抗her2抗体及组合物的制作方法

专利名称：抗her2抗体及组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗人类癌症的新型HER2受体靶向重组抗体及其组合物(包含2种或多种此类抗体)。
背景技术：
表皮生长因子(EGFR)家族(即ErbB家族)是酪氨酸激酶(RTK)受体的一个亚族，其包含 4 个成员EGFR/ErbB、HER2/ErbB2、HER3/ErbB3 和 HER4/ErbB4。EGFR 家族成员与单链调节糖蛋白密切相关，后者具有一个胞外配体结合区、单一跨膜区和胞内激酶(参见综述 Ferguson (2008) Annu Rev Biophys. 37 :353-373)。在正常的生理状态下，ErbB 家族调节并协调着细胞生长、增殖和迁移中的重要事件(Citri et al. (2006) Nat Rev MolCell Biol. 7 :505-516)。现在认为EGFR、HER2和HER3在正常细胞的恶性转化以及癌细胞的持续生长中发挥关键作用。目前已发现在许多上皮癌中存在着EGFR和HER2过表达的情况(Slamon et al. (1987) Science, 235 :177-182 ;Arteaga (2002) Oncologist 7 Suppl4 :31-39 ；Bodey et al. (1997)Anticancer Res. 17 :1319-1330 ；Rajkumar et al. (1996)JPathol. 179 =381-385)。而且EGFR和HER2过表达与数种人上皮癌症中的疾病进展、生存率降低、化疗应答差和产生耐药相关(Slamon et al. (1987) supra ；Baselga et al. (2002)Oncologist 7 Suppl 4 :2_8)。人表皮生长因子受体2 (HER2,也称为 ErbB2 或 Neu ；UniProtKB/Swiss-ProtNo. P04626)由1233个氨基酸组成，其结构与EGFR类似，具有一个包含4个亚结构域I-IV的胞外域跨膜域、膜旁域、胞内胞衆酪氨酸激酶和调节性C末端域(Yamamoto et al. (1986)Nature 319 :230-234)。HER2是ErbB家族中唯一的不与已知配体结合的成员(Klapper et al. (1999)ProcNatl AcadSci USA 96:4995-5000)。HER2通过与其它ErbB家族成员形成异聚体复合物而被激活，因此其受EGFR和HER3配体间接调节(参见综述Yarden et al. (2001) NatRevMol Cell Biol. 2 :127-137) ο HER2是其它3种ErbB受体发生异源二聚化的首选伙伴(Graus-Porta et al. (1997)EMBO J 16 1647-1655 ；Tzahar et al. (1996)Mol Cell Biol.16 :5276-5287)，其通过降低配体-受体复合物的解离速度，从而增强其它ErbB受体与配体的亲和力，这样HER2可增强和延长信号转导(Pedersen et al. (2009)Mol CancerRes. 7 275-284)。HER2与ErbB家族的另一配体结合受体发生异源二聚化，可诱导交叉磷酸化，使C末端氨基酸磷酸化。这样反过来作为信号分子的支架(King et al. (1988)EMB0J7 1647-1651)。活性最高的 HER2 异源二聚体为 HER2-HER3 复合物(Pinkas-Kramarski etal. (1996)EMBOJ 15 :2452-2467)，其中HER2通过活性激酶与激酶缺陷型HER3互补(Guy etal. (1994)Proc Natl Acad Sci USA 91 :8132-8136.)。与 EGFR 相反，HER2 具有内化抗性(Hommelgaard et al. (2004)MolBiol Cell 15 :1557-1567)，其可逃脱溶酶体降解，从而保留在衆I旲中。HER2在正常组织中的主要作用似乎是调节配体结合的ErbB受体的信号转导。与EGFR类似，HER2主要在上皮细胞中表达(参见综述Freudenberg et al. (2009) Exp MolPathol. 87:1-11)，而且目前发现其在正常乳腺发育中发挥着调节生长、分化、凋亡和重建等非致癌作用(Troyer et al. (2001) J Mammary Gland Biol Neoplasia 6:7-21)。与EGFR情况类似，细胞表面HER2过多会导致上皮细胞转化为多种组织(Freudenberg etal. (2009) supra)。目前已报道，在大量人类肿瘤中存在HER2拷贝增多和过表达的情况，包括20%-30%的侵袭性导管癌，并且其已被作为临床转归差(总生存率降低)的预测因素(Slamon et al. (1987) supra ；Ravdin et al. (1995) Gene 159:19-27)。在出现转化早期指征但尚未完全转化的人类乳腺组织中可检测到HER2高表达，这提示HER2在早期恶性转化中发挥重要作用(Freudenberg et al. (2009) supra)。同时还在其它上皮癌,例如结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌和尿路上皮癌，发现HER2高表达(Freudenberg et al. (2009)supra)。HER2激活可诱导细胞增殖失控，保护细胞免受凋亡，并影响正常的上皮组织(Muthuswamy et al. (2001)Nat Cell Biol. 3 :785-792)。而且转移癌细胞表达的 HER2 可能在癌细胞迁移中发挥作用(De Potter (1994)Hum Pathol. 25 :1264-1268)。EGFR和HER2是经过验证的癌症靶标，现在靶向这些受体的单克隆抗体和小分子抑制剂已经批准用于多种癌症的治疗。但是，最初对这些治疗应答的患者经常会由于产生 靶向HER2，用于治疗HER2受体过表达的乳腺癌。2010年I月，欧盟批准赫赛汀联合化疗治疗HER2阳性的胃转移癌患者。另一种部分靶向HER2受体的单克隆抗体帕妥珠单抗目前正在进行多项临床试验。曲妥珠单抗通过结合HER2进而阻断HER2功能而起效，而帕妥珠单抗是HER 二聚化抑制剂，可抑制HER2与HER3以及其它EGFR受体发生二聚化。由于帕妥珠单抗目前仍在临床试验阶段，其最终的临床有效性尚不知晓。对于曲妥珠单抗，虽然曲妥珠单抗联合化疗较单药化疗可取得生存期延长的临床收益，但大多数HER2阳性乳腺癌患者并不对该药物产生应答(赫赛汀联合化疗的总应答率为45%，而单药化疗为29%;赫赛汀处方信息，Genentech，2009年3月)。Slamon等报道了类似的结果，发表于N Engl J Med(2001),344(11) :783_92，其同时指出，与单药化疗相比，赫赛汀联合化疗可降低I年期死亡率(22 %与33 %，P = 0. 008)，延长中位生存期(25. I与20. 3个月，P=0. 046)。因此，虽然靶向HER2的单克隆抗体可提高治疗效果，例如在HER2过表达的转移性乳腺癌的治疗中，但其改善空间仍然很大。发明概述本发明涉及用于治疗人类癌症的新型HER2受体靶向重组抗体及其组合物(包含2种或多种此类抗体)，例如用于乳腺癌、卵巢癌、胃癌和其它过表达HER2的癌症。