专利名称：一种金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及的是检测试纸，具体的是一种金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸。
背景技术：
金黄色葡萄球菌aureus是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属知70C0CCM)，有“嗜肉菌〃的别称， 是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。而目前尚无一种非常有效、快速的检测培养物中金黄色葡萄球菌的方法，通用的方法为将培养物在适当的培养基中进行培养，看目标菌种是否出现，该方法耗时长，非常不方便。金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A, SPA)是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。早在1940年，Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中，含有一种物质，在双向扩散试验中能与正常人血清形成沉淀。Jensen也发现类似现象，并将其命名为A抗原。直到1963年Lofkvist等分离了该抗原，并证明它是一种蛋白质。为与A与糖相区另ij，Grov将其命名为金黄色葡萄球菌A蛋白，简称SPA或蛋白A。由于SPA的一些免疫特性，它已发展成为免疫学上一种极为有用的工具。因此，可根据SPA的免疫特性发明一种检测金黄色葡萄球菌是否存在的装置。
发明内容本实用新型的发明目的是针对上述问题提供一种金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸，解决目前检测金黄色葡萄球菌是否存在的方法耗时长，非常不方便的问题。本实用新型通过以下技术方案来实现一种金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸，该试纸包括塑料底板、微孔滤膜、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、滤纸，塑料底板上依次贴有微孔滤膜、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和滤纸；所述的玻璃纤维素膜上有胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I，硝酸纤维素膜上有SPA单克隆抗体II条带。上述的硝酸纤维素膜上还有羊抗鼠IgG条带，SPA单克隆抗体II条带和羊抗鼠IgG条带平行设置，且SPA单克隆抗体II条带位于胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带之间。采用上述技术方案的积极效果本实用新型利用抗原抗体反应和免疫层析技术的原理，将SPA单克隆抗体制备到试纸上，通过SPA单克隆抗体会与金黄色葡萄球菌A蛋白结合的特性，通过胶体金颗粒显色，检测出SPA的存在，进而证明金黄色葡萄球菌的存在；同时，增加了羊抗鼠IgG条带，可以灵敏地检测出本实用新型是否失效，方便使用。
[0009]图I是本实用新型的俯视图；图2是本实用新型的装配示意图。图中1塑料底板、2微孔滤膜、3玻璃纤维素膜、4硝酸纤维素膜、5滤纸、6 SPA单克隆抗体II条带、7羊抗鼠IgG条带。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型作进一步说明图I是本实用新型的俯视图，图2是本实用新型的装配示意图，结合图I、图2所示，一种金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸，该试纸包括塑料底板I、微孔滤膜2、玻璃纤维素膜3、硝酸纤维素膜4、滤纸5，塑料底板I上依次贴有微孔滤膜2、玻璃纤维素膜3、硝酸纤维素膜4和滤纸5。微孔滤膜2是用于加样的，滤纸5主要用于吸取多余液体。玻璃纤维素膜3上有胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I，利用抗原抗体反应，如果待测溶液中含有SPA的话，SPA会和胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I相结合。硝酸纤维素膜4上有SPA单克隆抗体II条带6,由于SPA单克隆抗体II被喷涂成条带状,这样SPA与胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I结合后形成的复合物会继续和SPA单克隆抗体II相结合，从而在SPA单克隆抗体II条带6处发生沉积，产生显色，从而判断待测溶液中是否含有SPA。