酶法测定血清中肌酐含量的检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种酶法测定血清中肌酐含量的检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2；所述试剂R1含有3～10g/LpH7.5～8.0的缓冲液、0.2～0.5g/LEDTA、0.5～2g/LN-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺钠盐、1‰～5‰表面活性剂、0.2～1g/L肌氨酸氧化酶、1～5KU/L抗坏血酸氧化酶、2～5KU/L肌酸酶和0.5～1g/L稳定剂；所述试剂R2含有3～10g/LpH7.5～8.0的缓冲液、0.1～0.5g/L4-氨基安替比林、0.1～0.4g/L高铁氰化钾、2～8g/L肌酐酶、1～6KU/L过氧化物酶和0.5～2g/L防腐剂。本发明稳定佳，抗干扰强，有较高临床应用价值。
【专利说明】酶法测定血清中肌酐含量的检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种酶法测定血清中肌酐(CRE)含量的检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]肌酐(creatinine, Cre)是肌肉在人体内代谢的产物,每20g肌肉代谢可产生Img肌酐。血中肌酐来自外源性和内源性两种，外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物；内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。在肉类食物摄入量稳定时，身体的肌肉代谢又没有大的变化，肌酐的生成就会比较恒定。
[0003]血清肌酐浓度测定是评价肾小球滤过率(GFR)的有效指标，在急性肾功能衰竭和慢性进行性肾功能衰竭时，血清肌酐的测定有助于临床判断病情，特别是儿科和肾移植病人的诊断病程判断疗效观察等，血清肌酐连续监测的结果更具临床参考价值但一个检验指标能否有效地应用于临床的前提是测定结果必须准确可靠，况且血清肌酐测定值又是计算GFR的数学依据，只有其测定结果准确和重复性好，才能保证GFR的准确计算。
[0004]目前实验室分析测定肌酐方法有毛细管电泳法高效液相层析法电极法酶法及化学测定法(即碱性苦味酸法)，后两种方法在临床试验中较常用。
[0005]碱性苦味酸法是运用肌酐与碱性苦味酸反应生成橙黄色的化合物，即JafTe反应，在波长505~520nm处检测吸光度，吸光度值与肌酐含量成线性比。但是胆红素在500~520nm波长处也有吸收峰值，同时，在氢氧化钠溶液中，血清中的胆红素可转化为胆绿素，胆绿素在波长620nm可有较强吸收，能减弱原吸收，此影响可掩盖JafTe反应的正常显色，最终导致肌酐检测结果出现偏差。有一种酶比色法的原理是以肌酐作为底物，经肌酐亚氨水解酶催化脱氨生成甲基乙内酰脲，氨与α -酮戊二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶的作用生成谷氨酸，NAD和水，在340nm波长下测定NADH的吸光度变化率，计算其含量。此方法虽然只需通过两步就能完成整个反应，但是样品中内源性氨成为主要干扰因素，对测定结果有影响。
【发明内容】
[0006]本发明的目的克服上述现有试剂盒存在的缺陷，提供一种酶法测定血清中肌酐(CRE)含量的检测试剂盒。采用本发明的酶法测试试剂盒来检测血清中的CRE含量，可达到操作简便、稳定性佳、特异性好，快速、测定结果准确可靠的目的。
[0007]本发明测定CRE含量的检测原理为:采用肌酐酰胺水解酶水解肌酐产生肌酸，肌酸酶水解肌酸产生肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶作用下产生H2O2，进而偶联过氧化物酶催化的Trinder反应比色测定,具体步骤如下:
[0008]
【权利要求】
1.一种酶法测定血清中肌酐含量的检测试剂盒，其特征在于，包含试剂Rl和试剂R2 ；所述试剂Rl含有3?10g/L pH = 7.5?8.0的缓冲液、0.2?0.5g/L EDTA,0.5?2g/LN-乙基-N- (2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺钠盐、1%。?5%。表面活性剂、0.2?lg/L肌氨酸氧化酶、I?5KU/L抗坏血酸氧化酶、2?5KU/L肌酸酶和0.5?lg/L稳定剂；所述试剂R2含有3?10g/L pH = 7.5?8.0的缓冲液、0.1?0.5g/L4_氨基安替比林、0.1?0.4g/L高铁氰化钾、2?8g/L肌酐酶、I?6KU/L过氧化物酶和0.5?2g/L防腐剂。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂Rl、R2中包含的缓冲液分别选自 TRIS、MOPS、HEPES 或 BICN。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂Rl、R2中包含的缓冲液均为MOPS。
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温20、吐温80或曲拉通X-100。
5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为多元醇、BSA或β_环糊精。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述多元醇包括甘露醇或丙三醇。
7.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为聚赖氨酸、山梨酸钾或乙酸钠。
8.一种根据权利要求1?7中任一项所述的检测试剂盒的使用方法，其特征在于，试剂Rl加入样本后37°C孵育5分钟，读取吸光度Atl,再加入试剂R2，37°C孵育5分钟，读取吸光度4，计算吸光度变化率ΛΑ = A1-A0 ;与CRE标准品的肌酐含量与吸光度关系曲线进行比较，得到样本的肌酐含量。
9.根据权利要求8所述的检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述试剂Rl和试剂R2的体积比为3: I。
10.根据权利要求8所述的检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述监测采用的主波长为546nm,副波长为700nm。
【文档编号】G01N21/31GK104198408SQ201410401289
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月14日 优先权日:2014年8月14日
【发明者】李伟奇, 陈瑛, 房君江, 张秀文, 林清玉 申请人:上海睿康生物科技有限公司