与当前此类癌症的治疗方法相比，包括HER2或EGFR家族其它受体的靶向单克隆抗体，本发明的抗体可在单用，或优选2种或多种此类抗体组合物联用，可选与其它疗法联用(例如化疗)的情况下提供卓越的临床疗效。一方面，本发明涉及新型抗HER2重组抗体，基于本专利所述抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 以及其人源化抗体。在一实施例中，本发明一方面涉及一种抗HER2重组抗体分子，其包含本专利所述抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 中任一抗体的重链 CDR3 序列。本发明该方面的另一实施例一种抗HER2重组抗体分子，其包含抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 中任一抗体的重链 CDR3 序列和轻链⑶R3序列；一种抗HER2重组抗体分子，其包含这些抗体中任一抗体的重链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗HER2重组抗体，其包含这些抗体中任一抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列，或包含具有至少80 %，85 %，90 %或95 %相同序列的重链可变区序列和轻链可变区序列，例如至少96 %，97 %，98 %或99 %序列相同。本发明的另一方面涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗HER2的重组抗体，两者与HER2的不同表位结合，而且其中一种或两种可选自上述抗体组。本发明的另一方面涉及一种抗HER2重组多克隆抗体组合物，其至少包含与HER2不同表位结合的第一、第二和第三抗HER2重组抗体组成，其中第一和第二抗体可与HER2结合并导致HER2受体内化，而第三抗体与HER2结合可抑制配体诱导的HER3磷酸化。本发明的另一方面涉及一种免疫偶联物，其包含一种本发明的抗HER2重组抗体，可与一种抗癌药物偶联。本发明的相关方面涉及抗体组合物，其至少包含本发明中抗HER2重组抗体的第一和第二抗体，所述组合物中至少有一种抗HER2抗体为免疫偶联物。
本发明的另一方面涉及核酸分子，其具有编码本发明中抗HER2抗体的核苷酸序列，以及包含多核苷酸的表达载体和转染该表达载体的宿主细胞。本发明的另一方面涉及生产本发明所述抗体和多克隆抗体组合物的方法。本发明的另一方面涉及治疗人类或动物受试者疾病的方法，特别是人类癌症，通过给予所述受试者一种抗HER2抗体或本发明组合物而实现。另一相关方面为使用本发明中的一种或多种抗HER2抗体制备用于治疗人类或动物疾病的药物，特别是治疗人类癌症。本发明的另一方面涉及一种诱导过表达HER2细胞表面HER2内化的方法，该方法包括令细胞接触一种抗HER2重组抗体、免疫偶联物或一种本发明中抗HER2重组抗体组合物。本发明的其它方面和某些实施例在下面的描述和示例中易于理解。图片描述图I示本发明抗HER2抗体的代表性表位结合结果。图2A，2B，2C和2D示经含有2、3、4种本发明抗HER2抗体混合物诱导的N87和SKBR3肿瘤细胞系中两种不同抗体浓度下的相对ADCC百分数。图3A，3B, 3C和3D示经2或3种本发明抗HER2抗体混合物诱导的N87和SKBR3肿瘤细胞的ADCC测量值。图4示经2、3、4种本发明抗HER2抗体混合物诱导的N87细胞的⑶C测量值。图5示经2或3种本发明抗HER2抗体混合物诱导的N87细胞的⑶C测量值。图6不本发明4种抗体混合物对N87胃癌细胞系代谢活性抑制的滴定结果。图7不本发明4种抗体混合物对HCC202乳腺癌细胞系代谢活性抑制的滴定结果。图8不本发明4种抗体混合物对BT474乳腺癌细胞系代谢活性抑制的滴定结果。图9示本发明4种抗体混合物对ZR-75-30乳腺癌细胞系代谢活性抑制的滴定结果O

图10示本发明抗HER2抗体混合物在NCI-N87胃癌裸鼠移植瘤模型中的体内疗效。图11示本发明抗HER2抗体混合物在0E19胃癌裸鼠移植瘤模型中的体内疗效。图12示NCI-N87细胞经所述抗体或抗体混合物过夜处理后再用调蛋白β处理15分钟后细胞内EGFR，pEGFR，HER2，pHER2，HER3和pHER3表达水平的蛋白质免疫印迹分析。图13A示人类癌症中癌基因细胞转导中HER2同二聚体和HER2/HER3异源二聚体的不同但相关的作用。图13B示本发明3种抗HER2抗体混合物阻断两个通路的猜想机制，其中两种抗体可诱导HER2内化和降解，而第三抗体可通过HER2/HER3异源二聚体阻断代偿性信号转导。图14示ZR-75-30，NCI-N87, BT474和HCC202癌细胞系经上述抗体和抗体混合物过夜处理后HER2表达水平的蛋白免疫印迹分析。图15示HCC202和NCI-N87癌细胞系经上述抗体和抗体混合物过夜处理后HER2和HER3表达水平的蛋白免疫印迹分析。图16 示 0E19，N87, ZR-75-30，BT474 和 HCC202 细胞系经上述 10 μ g/ml 单克隆抗体或抗体混合物处理48小时后HER2表达水平的蛋白免疫印迹分析。 图17-19示不同抗体混合物对NCI-N87胃癌细胞系(图17)、BT474乳腺癌细胞系(图18)和HCC202乳腺癌细胞系(图19)代谢活性抑制的滴定结果。发明详述定义“抗体”或“抗体分子”指功能性血清组分，通常指分子集(抗体或免疫球蛋白)或一种分子(抗体分子或免疫球蛋白分子)。抗体能够与特殊抗原决定簇(抗原或抗原表位)结合或反应，反过来可诱导免疫效应机制。通常认为单个抗体是专一性的，抗体组合物可以是单克隆(即由相同的抗体分子组成)或多克隆(即由与同一抗原或甚至不同抗原的相同或不同表位反应的2种或多种不同抗体)抗体。每一种抗体都具有能够与其相应抗原特异性结合的独特结构，所有自然抗体具有相同的基本结构，即2个相同的轻链和2个相同的重链。同时抗体还被总称为免疫球蛋白。本专利中的“抗体”还包括嵌合和单链抗体以及抗体的结合片段，例如Fab、Fv片段或单链Fv(ScFv)片段，以及多聚体形式，例如二聚体IgA分子或五价IgM。抗体可以是人源的或非人源的，例如小鼠或其它啮齿类动物来源抗体，或基于小鼠抗体的嵌合、人源化或再塑形抗体。通常一种抗体的每一重链包含一个重链可变区(VH)和一个重链恒定区重链恒定区通常包含3个结构域，即CH1，CH2和CH3。通常一种抗体的每一轻链包含一个轻链可变区(VL)和一个轻链恒定区轻链恒定区通常包含单个结构域，即CL。VH和VL区可被再分为高变区(“高变区”，其序列和/或结构界定环中高度可变)。同时还指互补性决定区(CDR)，其散在分布于更为保守的骨架区(FR)。每一 VH和VL通常包括3个⑶R和4个FR，从氨基端至羧基端按以下顺序排列FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。可变区内氨基酸残基通常采用标准编号方法进行编号(Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，MD，USA) o在附录的序列表中，轻链(LC) DNA和氨基酸序列包含轻链可变区(VL)序列和人κ恒定区序列。如例I中所述，人K恒定区以氨基酸-TVAAP-(Thr Val Ala Ala Pro)开始，以C端氨基酸-NRGEC (Asn Arg Gly Glu Cys)结束。因此，本专利中“轻链可变区序列”或“VL”可被理解为人K恒定区开始前的序列表中轻链序列的N端部分(即氨基酸TVAAP)。