为了能够随时检测出试纸是否失效，在SPA单克隆抗体II条带6不显色的情况下判断出是因为待测溶液中不含有SPA，还是由于试纸失效导致胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I消失，在硝酸纤维素膜4上还设置有羊抗鼠IgG条带7，SPA单克隆抗体II条带6和羊抗鼠IgG条带7平行设置，且SPA单克隆抗体II条带6位于胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带7之间。因为SPA单克隆抗体I和SPA单克隆抗体II均来源于小鼠，因此羊抗鼠IgG是可以和SPA单克隆抗体I和SPA单克隆抗体II相互结合的，由于SPA单克隆抗体I还标记有胶体金颗粒，当标记有胶体金颗粒的SPA单克隆抗体I和羊抗鼠IgG相结合时，会在羊抗鼠IgG条带7处发生沉积，从而显色。在正常情况上，试纸上有一定量的标记有胶体金颗粒的SPA单克隆抗体I，不管待测液体中是否含有SPA，标记有胶体金颗粒的SPA单克隆抗体I都会和羊抗鼠IgG相结合，从而使羊抗鼠IgG条带7处显色；如果试纸已经失效了，即没有标记有胶体金颗粒的SPA单克隆抗体I时，羊抗鼠IgG条带7也就不会发生显色反应了，此时，提醒实验人员需要重新更换试纸进行检测。当该试纸条用来检测样品时，把预处理过的样品滴于该试纸条的微孔滤膜2处，样品由于毛细作用进行侧向层析，经过玻璃纤维素膜3，若样品中有SPA，其会与胶体金标记的SPA单克隆抗体I结合，形成Ag-Ab I -胶体金复合物。然后继续渗移，与硝酸纤维素膜4上固定的SPA单克隆抗体II结合，形成Ab II -Ag-Ab I -胶体金复合物，从而在SPA单克隆抗体II条带6处发生沉积，呈肉眼可见的条带。然后继续渗移，由于SPA单克隆抗体I和SPA单克隆抗体II均来源于小鼠，当遇到羊抗鼠IgG条带7时，会和羊抗鼠IgG发生结合，胶体金标记的SPA单克隆抗体I在羊抗鼠IgG条带7处呈现肉眼可见的条带。若样品中没有SPA，则不会形成Ag-Ab I -胶体金复合物，从而不会和SPA单克隆抗体II结合，SPA单克隆抗体II条带6不显色。但是，无论样品中是否有SPA，胶体金标记的SPA单克隆抗体I均会在毛细作用下渗移到羊抗鼠IgG条带7处，同羊抗鼠IgG结合，使羊抗鼠IgG条带7显色。检测中，如果SPA单克隆抗体II条带6和羊抗鼠IgG条带7均显色，证明待测溶液中含有SPA，进而证明金黄色葡萄球菌的存在；如果SPA单克隆抗体II条带6不显色，羊抗鼠IgG条带7显色，证明待测溶液中不含有SPA，也就不含有金黄色葡萄球菌；如果SPA单 克隆抗体II条带6和羊抗鼠IgG条带7均不显色，证明试纸条已经失效，需要重新更换试纸进行检测。
权利要求1.一种金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸，其特征在于该试纸包括塑料底板(I)、微孔滤膜(2)、玻璃纤维素膜(3)、硝酸纤维素膜(4)、滤纸(5)，塑料底板(I)上依次贴有微孔滤膜(2)、玻璃纤维素膜(3)、硝酸纤维素膜(4)和滤纸(5);所述的玻璃纤维素膜(3)上有胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I，硝酸纤维素膜(4)上有SPA单克隆抗体II条带(6)。
2.根据权利要求I所述的一种金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸，其特征在于所述的硝酸纤维素膜(4)上还有羊抗鼠IgG条带(7)，SPA单克隆抗体II条带(6)和羊抗鼠IgG条带(7)平行设置，且SPA单克隆抗体II条带(6)位于胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带(7)之间。
专利摘要本实用新型涉及的是一种金黄色葡萄球菌胶体金检测试纸，该试纸包括塑料底板(1)、微孔滤膜(2)、玻璃纤维素膜(3)、硝酸纤维素膜(4)、滤纸(5)，塑料底板(1)上依次贴有微孔滤膜(2)、玻璃纤维素膜(3)、硝酸纤维素膜(4)和滤纸(5)；所述的玻璃纤维素膜(3)上有胶体金颗粒标记的SPA单克隆抗体Ⅰ，硝酸纤维素膜(4)上有SPA单克隆抗体Ⅱ条带(6)。本实用新型利用抗原抗体反应和免疫层析技术的原理，将SPA单克隆抗体制备到试纸上，通过SPA单克隆抗体会与SPA结合的特性，通过胶体金颗粒显色，检测出SPA的存在，进而判断金黄色葡萄球菌是否存在，方便使用。
文档编号G01N33/569GK202512119SQ20122016652
公开日2012年10月31日 申请日期2012年4月19日 优先权日2012年4月19日
发明者卢杰, 卢珍, 韩锋玉 申请人:大庆医学高等专科学校