一种液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法
【专利摘要】高效液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留量的方法，属于食品安全检测【技术领域】。将果蔬汁用盐酸溶液提取，再用固相萃取柱净化，氮吹至干后用盐酸溶液定容，用液相色谱检测。本发明方法可以同时检测多菌灵和噻菌灵。用本发明方法分析果蔬汁中的多菌灵和噻菌灵残留量，样品处理简单，毒性小，回收率和灵敏度高。
【专利说明】一种液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及检测领域，更具体地，涉及一种液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌 灵残留的方法。
【背景技术】
[0002] 多菌灵和噻菌灵为高效低毒苯并咪唑类广谱杀菌剂，对多种作物由真菌(如半知 菌、多子囊菌)引起的病害有防治效果，对人畜低毒。但在部份国家，这种除菌剂只可用于球 场或康乐设施，而不能用于农产品。有相关的医学研究表明，杀真菌剂将增加动物患肝脏肿 瘤的几率。2012年美国可口可乐多菌灵事件引起了人们对广谱杀菌剂更大更多的关注。
[0003] 现阶段多菌灵和噻菌灵检测方法主要有紫外分光光度法、气相色谱法、液相色谱 法、液相质谱联用法(胡梅等一超高效液相色谱法-串联质谱测定蒜苔中多菌灵和噻菌灵 的残留量）等。其中高效液相色谱法和高效液相质谱联用法是测定果蔬汁多菌灵和噻菌灵 残留量最常用方法，其前处理过程，大多是需要用碱来调节pH后采用有机溶剂来提取目标 化合物，如采用甲醇(孔祥虹等一固相萃取.高效液相色谱法测定浓缩苹果汁中的多菌灵 残留量)、乙腈(黄文雯等一LC- MS/MS法测定浓缩果汁中2-氨基苯并咪唑、多菌灵、噻菌 灵、甲基硫菌灵的残留量)、乙酸乙酯（廖涛等一苹果汁中多菌灵的高效液相色谱法分析） 等提取后过柱，存在的缺点主要有：提取过程繁琐；用碱液来调节，导致稀释体积变大，测 定结果不准确；用有机溶剂提取，易造成环境污染，并且由于有机试剂的使用，导致检测人 员作业危险性较大。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种快速、简便、灵敏度和回收率 高、污染小且能够显著减少检测人员作业危险性的高效液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻 菌灵残留量的方法。
[0005] 根据以上发明目的，本发明首先提供一种液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵 残留的方法，样品的预处理的方法如下所示， S11.提取：将待检测样品混合均匀，准确称取10?30g待检测样品于比色管中，用第 一浓度盐酸定容，形成样品提取液，并采用涡旋振荡将所述样品与第一浓度盐酸混合均匀， 形成待处理溶液，转移至离心管中离心； S12净化：准确移取一定体积经离心的待处理溶液上清液过固相萃取柱，用氨水甲醇 洗脱，氮吹至干，残渣用第二浓度盐酸溶液溶解定容至lmL。
[0006] 样品进行预处理之后，使用液相色谱检测，具体条件为： 液相色谱条件：色谱柱：Agient Eclipse Plus C18:5ym，4.6X150mm;流动相 A: 70%-80%磷酸盐缓冲溶液，流动相B : 20%-30%乙腈；分析时间lOmin，平衡时间20min ;流 速：lmL/min，柱温：35°C ;进样体积：20 μ L。
[0007] 所述第一浓度盐酸溶液为〇· 2mol/L。
[0008] 所述的第二浓度盐酸溶液为〇· lmol/L。
[0009] 所述的离心的转速为4000r/min，离心时间为2min。
[0010] 所述的固相萃取柱为聚合阳离子交换树脂萃取柱，所述的离心管为聚丙烯离心 管。
[0011] 所述经离心所得的上清液过柱体积为5?40mL。
[0012] 所述的流动相A为75%磷酸盐缓冲溶液，所述的流动相B为25%乙腈。
[0013] 本发明的优点在于，步骤简单，不需要调节pH，且前处理的毒性低，并且能够完整 的检测出果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 图1多菌灵和噻菌灵标准品混合溶液的色谱图。
[0015] 图2多菌灵和噻菌灵校正曲线。
[0016] 图3果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留量分析色谱图。
[0017] 图4添加了多菌灵和噻菌灵的果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留量分析色谱图。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合附图和具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明，本发明采用 的试剂、设备和方法为本【技术领域】常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。
[0019] 仪器与试剂 仪器：LC1100高效液相色谱仪(安捷伦)，PHS-3B pH计(上海雷磁)，TDL-5-A离心机(上 海飞鴻)，高纯水水机（Type 1 Synergy)。
[0020] 试剂：盐酸、甲醇、氨水（分析纯广州化学试剂厂）；一级水；Bond Elut Plexa PCX固相萃取柱（60mg，3mL Varian);多菌灵、噻菌灵标准品（纯度分别为99. 5%、99. 0% Dr Ehrenstorfer公司）甲醇分别配成100yg/mL的单标，并于-20°C下保存，使用前用 0. lmol/L盐酸逐级稀释配制为所需要浓度的混标。
