试样的分析方法、其中使用的溶液以及试样分析用盒的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种能够提高分析精度的使用毛细管电泳的试样的分析方法、其中使用的溶液以及试样分析用盒。在一种方式中涉及试样分析方法，包括通过毛细管电泳进行试样中的分析对象物质的分离和／或检测，在pH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质的存在下进行分析对象物质的分离和／或检测。另外，在另一种方式中涉及毛细管电泳用溶液，含有pH缓冲物质、非表面活性剂型的两性离子物质和水。
【专利说明】试样的分析方法、其中使用的溶液以及试样分析用盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种试样的分析方法、毛细管电泳用溶液及试样分析用盒(kit)。
【背景技术】
[0002]作为利用了毛细管电泳法的血中蛋白质的分析方法，W02010-010859公开了通过毛细管电泳法分析血红蛋白的方法。W02010-010859公开了含有富马酸、硫氰酸钠、精氨酸和硫酸软骨素C的pH4.8的电泳液。另外，该文献还公开了血中蛋白质的分析时间在35秒以下。
[0003]JP2009-109230A公开了通过毛细管电泳法测定稳定型HbAlc的方法。作为电泳缓冲液，JP2009-109230A公开了含有亚硝酸钠和表面活性剂的柠檬酸缓冲液(pH6.0)或含有亚硝酸钾和硫酸葡聚糖的苹果酸缓冲液(PH5.2)。
[0004]JP2006-145537A公开了通过使用含有脂肪族二胺或脂肪族多胺等的流动抑制剂的两性离子缓冲液的毛细管电泳法分析血红蛋白的方法。作为分析缓冲溶液，JP2006-145537A公开了三(羟甲基)甲基甘氨酸/ 1，4-二氨基丁烷缓冲液(ρΗ9.37)、三(羟甲基)甲基甘氨酸/ 1，5_ 二氨基戊烷缓冲液(ρΗ9.37)、三(羟甲基)甲基甘氨酸/ 二乙烯三胺缓冲液(ΡΗ9.40)、三(羟甲基)甲基甘氨酸/ Ν，Ν，Ν’，Ν’_四甲基-1，4-丁二烯胺缓冲液(ρΗ9.19)。
[0005]JP09(1997)-510792A中作为适合糖化血红蛋白的毛管电泳检测的缓冲液，公开了含有水、糖络合化合物(硼酸、硼砂等)、为了使缓冲液为PH9?12的充分的碱化合物、以及pKa是9?12的两性离子化合物的缓冲液。
[0006]W02008-136321公开了通过毛细管电泳法进行的血红蛋白的分析方法。W02008-136321中作为毛细管中所含的缓冲液，公开了将非离子性表面活性剂(十二烷基麦芽糖苷等)添加到含有富马酸、精氨酸和硫酸软骨素C的缓冲液(pH4.8)中的缓冲液。
【发明内容】
[0007]使用毛细管电泳法的试样的分析方法有需要的试样少和装置能够小型化等优点。另一方面，从用于临床检查的观点看，更期待着提高精度和缩短分析时间。
[0008]可是，当要谋求缩短分析时间时，会引起电流值的增加和/或发热，有血红蛋白热变性、峰宽度增大、高铁血红蛋白发生、毛细管内中的气泡发生等的可能，存在分析精度不足的问题。例如，在W02010-010859中血红蛋白的热变性成为问题，在JP2009-109230A中由亚硝酸盐的添加引起电流值的增加导致的发热量的增加成为问题，任一个都难以提高分析精度。另外，在JP2006-145537A和JP09 (1997)-510792A中存在测定时间长(例如，10分钟以上)、实质上不能适用于希望在短时间内处理多个试样的临床检查的问题。而且，在W02008-136321的方法中有由于表面活性剂的作用从而血红蛋白变性、峰宽度增大、高铁血红蛋白发生等的可能，存在分析精度不足的问题。
[0009]因此，本发明在一个方式中提供一种能够提高分析精度的使用毛细管电泳的试样的分析方法、毛细管电泳用溶液、以及试样分析用盒。
[0010]本发明在一个方式中涉及试样分析方法，包括通过毛细管电泳进行试样中的分析对象物质的分离和/或检测，在pH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质的存在下进行分析对象物质的分离和/或检测。
[0011]本发明在其它方式中涉及毛细管电泳用溶液，该毛细管电泳用溶液含有pH缓冲物质、非表面活性剂型的两性离子物质和水。
[0012]本发明在其它方式中涉及试样分析用盒，该试样分析用盒包括本发明的毛细管电泳用溶液和毛细管电泳芯片，所述毛细管电泳芯片是包括试样保持槽、电泳缓冲液保持槽和毛细管流路，所述试样保持槽和所述电泳缓冲液保持槽通过所述毛细管流路连通的电泳
-H-* I I
心/T O
[0013]根据本发明，在一种方式中，可以提供一种能够提高分析精度的使用了毛细管电泳的试样的分析方法、毛细管电泳用溶液、或试样分析用盒。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1 (A)是示出毛细管电泳芯片的一种实施方式的平面图，图1 (B)是从1-1方向观察图1(A)所示的电泳芯片的截面图；
