传统方法的步骤繁杂、费时且不便于在线监测等缺点，直接荧光法操作更简便、灵敏度更高，且结果与传统方法相比无显著性差异。荧光法测定叶绿素基本原理是当叶绿素a经波长为450nm左右的光激发后，会发出波长为680nm左右的荧光，荧光光强与叶绿素a含量有关因此，通过测定特定光强下浮游植物发出的叶绿素荧光强度就能检测到叶绿素a的浓度。目前荧光法中用到的叶绿素a标准品多购自与国外，价格昂贵且剂量较小难以满足大量水体叶绿素含量分析实验的进行。针对这一现状，采用淡水湖泊中最常见且实验室极易培养的铜绿微囊藻作为研究对象，利用荧光法对比测定藻液叶绿素a提取液与叶绿素a标准品的荧光值，做出铜绿微囊藻藻液的直接荧光法校准曲线。从而直接利用此校正曲线测定水体中叶绿素a含量。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法，不仅十分廉价，而且能够在线实时对水体中叶绿素a的含量进行测定。为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法，该方法包括如下步骤A、铜绿微囊藻叶绿素a标准溶液的制备取铜绿微囊藻液，抽滤，抽滤完毕后取下滤膜，将滤膜夹在滤纸中冷冻，反复冻融，使细胞完全裂解以利于叶绿素a的提取；将滤膜放入比色管中，加入95%乙醇定容，放入4°C冰箱中静置，然后以4000r/min离心15min，将上清液分别转移至容量瓶中用95%乙醇定各；作为储备液备用；B、储备液中叶绿素a浓度的测定用国标法标定储备液中叶绿素a的浓度，以相应的95%乙醇作为空白，用紫外分光光度计测定储备液扫描波长在750nm、664nm、645nm和630nm处的吸光值，将测得的结果
数据带入国标法计算公式
权利要求
1.铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法，其特征步骤包括: A、铜绿微囊藻叶绿素a标准溶液的制备 取铜绿微囊藻液，抽滤，抽滤完毕后取下滤膜，将滤膜夹在滤纸中冷冻，反复冻融，使细胞完全裂解以利于叶绿素a的提取；将滤膜放入比色管中，加入95%乙醇定容，放入4°C冰箱中静置，然后以4000r/min离心15min，将上清液分别转移至容量瓶中用95%乙醇定容；作为储备液备用； B、储备液中叶绿素a浓度的测定 用国标法标定储备液中叶绿素a的浓度，以相应的95%乙醇作为空白，用紫外分光光度计测定储备液扫描波长在750nm、664nm、645nm和630nm处的吸光值,将测得的结果数据带入国标法计算公式:
2.根据权利要求1所述的铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法，其特征在于:步骤A的具体操作步骤如下:取200ml铜绿微囊藻液，用装好乙酸纤维滤膜的抽滤装置分四次对藻液进行抽滤，抽滤完毕后取下滤膜，将滤膜夹在滤纸中放入_20°C冰箱中冷冻，每隔30min取出在室温中解冻15min，反复冻融3次，使细胞完全裂解以利于叶绿素a的提取；将滤膜放入50ml比色管中，加入95%乙醇定容，盖上塞子振摇l-2min,放入4°C冰箱中静置,每隔30min取出振摇一次,反复操作3次,然后以4000r/min离心15min，将上清液分别转移至50ml容量瓶中用95%乙醇定容；作为储备液备用。
3.根据权利要求1所述的铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法，其特征在于:步骤E -1和E-2中，采用步骤C的荧光测定条件进行荧光测定。
全文摘要
本发明公开了一种利用铜绿微囊藻替代叶绿素标准物质快速实时测定水体叶绿素的方法，该方法包括如下步骤A.铜绿微囊藻叶绿素ａ标准溶液的制备；B.储备液中叶绿素ａ浓度的测定，用国标法标定储备液中叶绿素ａ的浓度；C.储备液荧光测定，分别测定各溶液的荧光强度；D.铜绿微囊藻标准荧光曲线的建立，将储备液的浓度对其荧光强度作图绘制铜绿微囊藻叶绿素ａ荧光法曲线；E.铜绿微囊藻校正荧光曲线的建立。根据所建立的铜绿微囊藻藻液荧光强度和叶绿素ａ浓度之间的校正曲线，只需采用荧光仪直接测出水样的荧光强度，便可实时、快速得到叶绿素ａ的浓度。
文档编号G01N21/64GK103076297SQ20121058653
公开日2013年5月1日 申请日期2012年12月27日 优先权日2012年12月27日
发明者崔建升, 程玉欣, 王晓辉, 王改珍 申请人:河北科技大学