本专利中所用的全抗体编号，例如“抗体4517”，指示例中和附录序列表中的定义的特异抗体。例如，抗体4517中重链包含重链可变区SEQ ID NO 2和IGHGl重链恒定区SEQ IDNO : 44，轻链序列为SEQ ID NO :4，如上所述，轻链序列包含轻链可变区(SEQ ID NO:4中的残基1-110)和人K恒定区序列(SEQIDN0 4中的残基111-216)。本专利中在描述一种抗体为“来源于”或“基于” 一种特定抗体时，意味着“来源”抗体包含(根据特定背景)以下一种所述特定抗体的重链⑶R3序列；所述特定抗体的重链⑶R3序列和轻链⑶R3序列；所述特定抗体的重链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列和轻链⑶R1，CDR2和CDR3序列；或所述特定抗体的重链可变区和轻链可变区序列，或所述重链可变区序列和/或轻链可变区序列人源化抗体，或重链和/或轻链可变区序列至少80%,85%,90%或95 %序列与对应的重链和/或轻链可变区序列相同，例如至少96 %，97 %，98 %或99 %序列相同。本专利中所述来源或基于某一特定抗体的一种抗体通常结合与所述特定抗体相同 的HER2表位，并优选与所述特定抗体活性基本相同的抗体。抗体与目标抗原相互作用的特异性主要取决于位于重链和轻链6个CDR中的氨基酸残基。因此抗体之间CDR内的氨基酸序列的变异较CDR区外序列多得多。因为CDR序列与大多数抗体抗原相互作用相关，可以表达模拟某一天然存在抗体特性的重组抗体，或者给定氨基酸序列的特定抗体，通过构建表达载体，将特定抗体CDR序列移植到另一抗体的骨架区序列。这样，可以将一种非人源抗体“人源化”，仍大量保留原始抗体的结合特异性和亲和性。下面将对人源化进行更详细的讨论。“嵌合抗体”广义上指包含来自一种抗体的一个或多个区域，以及来自一种或多种其它抗体的一个或多个区域的抗体。在本专利中，“嵌合抗体”通常是部分人源及部分非人源的抗体，即其中一部分来自非人类的动物，例如小鼠或其它啮齿类，或禽类，例如鸡。嵌合抗体比非人源抗体好，这是为了降低人类对抗体的应答风险，即小鼠抗体会使人体产生抗鼠抗体。例如，典型的嵌合抗体中可变区序列来自小鼠免疫后的鼠源序列，而恒定区为人源序列。对于嵌合抗体，非人源的部分，即通常为可变区序列的骨架区，容易进一步改变，从而对抗体进行人源化。“人源化”指的是抗体全部或部分为非人源，例如使用目的抗原免疫小鼠后获得的抗体或基于鼠源抗体的嵌合抗体，可以替换某些氨基酸，特别是重链和轻链骨架区和恒定区的氨基酸，这样能够避免或降低人体免疫反应。现在我们已经知道，所有抗体都能激发人体产生对抗抗体的反应，而这与抗体的“人源化”程度相关。虽然我们不可能精确地预测免疫原性，从而预测人体对某一抗体的对抗反应，但非人源抗体要比人源抗体免疫原性更强。嵌合抗体的外源(通常为啮齿类来源)恒定区被人源序列替代，与完全外源序列的抗体相t匕，其免疫原性通常较低，治疗性抗体通常更倾向于使用人源化或完全人源抗体。因此，对于嵌合抗体或其它非人源抗体，优选经过人源化以降低人体对抗体的对抗应答风险。对于嵌合抗体，人源化经常会设计可变区序列的骨架区修改。互补性决定区(CDR)的部分氨基酸残基通常在人源化中不会被改变，虽然在某些情况下需要改变个别的CDR氨基酸残基，例如去除糖基化位点、脱酰胺化位点或不需要的半胱氨酸残基。目前已有众多抗体序列人源化的方法；参见综述Almagro & Fransson(2008)Front Biosci. 13 :1619-1633。最常用的方法为CDR移植，例如，一个小鼠来源的嵌合抗体参与鉴别与鼠源可变区基因相似的人类生殖细胞基因，将鼠源CDR序列植入此骨架中。可根据Kabat Q)R定义进行⑶R移植，不过最近发表的文章(Magdelaine-Beuzelin etal.(2007) CritRev. Oncol Hematol. 64 :210-225)提不 IMGT 定义(www. imgt. org)可改进人源化结果。由于CDR移植可降低植入CDR的非人源抗体的结合特异性和亲和性，从而降低生物活性，可在移植CDR抗体的所选位置引入反向突变，从而保留母抗体的结合特异性和亲和性。可使用文献中和抗体数据库中的可用信息对可能的反向突变进行位置鉴定。反向突变的候选氨基酸残基通常位于抗体分子表面，而且隐藏的或表面暴露度低的残基通常不会被改变。除CDR移植和反向突变外，另一替代性人源化技术为重塑抗体，保留那些非人源非表面暴露的残基，而将表面残基更改为人源残基。如前所述，本发明包含人源化抗体，即已经人源化的抗体。也可以指本发明抗体的“人源化亚型”。特别地，本专利中指代任何特定氨基酸序列的“重链可变区序列”和“轻链可变区序列”同时包含这一特定序列以及该特定序列的任何人源化亚型。在本专利中，与某一特定重链或轻链可变区序列相比，具有序列等同度最低程度的重链可变区序列或轻链可变区序列，即具有至少80%，85%，90%或95%的序列等同度，例如至少96 %，97 %，98 %或99 %的序列等同度，包括但不限于此类参考序列的人源化亚 型。“重组抗体”指的是细胞或转染表达含有该抗体编码序列的载体(或多个表达载体，通常为2种表达载体)的细胞系表达的一种抗体，其中编码序列通常与该细胞无关。“载体”是一种核酸分子，可以向其中插入一核酸序列，用于不同基因环境的运输和/或宿主细胞内的表达。携带核酸序列转录调控元件的载体为“表达载体”。“质粒”和“载体”可互换使用。本发明中使用的表达载体可以是任何现有技术已知的适合载体，例如质粒或病毒载体。“多克隆抗体”指的是可以与同一或不同抗原的不同抗原决定簇结合或反应的2种或多种抗体分子组合物。在本发明中，多克隆抗体的单个抗体可以与HER2的不同抗原决定簇结合。优选本发明中多克隆抗体的单个抗体与HER2不同表位结合，更优选与基本不重叠的不同表位结合。通常认为多克隆抗体的差异性位于抗体分子的可变区。“抗HER2重组多克隆抗体组合物”是一种包含与HER2结合的2种或多种单克隆抗体混合物的组合物。现有技术已确立，抗体存在着不同同型，例如人类同型IgGl, IgG2, IgG3, IgG4,IgAl和IgA2，或小鼠同型IgGl, IgG2a，IgG2b，IgG3和IgA0本发明的抗体可以是任何同型。虽然本发明多克隆抗体组合物的单个抗体可以包含多种同型的抗体，但优选为同一同型。一种包含“至少抗HER2的第一和第二重组抗体”的重组抗体组合物将包含至少2种指定抗体，但可能包含本专利中2种以上的抗HER2抗体。在某些情况下，这类重组抗体组合物可能包含相当多的单个抗HER2抗体，例如10个或更多，15-20个，但通常包含少于IO个不同的HER2抗体，即2，3，4，5，6，7，8或9个抗体。更为常见的是，本发明的重组抗体组合物包含不超过6个不同的抗HER2抗体，在大多数情况下，不超过4个不同的抗HER2抗体。在优选的实施例中，本发明的重组抗体组合物将包含2、3、或4种不同的抗HER2抗体，通常为2或3种不同的抗HER2抗体。“⑶R”或“互补性决定区”指的是抗体可变区中的“高变”区，其主要决定抗体的结合特异性。参见 CDR 定义Lefranc et al (2003), IMGT unique numbering forimmunoglobulin and T cellreceptor variable domains and Ig superfamily V-Iikedomains, Dev. Comp Immunol. 