一种治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种由马蹄金、铁包金等制成的治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，该检测方法包括该组方制剂中多种组分的鉴别测试方法和/或含量测定方法。本发明为该组方制剂提供了一套可靠、稳定、全新的检测方法，使该制剂的工艺控制更加严格合理，质量更加稳定，为患者用药的有效性、安全性提供了保障。
【专利说明】一种治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明是一种治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，属于中药的【技术领域】。
【背景技术】
[0002]肝炎是肝脏的炎症，作为一种高发性传播疾病，肝炎已经已经严重威胁我们的身体健康和日常生活。我国患有肝病的患者比例很高，尤其是慢性的肝炎，治疗时间长，容易反复，长期发展有可能会变成肝癌。金马肝泰颗粒，其主要成分为马蹄金、铁包金、马鞭草、防己、败酱草、淫羊藿、黄芪、赤芍、丹参九味中药材，作为民族药具有清热解毒、健脾利湿、活血化瘀的功效，主要用于肝胆湿热、气滞血瘀所致的急、慢性肝炎。
[0003]药物制剂必须要在保证产品质量稳定可控的基础之上，才能不断的更新发展。为了更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地，需要进一步深入研究控制制剂质量的检测方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于:提供一种治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，这种方法针对金马肝泰颗粒的生产、检测提供检测的指标、检测的手段、技术方法等，以便更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地。
[0005]所述产品的制备工艺如下:马蹄金、铁包金、马鞭草、防己、败酱草、淫羊藿、黄芪、赤芍和丹参九味药材，加水煎煮，滤过，滤液浓缩，冷至室温，加乙醇，搅拌均匀，放置，滤过，滤液回收乙醇，药液浓缩成稠膏，稠膏加蔗糖制成颗粒，即得；或稠膏加糊精制成颗粒，颗粒成型后再喷入羟丙甲基纤维素溶液，制成颗粒，即得(无蔗糖)。也可采用以下工艺:取药物，加入6倍水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为70-75°C时
1.14-1.16的清膏，冷却至室温，加入等量正丁醇萃取2次，合并正丁醇液，水液加盐酸调节PH为3-4，加入等量正丁醇萃取2次，合并正丁醇溶液，水液用氨水调节pH为9-10，加入等量正丁醇萃取2次，合并所有正丁醇液，减压回收溶剂至相对密度为50-60°C时1.34-1.40的稠膏加入辅料，制成的颗粒剂。
[0006]我国中药材来源复杂，药材的种植、采摘、加工、贮存远未做到标准化，因此质量非常参差，大大影响了成药的质量稳定性。至此需要科学的检测方法对中成药加以衡量。每个中成药试剂是一个大复方，是一个药用系统，即使所谓的单方，其组分也是复杂的。而中药组方多为复方，方中包括多味药，每一种药含有多种成分，而在制剂过程中，多味药混合在一起还会发生可逆或不可逆的化学反应，绝大多数中成药的治疗作用都是一种混合成分的综合治疗结果。正因为中药组成成分复杂，其中的有效成分难于确定，不少成药指标为生药量，或者是药材有效部位的含量，但生药量或有效部位含量相等的成药并不一定具有相同的临床疗效。保证药品的质量，实质是为了保证病人能获得良好的治疗。衡量一个成药的质量，需要客观有效的检测方法。[0007]本发明是这样构成的:所述药物制剂的是由下列有效药物原料组成:马蹄金288.2g、铁包金153.3g、马鞭草115g、防己191.6g、败酱草115g、淫羊藿153.3g、黄芪153.3g、赤芍153.3g、丹参230g。所述药物制剂的检测方法为包括以下全部或部分内容:
[0008](I)防己药材、粉防己碱、黄芪药材、黄芪甲苷、赤芍药材、芍药苷、马鞭草药材、丹参药材、丹参素钠、淫羊藿药材、淫羊藿苷中全部或部分物质的鉴别测试方法；
[0009](2)制剂中芍药苷、淫羊藿苷全部或部分成分的含量测试方法。
[0010]进一步说:检测方法为包括以下全部或部分内容:
[0011](I)丹参药材、丹参素钠、粉防己碱、淫羊藿苷、芍药苷、赤芍药材的薄层色谱鉴别测试方法；
[0012](2)制剂中芍药苷的含量测试方法。
[0013]再进一步说:丹参药材、丹参素钠、粉防己碱、苟药苷、苟药苷、赤苟药材的薄层色谱鉴别测试方法如下:
[0014](I)取本品2袋，研细，加乙醚-氯仿-乙醇-氨水(45:15:4.5:1.5)混合液适量，加热回流(75°C ) I小时，倾出上清液，蒸干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取粉防己碱对照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇=(4-7:0.5-2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0015](2)取本品I袋，研细，加乙醇50ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。取赤芍对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取芍药苷对照品适量，力口乙醇制成每Iml含Img的溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-lOul，分别点于同一娃胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(3-6:0.5-2:0.05-0.2)为展开剂,展开,取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0016](3)取本品I袋，研细，加水20ml使溶解，加稀盐酸调pH值至2，加醋酸乙酯20ml振摇提取，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材0.5g，加水适量，煎煮半小时，滤过，滤液加水至10ml，同法制成对照药材溶液。另取丹参素钠对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5-10ul,分别点于同一娃胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(15-35:5_20:
2-6)为展开剂,展开,取出，晾干。置氨气中熏后，取出，放置10分钟,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑
占.[0017](4)取本品2袋，研细，加水30ml，超声处理使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振摇提取3次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解,作为供试品溶液；另取淫羊霍苷对照品,加甲醇制成每Iml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5-15:0.5-2:0.3-2:0.3-2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。[0018]制剂中芍药苷的含量测试方法如下:
