一种血清单胺氧化酶检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种生物检测试剂，具体设及一种用于临床测定血清中单胺氧化酶含 量的检测试剂盒，属于临床体外检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 单胺氧化酶（monoamineoxidase,MA0)为催化单胺氧化脱氨反应的酶，也被称为 含黄素胺氧化酶。单胺氧化酶(M0)存在两种同分异构体即单胺氧化酶A(M0-A)和单胺 氧化酶B(MA0-B)，他们都有一个黄素腺嚷岭二核巧酸W共价键连接到活性中屯、区域的半脱 氨酸残基上。他们能催化氧化生物体内的各种胺类物质：多己胺、5-哲基色胺、去甲肾上腺 素、色胺等，最终产物醒和双氧水与细胞的氧化密切相关。单胺氧化酶多见于脊椎动物的各 种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，但在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在。在细胞内存 在于线粒体外膜上，是不溶性酶。所W认为单胺氧化酶具有调节生物体内胺浓度的功能。
[0003] 血清单胺氧化酶的活性高低能反映肝纤维化的程度，是诊断肝硬化的重要指标。 诊断原理是M0在纤维形成后脱离，从而导致血清中单胺氧化酶的活性升高，一般肝硬化 患者血清M0活性升高的阳性率在80%W上，最高值可超过对照参考参考值的两倍。单胺 氧化酶活性会在甲亢、糖尿病合并脂肪肝、充血性屯、衰、肢端肥大症等疾病中升高。
[0004] 目前国内常用于血清单胺氧化酶（MA0)检测的方法有节醒偶氮蒙酪法、醒苯腺法 和紫外分光光度法。醒苯腺法通过M0氧化节胺，再与2,4二硝基苯阱作用生成的醒苯腺 在碱性条件下产生栋红色，于470皿比色测定，计算M0的浓度。醒苯腺法操作繁琐，抗干 扰能力差，不适于自动化分析。
[0005] 目前已普遍应用全自动生化分析仪，所W研制出一种酶比色法测定单胺氧化酶活 性，反应原理为通过M0催化胺类化合物生成氨，氨在过氧化氨、NADH、二氧化碳和甲胺的 存在下经过丙酬酸氧化酶和N-甲基丙氨酸脱氨酶的催化生成N-甲基丙氨酸，同时NADH还 原成NAD+，引起340nm处吸光度的下降，通过监测其下降的速率即可得出样本中M0的活 性。该种检测方法应用广泛，但是需要经过氧化氨路线测定丙酬酸的浓度，因为过氧化氨稳 定性差，所W会导致检测结果不准确。
[0006] 目前市场上用的比较多的是双试剂检测试剂盒，虽然双试剂可W调控酸碱度，但 是双试剂占据比较多的试剂舱位，并且在自动化仪器上操作繁琐，耗时比较长。
【发明内容】
[0007] 为解决上述技术操作繁琐、抗干扰能力差、不适于自动化分析等缺点，本发明提供 了一种操作简单、灵敏度高、抗干扰能力强、稳定性好的单胺氧化酶（M0)单试剂检测试剂 盒。
[0008] -种血清单胺氧化酶检测试剂盒，所述的试剂R是由W下含量的成分组成的： 肥阳S缓冲液（P服.5) lOOmM 节胺 20mM
【主权项】
1. 一种血清单胺氧化酶检测试剂盒，其特征在于，它只包含一种试剂R，通过MO催化 苄胺生成氨，氨在α -酮戊二酸、NADH和GLDH的存在下生成谷氨酸，同时NADH还原成NAD+， 引起340nm处吸光度的下降，通过监测其下降的速率即可得出样本中MO的活性，反应式如 下.
2. 根据权利要求1所述的一种血清单胺氧化酶检测试剂盒，其特征在于检测方法采用 辅酶NADH再生系统，通过添加微量的葡萄糖脱氢酶，可以在不干扰主体反应的前提下，将 氧化态NAD +转化还原态NADH，使反应底物NADH在试剂存储过程中可以始终保持稳定，显著 提高了试剂的稳定性，反应式如下：
3. 根据权利要求1所述的一种血清单胺氧化酶检测试剂盒，优选的，所述试剂R是由以 下比例的成分组成的：
4. 根据权利要求1所述的，本发明中的试剂为单试剂，在全自动生化分析仪器上相比 双试剂而言使用操作方便。
5. 根据权利要求3所述的，本发明所采用新型两性表面活性剂十二烷基二甲基甜菜 碱，不仅显著改善测定的性能，并且显著改善了试剂的稳定性和抗干扰能力。
【专利摘要】本发明涉及临床体外检测技术领域，公开了一种血清单胺氧化酶检测试剂盒，其特征在于，本发明中的试剂为单试剂，在全自动生化分析仪器上相比双试剂而言使用操作方便。本发明采用紫外分光光度法测试血清中的单胺氧化酶的含量。与国内常见试剂盒相比，本试剂盒采用新的缓冲液和稳定剂，显著改善了试剂的稳定性，从而确保了检测的精确度。本发明采用辅酶NADH再生系统，在足够的葡萄糖脱氢酶参与下，反应底物NADH在试剂存储过程中可以始终保持稳定，显著提高了试剂的稳定性和检测的准确性。本发明所采用新型两性表面活性剂十二烷基二甲基甜菜碱，不仅显著改善测定的性能，并且显著改善了试剂的稳定性和抗干扰能力。
【IPC分类】G01N21-33, G01N21-75, G01N21-31
【公开号】CN104749122
【申请号】CN201510152935
【发明人】甘宜梧, 李志明, 谭柏清, 王绮, 李静, 王春艳
【申请人】山东博科生物产业有限公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年4月2日