27，55-77。抗体的每一重链和轻链都包含3个CDR区，即CDR1，⑶R2和⑶R3，其中⑶R3差异最大。“表位”指动物体内拥有抗原活性或免疫原性的较大分子(例如抗原和抗原活性位点)的一部分。具有免疫原性的表位是可激发动物抗体反应的较大分子的一部分。具有抗原活性的表位是经现有已知方法确定的抗体可免疫特异结合的较大分子的一部分。抗原表位无需具有免疫原性。抗原是抗体或抗体片段可免疫特异结合的物质，例如毒素、病毒、细菌、蛋白或DNA。抗原或抗原位点通常不只一个表位，除非其非常小，而且通常可刺激免疫反应。表位可以是线性表位或构象表位。线性表位一般由一个蛋白分子上邻近的约6-10个氨基酸组成，该蛋白分子可被抗体识别。相反地，构象表位由非序列排列的氨基酸组成，但是抗体可识别一个特定的三维结构。但一个蛋白分子折叠为三维结构时，组成表位的氨基酸并列，这样抗体可识别构象表位。在变性的蛋白质中，仅线性表位可被识别。根据定义，构象表位必须位于折叠蛋白的外部。“不同表位”指，当本发明中2种不同抗体与不同表位结合时，抗原结合竞争低于 100 %,优选抗原结合竞争低于80 %,更优选抗原结合竞争低于50 %,而且最优选竞争尽可能低的，例如抗原结合竞争低于25%。互相竞争结合同一抗原的抗体可结合相同或重叠的表位，或在互相紧邻区存在结合位点，这样竞争主要是由空间位阻造成。可采用现有技术已知方法进行抗体对“不同表位”分析，例如通过饱和抗体条件下的结合实验，可采用FACS (荧光激活细胞分选)或其它流式细胞仪和荧光标记抗体对表达HER2的细胞进行分析，或通过表面等离子体共振技术(SPR)，采用HER2抗原捕获或结合至流动细胞表面。示例中描述采用SPR确定抗体间竞争的方法。不同表位优选“非重叠”表位，本发明组合物中的2种不同抗HER2抗体的抗原结合竞争足够低，2种抗体能够同时与其对应表位结合。熟知本领域的技术人员了解可以存在不同程度的重叠，而且尽管会存在一些程度的重叠，不同表位可以考虑“不重叠”表位，只要相应抗体能够基本结合其表位。当两种抗体间抗原结合竞争低于约50%时，通常可考虑适用这一,清况。与同一抗原不同表位结合的抗体对抗原结合活性影响不同，这取决于表位的位置。与抗原活性位点表位结合的抗体可完全阻断抗原功能，但与另一表位结合的抗体可能单独会对抗原活性影响较小，或没有影响。但这类抗体仍然可激活补体，从而导致抗原消除，在与结合同一抗原不同表位的一种或多种抗体联用时，可能会导致协同作用。在本发明中，表位优选HER2胞外结构域。本发明的抗原优选HER2胞外结构域、多肽或与抗体或抗体片段免疫特异结合的片段。HER2相关抗原也可以是HER2胞外结构域、多肽或与抗体或抗体片段免疫特异结合的片段的类似物或衍生物。“免疫球蛋白”通常为血液或血清中抗体混合物的总称，但也可用于指代其它来源抗体混合物。“同源Vh和\编码对”指同一抗体生成细胞内含有或来源的原始配对的Vh和\编码序列。因此，同源Vh和' 编码对指来源细胞供体本身存在的Vh和\对。“VH和\编码对表达抗体”指由一个载体、质粒或其它含有Vh和\编码序列的多核苷酸生成的一种抗体或抗体片段。在表达同源Vh和\编码对时，无论是完整抗体还是稳定片段，其都保留着来源细胞本身表达抗体的结合亲和性和特异性。同源对库也指同源对的集合，可单独保存。“蛋白”或“多肽”指的是任何长度或后翻译修饰的氨基酸链。蛋白可以作为单体或多聚体存在，包含2个或多个组装的多肽链、蛋白片段、多肽、寡肽和肽。“头对头启动子”指的是一对紧密相邻的启动子对，由启动子驱动的2个基因片段以相反方向转录。头对头启动子也称为双向启动子。本专利中的“转染”是将外源DNA导入细胞的广义术语。其还包含其它功能等同的将外源DNA导入细胞的方法，例如转化、感染、转导或供体细胞核受体细胞融合。如“发明背景”中所述，“HER2” (也称为HER2/neu和ErbB_2)指的是“人表生长因子受体2”。本专利中指包括HER2的变异体、亚型和同源基因。优选，本发明中的一种抗体与HER2结合抑制表达HER2的细胞(例如通常为肿瘤细胞)生长，该抑制通过抑制HER2与其它ErbB家族成员间异源二聚体的形成而实现，例如与EGFR或HER3异源二聚化。 本专利中“抑制生长”(例如，细胞生长)包含增殖(细胞数量增加)或代谢发生任何可测量到的减少，当与一种抗HER2抗体接触时，与不存在抗HER2抗体时的相同细胞生长相比，例如至少抑制细胞培养物生长约10%，且优选抑制率更高者，例如至少约20%或30 %，更优选抑制率至少约40 %或50 %，例如至少约为60 %，70 %，80 %，90 %，99 %或甚至100%。本专利中“抑制二聚化”或“抑制二聚体形成”指与不存在抗HER2抗体时二聚体形成情况相比，由于其与一种抗HER2抗体结合，HER2与例如EGFR，HER3或HER4形成二聚体的能力发生任何可测量的降低。本专利中的“治疗”指的是足量给予一种本发明的抗HER2抗体或抗体组合物以减轻、减缓或消除(治愈)疾病状态。给予本发明中的2种或更多的抗HER2抗体通常通过同时给予抗体，优选含有所有抗HER2抗体组合物用于治疗。但也可分别给予本发明中的2种或更多的抗HER2抗体。这里的给予由至少2种抗HER2抗体组成的重组抗体组合物应当被理解为不仅给予包含此类至少2种抗体组成的组合物，还包含分别给予抗体。因此可同时、序贯或分别给予本发明的2种或多种抗HER2抗体组合。两个序列的相同百分数，例如可变区序列，指的是序列中相同位置的数量(计算为相同位置数量/总位置数量*100)，考虑必须引入用于两个序列最佳对准的间隔。比较序列和确定两个序列见的相同度百分数是通过现成的软件完成。合适的软件程序可来自于各种资源，可在线使用或下载使用，用于比对蛋白和核苷酸序列。一种合适的程序为Clustalff (Thompson et al. (1994)Nucleic Acids Res 11 ；22 (22) :4673-80),可以从www.clustal. org或欧盟生物统计研究所(www. ebi.ac.uk)下载,其提供各类其它的蛋白和核苷酸统计工具。特别实施例本发明的一方面涉及多种新型抗HER2抗体。在一实施例中，本发明涉及一种抗HER2重组抗体，其包含本专利所述抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517,4518和4519中任一抗体的重链CDR3序列。在另一实施例中，本发明涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 中任一抗体的重链 CDR3 序列。在另一实施例中，本发明涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 中任一抗体的重链 CDRl、CDR2 和⑶R3序列和轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在另一实施例中，本发明的涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518和4519中任一抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列；或包含所述重链和/或轻链可变区序列的人源化序列，或包含重链可变区序列和轻链可变区序列，其分别与所述重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95 %的相同序列，例如与所述序列至少96 %，97 %，98 %或99 %的序列相同。在另一实施例中，本发明涉及一种抗HER2重组抗体，其可与上述任一抗体的相同表位结合并与之竞争结合，以及由I种或多种此类抗体组成的抗体组合物，优选至少包含2种此类抗体，例如本专利中其它部分所述2种或3种此类抗体。如同附录序列表，下面的表I 示抗体 4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518和4519抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(LC) DNA和氨基酸序列的序列ID号。如上所释，序列表中轻链DNA和氨基酸序列包括轻链可变区序列(VL)和人K恒定区序列。表I :所选抗HER2抗体重链可变区和轻链的DNA和氨基酸序列的序列ID号