[0019]照高效液相色谱法，用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸=20-35:79.7-64.9:0.1-0.3 为流动相；检测波长 225_235nm ;柱温 25-40°C ;流量 0.6-1.0ml/min ；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000 ;精密称取芍药苷对照品适量，加50%甲醇溶液使溶解，制成每Iml含0.1mg的对照品溶液；取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取0.5g或0.1g (无蔗糖)，精密称定，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，滤液作为供试品溶液；分别精密吸取对照品及供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标一点法计算含量。
[0020]丹参药材、丹参素钠、粉防己碱、芍药苷、淫羊藿苷、赤芍药材的最佳薄层色谱鉴别测试方法如下:
[0021](I)取本品2袋，研细，加乙醚-氯仿-乙醇-氨水(45:15:4.5:1.5)混合液适量，加热回流(75°C ) I小时，倾出上清液，蒸干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取粉防己碱对照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇(5:I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0022](2)取本品I袋，研细，加乙醇50ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。取赤芍对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取芍药苷对照品适量，力口乙醇制成每Iml含Img的溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各lOul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水(4:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0023](3)取本品I袋，研细，加水20ml使溶解，加稀盐酸调pH值至2，加醋酸乙酯20ml振摇提取，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材0.5g，加水适量，煎煮半小时，滤过，滤液加水至10ml，同法制成对照药材溶液。另取丹参素钠对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(25:10:4)为展开剂，展开，取出，晾干。置氨气中熏后，取出，放置10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0024](4)取本品2袋，研细，加水30ml，超声处理使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振摇提取3次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解,作为供试品溶液；另取淫羊霍苷对照品,加甲醇制成每Iml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:1:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
[0025]制剂中芍药苷的最佳含量测试方法如下:
[0026]照高效液相色谱法，用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸=30:[0027]69. 9 ：0. I为流动相；检测波长230nm ;柱温30°C ;流量lml/min ;理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000 ;精密称取芍药苷对照品适量，加50%甲醇溶液使溶解，制成每Iml含O. Img的对照品溶液；取本品装量差异项下的内容物,混匀,研细,取O. 5g或O. Ig (无鹿糖），精密称定，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜（0.45μπι)滤过，滤液作为供试品溶液；分别精密吸取对照品及供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标一点法计算含量。
[0028]本 申请人:进过大量实验研究，所提供的方法适合本产品的检测方法。
[0029]实验例I鉴别测试方法研究
[0030]I、粉防己碱的薄层色谱鉴别方法
[0031]
【权利要求】
1.一种治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，该药物制剂是由下列有效药物原料组成:马蹄金288.2g、铁包金153.3g、马鞭草115g、防己191.6g、败酱草115g、淫羊藿153.3g、黄芪153.3g、赤芍153.3g、丹参230g，其特征在于:所述药物制剂的检测方法为包括以下全部或部分内容: (1)防己药材、粉防己碱、黄芪药材、黄芪甲苷、赤芍药材、芍药苷、马鞭草药材、丹参药材、丹参素钠、淫羊藿药材、淫羊藿苷中全部或部分物质的鉴别测试方法； (2)制剂中芍药苷、淫羊藿苷全部或部分成分的含量测试方法。
2.按照权利要求1所述的治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，其特征在于:所述药物制剂的检测方法为包括以下全部或部分内容: (1)丹参药材、丹参素钠、粉防己碱、淫羊藿苷、芍药苷、赤芍药材的薄层色谱鉴别测试方法； (2)制剂中芍药苷的含量测试方法。
3.按照权利要求2所述的治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，其特征在于:丹参药材、丹参素钠、粉防己碱、淫羊藿苷、芍药苷、赤芍药材的薄层色谱鉴别测试方法如下: (1)取本品2袋，研细，加乙醚-氯仿-乙醇-氨水=45:15:4.5:1.5混合液适量，75°C加热回流I小时，倾出上清液，蒸干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取粉防己碱对照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10 μ I,分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烧:甲醇=4-7:0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2)取本品I袋，研细，加乙醇50ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液；取赤芍对照 