[0015]图2的(A)示出通过使用实施例1的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例，图2的(B)示出通过使用实施例2的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例，图2的(C)示出通过使用比较例I的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法的电泳图谱的一例；
[0016]图3的(A)示出通过使用实施例3的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例，图3的(B)示出通过使用实施例4的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例，图3的(C)示出通过使用比较例2的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例；
[0017]图4的(A)示出通过使用实施例5的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例，图4的(B)示出通过使用比较例3的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例，图4的(C)示出通过使用比较例4的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例；
[0018]图5示出通过使用实施例3的毛细管电泳用溶液的毛细管电泳法得到的电泳图谱的一例。
【具体实施方式】
[0019]本发明在一种方式中，基于以下见解:在毛细管电泳法的泳动中当使分离对象的物质组和非表面活性剂型的两性离子物质存在时，可以通过使电泳中的电流值降低来防止发热，由此可以提高分析精度。即，本发明在一种方式中涉及试样分析方法，包括通过毛细管电泳进行试样中的分析对象物质的分离和/或检测，在pH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质的存在下进行分析对象物质的分离和/或检测。另外，本发明在其它方式中涉及试样分析方法，包括将试样导入填充有电泳缓冲液的毛细管流路，以及对所述流路的全部或一部分施加电压来进行毛细管电泳，进行所述试样中的分析对象物质的分离和/或检测，在pH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质的存在下进行分析对象物质的分离和/或检测。[非表面活性剂型的两性离子物质]
[0020]在本发明中“非表面活性剂型的”是指在一种或多种实施方式中，不形成胶团。在本发明中“不形成胶团”是指在一种或多种实施方式中，在水性介质中不形成胶团或者实质上不形成胶团。在本发明中，“不形成胶团或者实质上不形成胶团”是指在一种或多种实施方式中，从提高分析精度的观点考虑，优选为临界胶团浓度(CMC)在200mmol / L以上，更优选为在300mmol / L以上，进一步优选为两性离子物质不带有临界胶团浓度。另外，非表面活性剂型的两性离子物质在一种或多种实施方式中，从提高分析精度的观点考虑，优选为不具有PH缓冲作用的物质，更优选为在泳动条件的PH中不发挥或者实质上不发挥pH缓冲作用的物质。在不被限定的一种或多种实施方式中，当作为后述的PH缓冲物质在泳动条件的pH附近具有pKa的物质的浓度是40mmol / L时，即使添加IOOmmol / L非表面活性剂型的两性离子物质，也优选为PH保持在0.2以下或0.1以下的变动，更优选为不使pH变动或不使PH实质上变动。在本发明中“泳动条件的pH”是指在一种或多种实施方式中，在泳动前被填充在毛细管内的电泳缓冲液(电泳缓冲液)的pH、或者试样或用于调制试样的试样调制液的pH。
[0021]在本发明中，作为“两性离子物质”，在不被限定的一种或多种实施方式中，可以举出两性离子或甜菜碱。在本发明中，“两性离子”也称作分子内盐，在一种或多种实施方式中，是指在I分子内带有正电荷和负电荷两者的分子。在本发明中，“甜菜碱”是指在同一分子内的不相邻隣位置带有正电荷和负电荷，不在带有正电荷的原子上结合可解离的氢原子，作为分子全部不带有电荷的化合物。在本发明中，“甜菜碱”在一种或多种实施方式中包括:给出负电荷基团是磺酸基(-SO3-)的磺酸甜菜碱、给出负电荷的基是羧基(-C00-)的羧基甜菜碱、给出负电荷的基是磷酸基(-PO4-)的磷酸甜菜碱。非表面活性剂型的两性离子物质在一种或多种实施方式中，从提高分析精度的观点考虑，优选为非表面活性剂型的甜菜碱，更优选地，可举出非表面活性剂型的磺酸甜菜碱和羟基甜菜碱，进一步优选为在同一分子内的不相邻位置具有季铵阳离子和磺酸基(-SO3-)或羧基(-C00-)的非表面活性剂型的物质，更进一步优选为非表面活性剂型磺酸甜菜碱(NDSB)。作为NDSB的不被限定的一种或多种实施方式，可以举出
[0022]
【权利要求】
1.一种试样的分析方法,包括: 通过毛细管电泳进行试样中的分析对象物质的分离和/或检测，其中， 在pH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质的存在下进行分析对象物质的分离和/或检测。
