一种用于病死猪肉监测的新型检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于病死猪肉监测的新型检测方法，其制备样品处理液：取肉样2-4克于烧杯中，剪碎后加入重量为肉样重量的20~40倍日蒸馏水，放入超声波提取仪中超声15-20分钟，静置后取滤液作为样品处理液；再取样品处理液2ml加入2-5%乙酸0.1-0.2ml，反应3min后放入仪器内检测其吸光度；接着取样品处理液2ml加入0.2-1%3，3’，5，5’-四甲基联苯胺0.05-0.20ml，0.02%H2O20.05-0.15ml后，放入仪器内测其5min内吸光度的变化的情况，即记录反应动力学曲线，并记录最大值参数2max；通过参数2，及参数2max和参数1的比值。本发明把单一考察过氧化物酶活性与猪肉品质的相关性换成考察过氧化物酶活性、血红蛋白含量及过氧化物酶活性两者之间的关系与猪肉品质的相关性，进而实现快速、简便的检测肉类的品质。
【专利说明】一种用于病死猪肉监测的新型检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明专利涉及可见分光仪器领域和食品安全快速检测领域，具体涉及一种用于 病死猪肉监测的新型检测方法。
【背景技术】
[0002] 目前现有检测病死猪肉的技术主要有：一是感官检测，主要通过对猪肉外观包括 色泽、弹性、气味等感官指标人为判断其新鲜程度，方法虽然简便易操作且成本较低，但受 人为主观影响较大，缺乏充分科学依据，更因其对操作人员有较高要求，难以普及；二是PH 测定法，病死猪在后熟过程中，因生前能量的过度消耗，肌肉蓄积的乳酸和磷酸含量与健康 猪相比较低，pH较健康猪肉高，可以通过pH试纸或pH计测肉浸出液的pH值来判断猪肉 的健康状况，健康猪肉的PH值在5. 5-6. 5之间，但本法受外界干扰较大(唐爱明，王辉，病、 死猪肉的检验与分析，畜产品与安全，2011年8月下刊，40-42)三是过氧化物酶反应法，过 氧化物酶活性水平是检测肉类品质的重要指标，病、死猪体内过氧化物酶较少甚至没有，但 本法受血红蛋白干扰较大，血红蛋白由于其空间结构辣根过氧化物酶相似，可作为过氧化 物酶模拟酶，[CTAB对血红蛋白仿过氧化物酶催化活性的影响，中国科技论文在线，2008年 9月第3卷第9期666-671]在一定条件下会产生相同的酶反应效果；四是硫酸铜沉淀法， 健康猪肉肉浸液中含有的离子正负电荷娄相同总电荷为0,肉浸液的pH值即为蛋白质等电 点。而病、死猪肉生前组织蛋白发生了一定程度分解，其分解产物如蛋白、多肽等以负电荷 形式存在，若向其中加入硫酸铜，其中的负电荷可以Cu 2+反应生成沉淀，但本方法需要前处 理较复杂且需要同时做对照实验，结果不易判断，无法达到快速普及的效果(孔宪琴、梁航、 黄素珍，病死猪肉的快速检验与处理，肉类研究，2008年第1期，59-62);五是细菌内毒素检 验法，通过对肉品中细菌产生的毒素的检测来判定是否为病死肉，此法操作较复杂，其中的 微生物呈色反应更要求猪肉新鲜不能隔夜较难普及，另外此法只能简单定性无法达到定量 的效果。
[0003] 病、死猪肉是指生猪在病死后没有经过宰杀放血或放血不全，没有经过兽医检疫 的猪肉产品。（唐爱明，王辉，病、死猪肉的检验与分析，畜产品与安全，2011年8月下刊， 40-42)病猪、死猪肉由于放血不完全会留存一些致病菌及毒素，人若食用后会对身体健康 产生不利影响。目前检测猪肉品质中被广泛接受的方法是过氧化物酶活性法，病猪、死猪肉 中过氧化物酶活性很低甚至没有，而健康猪肉中过氧化物酶活性较高，此方法主要基于此 通过对肉品过氧化物酶活性间接对肉品进行判断。这种方法虽然可以定量，但由于放血不 完全的猪肉内血红蛋白含量较高，且血红蛋白也有同样的响应，在某些条件下血红蛋白的 响应甚至更伏，会对本法产生严重干扰，使检测结果偏差较大，对色泽较深的肉影响更大。 冷冻后解冻的肉品因为组织中水分结冰后会破坏细胞结构，更易使血红蛋白溶出，对反应 的干扰较大。
[0004] 因此，找到一种可以避免或排除血红蛋白干扰的方法对检测病死猪肉有重要意 义。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种可以避免或排除血红蛋白干扰的用于病死猪肉监测的 新型检测方法。