药材0.5g，同法制成对照药材溶液；另取芍药苷对照品适量，加乙醇制成每Iml含Img的溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿_甲醇_氨水=3-6:0.5-2:0.05-0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以，5%香草醛硫酸溶液，105°C烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)取本品I袋,研细,加水20ml使溶解，加稀盐酸调pH值至2，加醋酸乙酯20ml振摇提取，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材，0.5g，加水适量，煎煮半小时，滤过，滤液加水至10ml，同法制成对照药材溶液；另取丹参素钠对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5-10ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸=15-35:5_20:，2-6为展开剂，展开，取出，晾干；置氨气中熏后，取出，放置10分钟，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4)取本品2袋，研细，加水30ml，超声处理使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振摇提取3次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊霍苷对照品，加甲醇制成每Iml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水=5-15:0.5-2:0.3-2:0.3-2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
4.按照权利要求2所述的治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，其特征在于:制剂中芍药苷的含量测试方法如下: 照高效液相色谱法，用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸=20-35:79.7-64.9:0.1-0.3 为流动相；检测波长 225_235nm ;柱温 25-40°C ;流量 0.6-1.0ml/min ；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000 ;精密称取芍药苷对照品适量，加50%甲醇溶液使溶解，制成每Iml含0.1mg的对照品溶液；取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，含糖型取0.5g或无蔗糖型取0.1g,精密称定，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用0.45 μ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；分别精密吸取对照品及供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标一点法计算含量。
5.按照权利要求3所述的治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，其特征在于:丹参药材、丹参素钠、粉防己碱、芍药苷、淫羊藿苷、赤芍药材的最佳薄层色谱鉴别测试方法如下: (1)取本品2袋，研细，加乙醚-氯仿-乙醇-氨水=45:15:4.5:1.5混合液适量，75°C加热回流I小时，倾出上清液，蒸干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取粉防己碱对照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇=5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2)取本品I袋，研细，加乙醇50ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液；取赤芍对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；另取芍药苷对照品适量，加乙醇制成每Iml含Img的溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各lOul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水=4:1:0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)取本品I袋,研细,加水20ml使溶解，加稀盐酸调pH值至2，加醋酸乙酯20ml振摇提取，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材`0.5g，加水适量，煎煮半小时，滤过，滤液加水至10ml，同法制成对照药材溶液；另取丹参素钠对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸=25:10:4为展开剂，展开，取出，晾干；置氨气中熏后，取出，放置10分钟，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4)取本品2袋，研细，加水30ml，超声处理使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，弃去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振摇提取3次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊霍苷对照品，加甲醇制成每Iml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水=10:1:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
6.按照权利要求4所述的治疗肝炎的金马肝泰制剂的检测方法，其特征在于:制剂中芍药苷的含量测试方法如下: 照高效液相色谱法，用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸=30:69.9:0.1为流动相；检测波长230nm ;柱温30°C ;流量lml/min ;理论板数按苟药苷峰计算应不低于`3000 ;精密称取芍药苷对照品适量，加50%甲醇溶液使溶解，制成每Iml含0.1mg的对照品溶液；取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，含糖型取0.5g或无蔗糖型取0.lg，精密称定，精密加入甲醇IOml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用0.45 μ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；分别精密吸取对照品及供试品溶液各`10μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标一点法计算含量。
【文档编号】G01N1/28GK103487548SQ201310455389
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年9月30日 优先权日:2013年9月30日
【发明者】邬建明 申请人:邬建明