2.一种试样的分析方法，包括: 将试样导入填充有电泳缓冲液的毛细管流路，以及 对所述流路的全部或一部分施加电压来进行毛细管电泳，并进行所述试样中的分析对象物质的分离和/或检测，其特征在于， 在PH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质的存在下进行分析对象物质的分离和/或检测。
3.如权利要求1或2所述的试样分析方法，其中，在离子性的准固定相、pH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质的存在下进行分析对象物质的分离和/或检测。
4.如权利要求1至3中任一项所述的试样分析方法，其中，所述试样含有pH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质。
5.如权利要求1至4中任一项所述的试样分析方法，其中，所述试样含有离子性的准固定相、PH缓冲物质和非表面活性剂型的两性离子物质。
6.如权利要求1至5中任一项所述的试样分析方法，其中，非表面活性剂型的两性离子物质是不形成胶团的两性离子物质。
7.如权利要求1至6中任一项所述的试样分析方法，其中，非表面活性剂型的两性离子物质是不具有PH缓冲作用的物质。
8.如权利要求1至7中任一项所述的试样分析方法，其中，非表面活性剂型的两性离子物质是非表面活性剂型的甜菜碱。
9.如权利要求1至8中任一项所述的试样分析方法，其中，非表面活性剂型的两性离子物质是在同一分子内的不相邻位置具有季铵阳离子以及磺酸基(-SO3-)或羧基(-C00-)的物质。
10.如权利要求1至9中任一项所述的试样分析方法，其中，pH缓冲物质是其PKa或PKb的值被包含在泳动条件的pH的±2.0的范围内的物质。
11.如权利要求3至10中任一项所述的试样分析方法，其中，离子性的准固定相是阴离子性或阳尚子性的闻分子。
12.如权利要求1至11中任一项所述的试样分析方法，其中，试样是含有血红蛋白的试样。
13.如权利要求1至12中任一项所述的试样分析方法，其中，试样作为分析对象物质，含有被选自由稳定型HbAlc(S-HbAlc)、血红蛋白AO (HbAO)、血红蛋白Ala(HbAla)、血红蛋白Alb(HbAlb)、血红蛋白Ald(HbAld)、血红蛋白Ale(HbAle)、血红蛋白A2 (HbA2)、血红蛋白S(HbS、镰状红细胞血红蛋白)、血红蛋白F(HbF、胎儿血红蛋白)、血红蛋白M(HbM)、血红蛋白C(HbC)、血红蛋白D(HbD)、血红蛋白E(HbE)、高铁血红蛋白、氨甲酰化血红蛋白、乙酰化血红蛋白、醛化血红蛋白和不稳定型HbAlc(l — HbAlc)构成的组中的物质。
14.如权利要求1至13中任一项所述的试样分析方法，其中，毛细管电泳的电泳缓冲液的pH是3.0~6.9。
15.如权利要求1至14中任一项所述的试样分析方法，其中，离子性的准固定相是具有阴离子性基的多糖类。
16.—种毛细管电泳用溶液，含有pH缓冲物质、非表面活性剂型的两性离子物质和水。
17.如权利要求16所述的毛细管电泳用溶液，其中，还含有离子性的准固定相。
18.如权利要求16或17所述的毛细管电泳用溶液，其中，非表面活性剂型的两性离子物质是不形成胶团的两性离子物质。
19.如权利要求16至18中任一项所述的毛细管电泳用溶液，其中，非表面活性剂型的两性离子物质是不具有PH缓冲作用的物质。
20.如权利要求16至19中任一项所述的毛细管电泳用溶液，其中，非表面活性剂型的两性离子物质是非表面活性剂型的甜菜碱。
21.如权利要求16至20中任一项所述的毛细管电泳用溶液，其中，非表面活性剂型的两性离子物质是在同一分子内的不相邻位置具有季铵阳离子以及磺酸基(-SO3-)或羧基(-C0CT)的物质。
22.如权利要求16至21中任一项所述的毛细管电泳用溶液，其中，pH缓冲物质是其PKa或pKb的值被包含在泳动条件的pH的±2.0的范围内的物质。
23.如权利要求17至22中任一项所述的毛细管电泳用溶液，其中，离子性的准固定相是阴离子性或阳离子性的高分子。
24.如权利要求17至23中任一项所述的毛细管电泳用溶液，其中，离子性的准固定相是具有阴离子性基的多糖类。
25.如权利要求16至24中任一项所述的毛细管电泳用溶液，其中，电泳缓冲液的pH是3.0 ~6.9 ο
26.—种试样分析用盒,包括权利要求16至25中任一项所述的毛细管电泳用溶液和毛细管电泳芯片， 所述毛细管电泳芯片是包括试样保持槽、电泳缓冲液保持槽和毛细管流路，所述试样保持槽和所述电泳缓冲液保持槽通过所述毛细管流路连通的电泳芯片。
27.如权利要求26所述的试样分析用盒，其中，还包含校正用物质和/或精度对照用物质。
28.—种试样分析方法,包括: 将试样导入填充有电泳缓冲液的毛细管流路，以及 对所述流路的全部或一部分施加电压来进行毛细管电泳，并进行所述试样中的分析对象物质的分离和/或检测，还包括: 使含有阴离子性的准固定相以及具有2个以上酸性官能基的酸的液体，或者含有I个碱性官能基以及具有容易变成阴离子性的官能基的弱碱化合物的液体与以阳离子性物质覆盖毛细管内壁的毛细管接触。
【文档编号】G01N27/447GK103940887SQ201410030477
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年1月22日 优先权日:2013年1月22日
【发明者】大沼直嗣 申请人:爱科来株式会社