[0006] 为实现上述目的，本发明的解决方案是： 一种用于病死猪肉监测的新型检测方法，其具体步骤为： 步骤1、制备样品处理液：取肉样2-4克于烧杯中,剪碎后加入蒸馈水,蒸馈水重量为肉 样重量的2(Γ40倍，放入超声波提取仪中超声15-20分钟，静置后过滤，取滤液作为样品处 理液； 步骤2、检测参数1 :取步骤1的样品处理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反应3min 后放入仪器内检测其吸光度； 步骤3、检测参数2 :取步骤1的样品处理液2ml加入0. 2-1% 3, 3'，5, 5' -四甲基联 苯胺0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml后，放入仪器内测其5min内吸光度的变化的情 况，即记录反应动力学曲线，并记录最大值参数2_ ; 步骤4、通过参数2 (吸光度的变化情况，即酶反应动力学曲线)，及参数2max和参数1 的比值，利用仪器自动判断肉的品质。
[0007] 采用上述方案后，本发明把原来独立的两个指标结合起来一起考虑，即把单一考 察过氧化物酶活性与猪肉品质的相关性换成考察过氧化物酶活性、血红蛋白含量及过氧化 物酶活性两者之间的关系与猪肉品质的相关性，进而实现一种快速、简便的检测肉类品质 的方法，并且可以有效避免或排除血红蛋白干扰，利用本算法，操作简便，可较快速对肉的 品质进行判断。
【专利附图】
【附图说明】
[0008] 图1为本发明方法监测猪肉过氧化物酶活力的曲线图。
【具体实施方式】
[0009] 以下结合附图及实施例对本发明进行详述： 实验材料 病害猪肉样品：某养猪厂取得的病死小猪，按正常猪肉屠宰方式屠宰切割，取猪前腿肉 部分作为样品，若未用完室于冰箱冷冻层保存备用，取35份不同样品，其中25份作为样本 集，10份作为校正集； 健康猪肉样品：经检疫合格的猪肉，取猪前腿肉部分作为样品，若未用完室于冰箱冷冻 层保存备用，取35份不同样品，其中25份作为样本集，10份作为校正集； 样品前处理：取检测肉样，表层与深层各取一块约25-35g，去除脂肪及筋腱部分，用样 品剪剪碎后充分混匀，加入150-250g纯净水后放入超声波提取仪中5-15min，静置后过滤 取滤液作为样品处理液备用。
[0010] 本法主要包括以下步骤： (1)制备样品处理液：取2-4克肉样于烧杯中，剪碎后加入蒸馈水，蒸馈水重量为肉样 重量的2(Γ40倍，放入超声波提取仪中超声15-20分钟，静置后过滤，取滤液作为样品处理 液； (2)检测参数I :取样品处理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反应3min后放入仪器 内检测其吸光度。
[0011] (3)检测参数2:取样品处理液2ml，加入0.2-1% 3,3'，5,5'-四甲基联苯胺 0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml后，放入仪器内测其5min内吸光度的变化的情况，即 记录反应动力学曲线，并记录最大值参数2_。
[0012] (4)通过参数2 (吸光度的变化情况，即酶反应动力学曲线)，及参数2_和参数1 的比值，利用仪器自动判断肉的品质。
[0013] 图1中所示为猪肉过氧化物酶活力曲线，其中细实线曲线为色泽较深的病死猪肉 的酶活力曲线，粗实线为正常猪肉的酶活力曲线，虚线为色泽正常病死猪肉酶活力曲线， 可以看出病死猪肉酶活动力曲线有两种情形：1是加入试剂后迅速达到活力峰值并迅速减 弱，2是一直较平稳且活力较低。而正常猪肉的酶活力则是慢慢增加且能达到较高水平。原 因是血红蛋白也会有过氧化物酶的活性干扰测定结果。
[0014] 表1样本集数据结果
【权利要求】
1. 一种用于病死猪肉监测的新型检测方法，其具体步骤为： 步骤1、制备样品处理液：取肉样2-4克于烧杯中,剪碎后加入蒸馈水,蒸馈水重量为肉 样重量的20~40倍，放入超声波提取仪中超声15-20分钟，静置后过滤，取滤液作为样品处 理液； 步骤2、检测参数1 :取步骤1的样品处理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反应3min 后放入仪器内检测其吸光度； 步骤3、检测参数2 :取步骤1的样品处理液2ml加入0. 2-1% 3, 3'，5, 5' -四甲基联 苯胺0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml后，放入仪器内测其5min内吸光度的变化的情 况，即记录反应动力学曲线，并记录最大值参数2_ ; 步骤4、通过参数2,及参数2max和参数1的比值，利用仪器自动判断肉的品质。
【文档编号】G01N21/31GK104316477SQ201410538045
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月13日 优先权日:2014年10月13日
【发明者】柯慧贤, 李娟 , 周晓芳, 林建鹏 申请人:厦门斯坦道科学仪器股份有限公司