[0021] 标准品溶液制备：分别准确称取标准品：多菌灵、噻菌灵，用甲醇超声溶解，配成 100 μ g/mL的单标储备溶液。低浓度的混合标准系列溶液用0. lmol/L盐酸稀释配制成所需 混标。多菌灵和噻菌灵标准品混合溶液的色谱图见附图1。多菌灵和噻菌灵校正曲线见附 图2. 实施例1 应用液相色谱法对多菌灵和噻菌灵进行分析。
[0022] 不加标样品预处理：将果蔬汁混合均匀，准确称取12. 5g样品于25mL比色管中， 用0. 2mol/L盐酸溶液定容至25mL，润旋混合lmin后，转移到50mL聚丙烯离心管，室温下 4000r/min离心2min ;将Bond Elut Plexa PCX固相萃取柱分别用3mL甲醇和3mL-级水 活化，准确移取10mL离心后的上清液过柱，再分别用3mL -级水和3mL甲醇净化固相萃取 柱，用6mL3%氨水甲醇洗脱；将洗脱液室温氮吹至干，残渣用0. lmol/L盐酸溶解并定容至 lmL,过0. 45 μ m滤膜,待用。
[0023] 液相色谱条件：色谱柱：Agient Eclipse Plus C18 :5 μ m，4· 6X 150mm ;流动相 A : 70%-80%磷酸盐缓冲溶液，流动相B : 20%-30%乙腈；分析时间10min，平衡时间20min ;流 速：lmL/min，柱温：35°C ;进样体积：20 μ L。
[0024] 加标样品预处理：将果蔬汁混合均勻，准确称取12. 5g样品于25mL比色管中，分别 加入单标溶液，用〇. 2mol/L盐酸溶液定容至25mL，涡旋混合lmin后，转移到50mL聚丙烯离 心管，室温下4000r/min离心2min;将Bond Elut Plexa PCX固相萃取柱分别用3mL甲醇 和3mL -级水活化，准确移取10mL离心后的上清液过柱，再分别用3mL -级水和3mL甲醇 净化固相萃取柱，用6mL3%氨水甲醇洗脱；将洗脱液室温氮吹至干，残渣用0. lmol/L盐酸溶 解并定容至lmL，过0. 45 μ m滤膜，待用。
[0025] 液相色谱条件：色谱柱：Agient Eclipse Plus C18 :5 μ m，4. 6X 150mm ;流动相 A :70%-80%磷酸盐缓冲溶液，流动相B : 20%-30%乙腈；分析时间lOmin，平衡时间20min ; 流速：lmL/min，柱温：35°C;进样体积：20μ L。固相萃取柱性能验证（样品中所含多菌灵和 噻菌灵残留量浓度较低时，可通过提高过柱体积来浓缩目标化合物）。
[0026] 分别准确移取1. OOmL多菌灵和噻菌灵标准储备溶液，加入0. lmol/L盐酸溶液配 制成1 μ g/mL的混合标准溶液，对固相萃取柱进行活化，分别移取5、10、15、20、40mL混合标 准溶液过柱净化，以外标法定量，计算回收率，见表1。
[0027] 表 1
【权利要求】
1. 一种液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法，其特征在于，样品的预处 理的方法如下所示， S11.提取：将待检测样品混合均匀，准确称取10?30g待检测样品于比色管中，用第 一浓度盐酸定容，形成样品提取液，并采用涡旋振荡将所述样品与第一浓度盐酸混合均匀， 形成待处理溶液，转移至离心管中离心； S12净化：准确移取一定体积经离心的待处理溶液上清液过固相萃取柱，用氨水甲醇 洗脱，氮吹至干，残渣用第二浓度盐酸溶液溶解定容至lmL。
2. 根据权利要求1所述的液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法，其特征 在于，样品进行预处理之后，使用液相色谱检测，具体条件为： 液相色谱条件：色谱柱：Agient Eclipse Plus C18:5ym，4.6X150mm;流动相 A: 70%-80%磷酸盐缓冲溶液，流动相B : 20%-30%乙腈；分析时间lOmin，平衡时间20min ;流 速：lmL/min，柱温：35°C ;进样体积：20 μ L。
3. 根据权利要求1所述的液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法，其特征 在于，所述第一浓度盐酸溶液为〇. 2mol/L。
4. 根据权利要求1所述的液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法，其特征 在于，所述的第二浓度盐酸溶液为〇. lmol/L。
5. 根据权利要求1所述的液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法，其特征 在于，所述的离心的转速为4000r/min，离心时间为2min。
6. 根据权利要求1所述的液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法，其特征 在于，所述的固相萃取柱为聚合阳离子交换树脂萃取柱，所述的离心管为聚丙烯离心管。
7. 根据权利要求1所述的液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法，其特征 在于，所述经离心所得的上清液过柱体积为5?40mL。
8. 根据权利要求2所述的液相色谱检测果蔬汁中多菌灵和噻菌灵残留的方法，其特征 在于，所述的流动相A为75%磷酸盐缓冲溶液，所述的流动相B为25%乙腈。
【文档编号】G01N30/02GK104215712SQ201410470787
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月16日 优先权日:2014年9月16日
【发明者】戚平, 陈桂云, 周骏, 肖剑, 林子豪, 刘佳, 云婷 申请人:广州市食品检验所