VHDNAVHLCDNA lf;LCMtfHl :
抗 编号~~~~~
iMaaa
45171234
45185678 4380/4381 9 10 11 12
I4382O141516438317181920
438421222324
4385252728
4386293§3132
438733343536
451937383940本发明的一项特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4517的重链⑶R3序列，优选包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4517的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4517重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4518的重链⑶R3序列，优选包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4518的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4518重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4380/4381的重链⑶R3序列，优选包含抗体4380/4381的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4380/4381的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，或包含抗体4380重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380/4381的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85 %，90%或95 %的相同序列。在本实施例中，优选4380。抗体“4380/4381”指的是VH和LC氨基酸序列分别为SEQ ID N0:10和12的一种抗体。正如SEQ IDNO :12所示，40位氨基酸残基可以为酪氨酸或苏氨酸。抗体4380和4381直接唯一的差异为在抗体4380中，LC序列40位氨基酸残基为酪氨酸，而在抗体4381中，40位氨基酸残基为苏氨酸。原始小鼠抗体中，该位置为游离的半胱氨酸。在这两种抗体中，通常优选4380。本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4382的重链⑶R3序列，优选包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4382的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4382重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382 的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4383的重链⑶R3序列，优选包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4383的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4383重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4384的重链⑶R3序列，优选包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4384的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4384重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4385的重链⑶R3序列，优选包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4385的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4385重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4386的重链⑶R3序列，优选包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4386的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4386重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4387的重链⑶R3序列，优选包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4387的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4387重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。
