专利名称：快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及免疫学应用技术领域，特别是ー种利用胶体金免疫层析法快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒。
背景技术：
铁蛋白(Ferritin)，存在于身体内各种细胞中，尤其以肝脏及网状内 皮系统细胞浓度最高；其主要功能是将细胞中过多的游离态铁质释放出来，以供身体使用。因此，铁蛋白为身体组织中主要贮存铁质的ー种蛋白，是维持铁质平衡中不可缺少的ー种重要蛋白。正常的情况下，血清中每lng/ml的铁蛋白，约相当于身体8-10mg之铁蛋白贮存量；所以血清中铁蛋白浓度，可以直接反映出人体铁代谢的健康状况，通过铁蛋白浓度測定人体铁元素代谢状况已逐渐普及，并发现其除了作为估计体内的总贮存量外，铁蛋白浓度尚可作为辅助指标用于肝病、及某些恶性肿瘤的诊断。临床应用I.铁蛋白值直接反映体内铁元素储藏量,作为贫血的诊断指标。2.作为某些疾病特别是肝病(如肝癌)的辅助指标，提高癌症诊断的准确率。铁蛋白有參考值为男性15 200ng/ml,女性12 150ng/ml,儿童7 140ng/ml。由于检测方法的不同和地区差异，參考值略有变化。一般低于30ng/ml则有缺铁性贫血的倾向，需要相应的铁补充。大于300ng/ml应考虑是否存在其它疾病。免疫层析胶体金技术是新型且较为简单的诊断技术，已得到相当广泛的应用，基本原理为利用胶体金标记ー种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测(T)线，通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
发明内容本实用新型的目的是为了解决上述问题，设计了ー种快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒。实现上述目的本实用新型的技术方案为，ー种快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，包括试剂盒，且试剂盒内包含有铁蛋白外检测单元和比色卡。所述铁蛋白外检测单元可为能够检测铁蛋白的试纸条或者试剂卡。所述试剂卡的结构为PVC板上的中间处粘贴硝酸纤维素膜，胶体金垫的一端搭接在硝酸纤维素膜的左侧上，另一端上搭接上样垫，硝酸纤维素膜的右侧上搭接样品吸收垫，且硝酸纤维素膜上设有用铁蛋白抗体包被的检测线T线和用抗鼠免疫球蛋白包被的质控线C线。所述比色卡上设有显色线色标和试剂显示窗ロ。[0013]所述上样垫是用无纺布制作的，而样片吸收垫是用吸水滤纸制作的。利用本实用新型的技术方案制作的快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，利用胶体金免疫层析技术实现半定量监测铁蛋白体外检测试剂，具有操作简便、设备及环境依赖少、反应快速、半定量准确度高、特异性好、适合现场快速检测和经济实用等优点。·
图I是本实用新型所述快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒的结构示意图；图2是本实用新型所述试剂卡的结构示意图；图中，I、上样垫；2、胶体金垫；3、硝酸纤维素膜；4、样品吸收垫；5、检测T线；6、质控C线；7、PVC板；8、试剂盒；9、检测单元；10、比色卡；11、显色线色标；12、试剂显示窗□。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型进行具体描述，如图I是本实用新型所述快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒的结构示意图，图2是本实用新型所述试剂卡的结构示意图，如图所示，ー种快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，包括试剂盒8，且试剂盒内包含有铁蛋白外检测单元9和比色卡10。