一种稳定、抗干扰能力强的尿微量白蛋白试剂及检测方法与流程

本发明涉及尿微量白蛋白检测技术领域，特别涉及一种尿微量白蛋白检测试剂，还涉及使用此检测试剂的检测方法。

背景技术：

尿微量白蛋白的分子量为6.9 kD，带负电荷，是肾小球滤过膜所能通过的最小蛋白质分子之一，占滤过蛋白总量的40%。经肾小球滤过的蛋白质几乎全部被近曲小管以主动方式回吸收，因此尿中只有微量白蛋白。尿微量白蛋白的排出量受人的体位、运动、血压、蛋白摄入量等诸多因素的影响。发热、精神紧张可使尿微量白蛋白分泌增加；某些药物可通过生物学影响使尿微量白蛋白排出增加。正常情况下，绝大部分蛋白不能通过滤过膜，但在病理情况下，如各种炎症、代谢异常和免疫损伤，使肾小球血流动力学异常，肾小球滤过膜损害是造成尿微量白蛋白排出量增加的重要原因。由于长期高血糖使非酶糖酰化速率增加，导致缺氧，血液黏度增高，同时内皮细胞释放内皮素和一氧化氮等血管活性物质使肾小球毛细血管张力改变，进而引起肾血流动力学变化，使肾小球处于高滤过状态并导致肾损害。早期检测尿微量白蛋白对阻止和延缓糖尿病肾病的发展具有十分重要的临床意义。

尿微量白蛋白指的是尿中白蛋白增加，而尿总蛋白在参考范围内或试纸片法为阴性结果。它的检测作为早期肾损害诊断的重要指标已受到广泛重视，它对糖尿病早期诊治及其预后具有重要意义。目前认为，尿微量白蛋白是糖尿病肾病的早期外在指标，本发明采用免疫透射比浊法。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种用于检测尿微量白蛋白的试剂及使用该试剂检测尿微量白蛋白含量的方法。该试剂盒采用抗原-抗体特异性结合法，可以有效检测尿微量白蛋白的含量，具有抗干扰能力强，稳定性好等优点。

基本原理：

本方法是一种免疫透射比浊法。将特异性抗体结合于胶乳颗粒表面，样本与胶乳颗粒在Mes缓冲液中混合，样本中的尿微量白蛋白与胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，在415nm波长下检测溶液浊度变化，变化程度与样本中的尿微量白蛋白含量成正比。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种尿微量白蛋白检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：

1）试剂R1的组分为：

Mes缓冲液 pH 7.6_{·············································}50 mmol/L；

TritonX-100_{··················································}25 ml/L；

胶乳颗粒_{··················································}...30 ml/L；

叠氮钠_{·············································}..........7.7 mmol/L；

2）试剂R2的组分为：

Mes缓冲液 pH 7.6_{·········································}50 mmol/L；

羊抗人白蛋白抗体_{·········································}3 g/L；

甘露醇_{················································}...20 mmol/L；

叠氮钠_{·················································}..7.7 mmol/L。

所述的尿微量白蛋白检测试剂来检测尿微量白蛋白的检测方法，使用全自动生化分析仪日立7180，利用终点法进行测定，检测主波长为415 nm。

所述的检测方法，R1试剂和R2试剂的比例为3:1。

本发明的有益效果：

1）采用Mes缓冲体系，显著改善了试剂的稳定性；

2）采用胶乳颗粒和甘露醇，不仅显著改善测定的性能，而且增强了试剂的稳定性和抗干扰能力；

3）试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。

附图说明

图1为两种试剂的相关性曲线图，

图2为两种试剂效期稳定性曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1

尿微量白蛋白的检测试剂，包括试剂R1和试剂R2：

1）试剂R1的组分为：

Mes缓冲液 pH 7.6_{···············································}50 mmol/L；

TritonX-100_{·········································}...........25 ml/L；

胶乳颗粒_{·······················································}30 ml/L；

叠氮钠_{·······················································}..7.7 mmol/L

2) 试剂R2的组分为：

Mes缓冲液 pH 7._{···············································}50 mmol/L；

羊抗人白蛋白抗体_{·············································}.3 g/L；

甘露醇_{························································}20 mmol/L；

叠氮钠_{························································}7.7 mmol/L；

3）本实施例试剂的使用方法：

本实施例描述的尿微量白蛋白检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用终点法进行测定。将R1和R2按照5:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1。

表1 实施例1试剂检测方法

计算：尿微量白蛋白含量（mg/L）＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准。

实施例2

干扰性试验：取新鲜混合尿液，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在尿液中的浓度达到表2的要求。然后分别用实施例1所得试剂，与市场常见并认可的尿微量白蛋白试剂同时对比测定尿液中尿微量白蛋白的含量，对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见表2。相对偏差 (%) = (干扰样本的测定均值－对照样本的测定均值) /对照样本的测定均值×100%。

由表2可以看出，实施例1试剂在抗坏血酸≤27.3 μmol/L、尿酸≤240 μmol/L、尿素≤6.5 mmol/L、NAG≤9 U/L对测试结果没有明显干扰；而对照组试剂在上述浓度干扰物质存在时，受到明显干扰，这说明实施例1试剂的抗干扰性能远远优于对比试剂。

表2实施例试剂抗干扰性能比较

实施例3

相关性实验：利用实施例1配方配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的尿微量白蛋白试剂盒进行对照检测，同时检测了20个临床尿液样本，检测结果如表3所示。并获得了两种试剂的相关性曲线（如图1所示），通过检测结果显示，两个试剂盒的相关系数为0.999，说明了两者有极大的相关性。

表3实施例1试剂与市场常见并得到认可的心肌肌钙蛋白I测定试剂盒对比检测结果

实施例4

试剂的稳定性对比试验：对实施例1中的试剂，均匀分装13组，每组的试剂量为R1为25 mL，R2为5 mL；并且取13组市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的尿微量白蛋白试剂盒作对照。放置到2-8℃冰箱中，每月的同一天取出一组实施例1试剂和对照组试剂检测同一混合尿液样本，检测结果如图2所示，实施例1试剂在2-8℃储存条件下比市场常见的尿微量白蛋白测定试剂盒更加稳定。

通过验证，本试剂与同类检测试剂对比相关性好，临床检测样本结果一致，能够达到市场对产品的应用要求，并且抗干扰性能好，是一种更加稳定、良好的尿微量白蛋白检测试剂。