本发明的另一特殊实施例涉及一种抗HER2重组抗体，其包含抗体4519的重链⑶R3序列，优选包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列，例如抗体4519的重链和轻链⑶Rl，CDR2和CDR3序列，或包含抗体4519重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列，或包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。本发明的另一方面涉及一种重组抗体组合物，其至少包含抗HER2的第一和第二抗体，第一和第二抗体与HER2的不同表位结合，而且其中一种或两者可选自上述抗体组。本发明该方面的一项实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含抗HER2的第一和第二抗体，第一和第二抗体与HER2的不同表位结合，而且其中第一和第二抗体包含可选自抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 的一种抗体的重链 CDR3序列。本发明该方面的一项实施例涉及一种重组抗体组分，其至少包含抗HER2的第一和第二抗体，其中第一和第二抗体与HER2的不同表位结合,而且其中第一和第二抗体包含 可选自抗体 4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 的一种抗体的重链和轻链⑶R3序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含抗HER2的第一和第二抗体，其中第一和第二抗体与HER2的不同表位结合,而且其中第一和第二抗体包含可选自抗体 4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 的一种抗体的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含抗HER2的第一和第二抗体，其中第一和第二抗体与HER2的不同表位结合，而且其中第一和第二抗体包含可选自抗体 4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 的一种抗体的重链可变区序列或其人源化序列，以及轻链可变区序列或其人源化序列；其中第一和第二抗体包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与可选自抗体4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 的一种抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含抗HER2的第一和第二抗体，其中第一和第二抗体与HER2的不同表位结合,而且其中第一和第二抗体包含可选自抗体 4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 或其人源化抗体。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含抗HER2的第一和第二抗体，其中第一和第二抗体与HER2的不同表位结合,而且其中第一和第二抗体包含可选自与抗体 4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和 4519 结合同一表位和竞争结合的抗体。本发明的另一实施例为一种抗体组合物，至少包含与HER2不同表位结合的抗HER2重组抗体的第一和第二抗体，其中至少一种所述抗体选自以下组合物(a) 一种抗体，包含抗体4382的重链CDR3序列(SEQ ID NO 56)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 82)；(b) 一种抗体，包含抗体4383的重链CDR3序列(SEQ ID NO 59)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 84)；(c) 一种抗体，包含抗体4384的重链CDR3序列(SEQ ID NO 62)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 86)；(d) 一种抗体，包含抗体4385的重链CDR3序列(SEQ ID NO 65)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 88)；(e) 一种抗体，包含抗体438 6的重链CDR3序列(SEQ ID NO 68)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 90)；(f) 一种抗体，包含抗体4387的重链CDR3序列(SEQ ID NO 71)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 92)；(g) 一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列(SEQ ID NO 47)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 76)；(h) 一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列(SEQ ID NO 50)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 78)；⑴一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列(SEQ ID NO 74)和轻链CDR3序列(SEQ IDNO 93)；以及(j) 一种抗体，包含抗体4380的重链CDR3序列(SEQ ID NO 53)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO 80)。优选所述抗HER2抗体的第一和第二抗体均可选自抗体(a)-(j)。抗体组合物还可包含抗HER2重组抗体的第三抗体，优选为选自上述抗体(a)-(j)的一种抗体。在另一实施例中，抗体组合物可以包含至少与HER2不同表位结合的抗HER2重组抗体的第一和第二抗体，其中所述第一和第二抗体均可与上述任一抗体(a)-(j)的相同表位结合并与之竞争结
口 ο本发明的另一实施例为一种抗体组合物，至少包含与HER2不同表位结合的抗HER2重组抗体的第一和第二抗体，其中至少一种所述抗体选自以下组合物(A) 一种抗体，包含抗体4382重链可变区(SEQ ID NO 14)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 16)的CDR1、CDR2和CDR3 ；(B) 一种抗体，包含抗体4383重链可变区(SEQ ID NO 18)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 20)的CDR1、CDR2和CDR3 ；(C) 一种抗体，包含抗体4384重链可变区(SEQ ID NO 22)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 24)的CDR1、CDR2和CDR3 ；(D) 一种抗体，包含抗体4385重链可变区(SEQ ID NO 26)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO :28)CDR1、CDR2 和 CDR3 ；(E) 一种抗体，包含抗体4386重链可变区(SEQ ID NO 30)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 32)的CDR1、CDR2和CDR3 ；(F) 一种抗体，包含抗体4387重链可变区(SEQ ID NO 34)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 36)的CDR1、CDR2和CDR3 ；(G) 一种抗体，包含抗体4517重链可变区(SEQ ID NO 2)的CDRU CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO :4)CDR1、CDR2 和 CDR3 ;(H) 一种抗体，包含抗体4518重链可变区(SEQ ID NO 6)的CDRU CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 8)的CDR1、CDR2和CDR3 ；(I) 一种抗体，包含抗体4519重链可变区(SEQ ID NO 38)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 40)的CDR1、CDR2和CDR3 ;以及(J) 一种抗体，包含抗体4380重链可变区(SEQ ID NO 10)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 12)的CDR1、CDR2和CDR3。