其中，所述铁蛋白外检测单元可为能够检测铁蛋白的试纸条或者试剂卡；所述试剂卡的结构为PVC板7上的中间处粘贴硝酸纤维素膜3，胶体金垫2的一端搭接在硝酸纤维素膜的左侧上，另一端上搭接上样垫1，硝酸纤维素膜的右侧上搭接样品吸收垫4，且硝酸纤维素膜上设有用铁蛋白抗体包被的检测线T线5和用抗鼠免疫球蛋白包被的质控线C线6 ;所述比色卡上设有显色线色标11和试剂显示窗ロ12;所述上样垫是用无纺布制作的，而样片吸收垫是用吸水滤纸制作的。下面以试剂卡为例，具体的检测方法为将被检血清、血浆或全血平衡至温室，将试剂卡平放，在胶体金垫上加入10 μ I血清/血浆或20 μ I全血，并在上样垫上加入I滴(50-80 μ I)样本稀释液，样品溶解胶体金并在NC膜上层析，然后用肉眼直接观察，在15-20分钟内C、T线的反应情况，将配套比色卡放置在试剂卡上，且比色卡上的试剂显示窗ロ对着试剂卡上的变色区域上，即检测线T线所在区域，将检测T线上的顔色与显色线色标相对比，判定被检测试剂上的铁蛋白含量。如果检测单元为试纸条，则可直接将试纸条上的变色区域与比色卡上的显色线色标相对比，得出结果。所述T线和C线的铁蛋白抗体包被方法为以O. 003Μ, pH = 7. 2磷酸盐缓冲液(PB)将抗体稀释至O. 18mg/mL，用喷膜机在NC膜确定位置以O. 09 μ 1/mm參数进行T线包被，同时在NC膜上另ー确定位置以铁蛋白抗体包被C线，后，将NC膜至于干燥间，其环境为温度20-25で，湿度小于30%。干燥8-10小时。胶体金垫的制备方法为以氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为30_50nm的胶体金颗粒溶胶，制备完成后取IOOml胶体金液于烧杯内，用O. 2MK2C03调至pH7. 5，按IOOml胶体金溶液加入O. 5mg铁蛋白抗体的比例混合，室温搅拌2小时，加入1%体积20% (m/V)牛血清白蛋白(BSA)，O. 5%体积 20% (m/V)聚こニ醇(PEG) 20000 封闭 20min，12000rpm 离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至76. 5ml，按Iml溶液铺22cm2的比例均匀地铺在无纺布上，再置于干燥间，其环境为温度20-25°C，湿度小于30%。干燥2-4小时，制成胶体金垫。上述技术方案仅体现了本实用新型技术方案的优选技术方案，本技术领域的技术人员对其中某些部分所可能做出的一些变动均体现了本实用新型的原理，属于本实用新型的保护范围之内。·
权利要求1.ー种快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，包括试剂盒(8)，其特征在干，试剂盒内包含有铁蛋白外检测单元(9)和比色卡(10)。
2.根据权利要求I所述的快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，其特征在于，所述铁蛋白外检测单元可为能够检测铁蛋白的试纸条或者试剂卡。
3.根据权利要求I所述的快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，其特征在于，所述试剂卡的结构为PVC板(7)上的中间处粘贴硝酸纤维素膜(3)，胶体金垫(2)的一端搭接在硝酸纤维素膜的左侧上，另一端上搭接上样垫(I)，硝酸纤维素膜的右侧上搭接样品吸收垫(4)，且硝酸纤维素膜上设有用铁蛋白抗体包被的检测线T线(5)和用抗鼠免疫球蛋白包被的质控线C线(6)。
4.根据权利要求I所述的快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，其特征在于，所述比色卡上设有显色线色标(11)和试剂显示窗ロ(12)。
5.根据权利要求I所述的快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，其特征在于，所述上样垫是用无纺布制作的，而样片吸收垫是用吸水滤纸制作的。
专利摘要本实用新型公开了一种快速半定量检测铁蛋白浓度的体外检测试剂盒，包括试剂盒，且试剂盒内包含有铁蛋白外检测单元和比色卡。本实用新型的有益效果是，半定量检测，检测速度快，精度高。
文档编号G01N33/68GK202631544SQ20122014102
公开日2012年12月26日 申请日期2012年4月6日 优先权日2012年4月6日
发明者李洲, 孙宏瑜 申请人:天津中新科炬生物制药有限公司