利用三种抗体的发光氧通道免疫测定及其生产和使用方法与流程

文档序号:11160381阅读:来源:国知局

技术特征:

1.含有针对特定被分析物的化学发光检测系统的试剂盒,所述试剂盒包括:

(a) 第一组合物,其包含可由单线态氧激活的化学发光化合物和与之结合的第一抗体或其结合片段,其中所述第一抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物的第一表位的检测抗体,由此所述可由单线态氧激活的化学发光化合物能够经由所述第一抗体或其结合片段间接结合所述被分析物;

(b) 第二组合物,其包含可由单线态氧激活的化学发光化合物和与之结合的第二抗体或其结合片段,其中所述第二抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物的第二表位的检测抗体,由此所述可由单线态氧激活的化学发光化合物能够经由所述第二抗体或其结合片段间接结合所述被分析物,且其中所述第一和第二表位至少部分重叠,使得所述第一和第二抗体或其结合片段不能同时结合单个被分析物分子;和

(c) 第三组合物,其包含第三抗体或其结合片段,所述第三抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物的不与所述第一和第二表位重叠的第三表位的捕获抗体,由此单个被分析物分子可以结合所述第三抗体或其结合片段以及所述第一和第二抗体或其结合片段之一,且其中所述第三抗体或其结合片段能够与能够在其激发状态生成单线态氧的敏化剂结合,由此所述第三抗体或其结合片段与所述敏化剂的结合允许所述敏化剂与所述被分析物的间接结合。

2.权利要求1的试剂盒,其还包括所述敏化剂,且其中所述第三组合物还包含与所述第三抗体或其结合片段结合的所述敏化剂。

3.权利要求1或2的试剂盒,其中所述第一和第二组合物中的至少一种还包含由所述激活的化学发光化合物激发的至少一种荧光分子。

4.权利要求1-3中任一项的试剂盒,其中(a)-(c)中的至少一种被进一步限定为冻干试剂的形式。

5.权利要求4的试剂盒,其还包括用于重构所述冻干试剂的赋形剂。

6.微流体装置,其包括:

至少一个隔室,其含有:

(i) 第一组合物,其包含可由单线态氧激活的化学发光化合物和与之结合的第一抗体或其结合片段,其中所述第一抗体或其结合片段是特异性结合特定被分析物的第一表位的检测抗体,由此所述可由单线态氧激活的化学发光化合物能够经由所述第一抗体或其结合片段间接结合所述被分析物;

(ii) 第二组合物,其包含可由单线态氧激活的化学发光化合物和与之结合的第二抗体或其结合片段,其中所述第二抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物的第二表位的检测抗体,由此所述可由单线态氧激活的化学发光化合物能够经由所述第二抗体或其结合片段间接结合所述被分析物,且其中所述第一和第二表位至少部分重叠,使得所述第一和第二抗体或其结合片段不能同时结合单个被分析物分子;和

(iii) 第三组合物,其包含第三抗体或其结合片段,所述第三抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物的不与所述第一和第二表位重叠的第三表位的捕获抗体,由此单个被分析物分子可以结合所述第三抗体或其结合片段以及所述第一和第二抗体或其结合片段之一;和

(iv) 能够与所述第三抗体或其结合片段结合的敏化剂,所述敏化剂能够在其激发状态生成单线态氧,且其中所述第三抗体或其结合片段与所述敏化剂的结合允许所述敏化剂与所述被分析物的间接结合。

7.权利要求6的微流体装置,其还包括入口通道,可以通过所述入口通道设置样品,其中所述至少一个隔室能够与所述入口通道流体连通。

8.权利要求7的微流体装置,其进一步限定为包括至少两个隔室,其中第一隔室含有(i)、(ii)和(iii),并且其中第二隔室含有(iv)。

9.权利要求8的微流体装置,其还包括入口通道,可以通过所述入口通道设置样品,其中所述第一隔室能够与所述入口通道流体连通,并且其中所述第二隔室能够与所述入口通道和所述第一隔室中的至少一者流体连通。

10.权利要求6-9中任一项的微流体装置,其还包括能够与所述入口通道和所述至少一个隔室中的至少一者流体连通的至少一个额外隔室,且其中所述至少一个额外隔室含有稀释剂。

11.用于检测样品中的特定被分析物的存在和/或浓度的方法,其包括以下步骤:

(a) 同时或完全或部分依次组合:

(i) 疑似含有所述特定被分析物的样品;

(ii) 第一组合物,其包含可由单线态氧激活的化学发光化合物和与之结合的第一抗体或其结合片段,其中所述第一抗体或其结合片段是特异性结合特定被分析物的第一表位的检测抗体;

(iii) 第二组合物,其包含可由单线态氧激活的化学发光化合物和与之结合的第二抗体或其结合片段,其中所述第二抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物的第二表位的检测抗体,且其中所述第一和第二表位至少部分重叠,使得所述第一和第二抗体或其结合片段不能同时结合单个被分析物分子;

(iv) 第三组合物,其包含第三抗体或其结合片段,所述第三抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物的不与所述第一和第二表位重叠的第三表位的捕获抗体,由此单个被分析物分子可以结合所述第三抗体或其结合片段以及所述第一和第二抗体或其结合片段之一;和

(v) 能够与所述第三抗体或其结合片段结合的敏化剂,所述敏化剂能够在其激发状态生成单线态氧;

(b) 允许(ii)、(iii)和/或(iv)与所述样品内的被分析物结合,其中形成包含被分析物分子以及(ii)和(iv)的第一夹心复合体,且形成包含另一种被分析物分子以及(iii)和(iv)的第二夹心复合体,且其中(v)与所述第一和第二夹心复合物中的(iv)结合,因此使所述敏化剂紧密靠近(ii)和(iii)中的所述化学发光化合物;

(c) 激活所述敏化剂以生成单线态氧,其中所述第一和第二夹心复合物中存在的所述敏化剂的激活引起所述第一和第二夹心复合物中存在的所述化学发光化合物的激活;

(d) 测定由所述第一和第二夹心复合物中存在的所述激活的化学发光化合物生成的化学发光的量;

(e) 任选地重复步骤(b) – (d);并且

(f) 通过分析如此产生的化学发光的量来检测所述被分析物的存在和/或浓度,其中所述化学发光的量与所述样品中的被分析物的量直接成正比。

12.权利要求11的方法,其中所述敏化剂是光敏剂,且其中步骤(c)被进一步限定为经由光照射激活所述光敏剂。

13.权利要求12的方法,其还包括将所述样品在与(ii)-(v)中的任一者组合前暴露于分离步骤的步骤。

14.权利要求11-13中任一项的方法,其中所述第一和第二组合物中的所述可由单线态氧激活的化学发光化合物是相同的。

15.权利要求11-14中任一项的方法,其中所述第一和第二组合物中的所述可由单线态氧激活的化学发光化合物是不同的。

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