在本实施例中，优选所述抗HER2抗体的第一和第二抗体选自上述抗体(A)-(J)。抗体组合物还可至少包含抗HER2重组抗体的第三抗体，优选为选自上述抗体(A)-(J)的一种抗体。在另一实施例中，抗体组合物可以包含至少与HER2不同表位结合的抗HER2重组抗体的第一和第二抗体，其中每一所述第一和第二抗体均可与上述任一抗体(A)-(J)的相同表位结合并与之竞争结合。本发明该方面的一项特别实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为 ·抗体4380及4382或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4382的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种基于抗体4380和4382的组合物，其至少包含一种其它抗体，特别有选自基于抗体4385，4517和4518的抗体。其中一项此类实施例涉及一种重组抗体组合物，包含第一、第二和第三重组抗体，其中第一、第二和第三抗体为·抗体4380、4382和4385或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4385的重链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链CDRl，CDR2和CDR3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明的另一此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第一、第二和第三抗体，其中第一、第二和第三抗体为·抗体4380、4382和4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链 ⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链CDRl，CDR2和CDR3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明的另一此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第一、第二和第三抗体，其中第、第二和第三抗体为·抗体4380、4382和4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链CDRl，CDR2和CDR3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明的另一此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第一、第二、第三和第四抗体，其中第一、第二、第三和第四抗体为·抗体4380、4382、4385和4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；
· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；或 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列； 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95%的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95%的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4380及4383或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4383的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种基于抗体4380和4383的组合物，其至少包含一种其它抗体。其中一项此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第一、第二和第三抗体，其中第一、第二和第三抗体为·抗体4380、4383和4384或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4383的重链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4384的重链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4384的重链和 轻链CDRl，CDR2和CDR3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4380及4384或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链CDR3序列；· —种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种基于抗体4380和4384的组合物，其至少包含一种其它抗体，特别有选自基于抗体4385、4517、4518和4519的抗体。其中一项此类实施例涉及一种重组抗体组合物，包含第一、第二和第三重组抗体，其中第一、第二和第三抗体为
·抗体4380、4384和4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链CDRl，CDR2和CDR3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或
一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明的另一此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第一、第二和第三抗体，其中第一、第二和第三抗体为·抗体4380、4384和4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体,包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链CDRl，CDR2和CDR3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明的另一此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第、第二和第三抗体，其中第一、第二和第三抗体为·抗体4380、4384和4519或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4519的重链⑶R3序列；
· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体,包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链CDRl，CDR2和CDR3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含 一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明的另一此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第一、第二、第三和第四抗体，其中第一、第二、第三和第四抗体为·抗体4380、4384、4385和4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4384的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4380及4385或其人源化抗体；
· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；
一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4380及4386或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4380及4387或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4380及4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；
· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4380及4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体,包含抗体4380的重链和轻链可变区序列,和一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4380及4519或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4380的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4380的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4380的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或9·5 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4382及4384或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4382及4385或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85 %，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。
本发明该方面的另一实施例涉及一种基于抗体4382和4385的组合物，其至少包含一种其它抗体。其中一项此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第一、第二和第三抗体，其中第一、第二和第三抗体为·抗体4382、4385和4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链CDRl，CDR2和CDR3序列；
一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列； 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为 ·抗体4382及4386或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4382及4387或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链CDR3序列；
· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种基于抗体4382和4387的组合物，其至少包 含一种其它抗体。其中一项此类实施例涉及一种重组抗体组合物，其包含第一、第二和第三抗体，其中第一、第二和第三抗体为·抗体4382、4387和4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4387的重链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链CDRl，CDR2和CDR3序列； 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列；一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链可变区序列；和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列；一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%的相同序列；和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80%,85%,90%或95%的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4382及4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面 的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4382及4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4382的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4382的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4382的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4382的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4383及4384或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4383的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4383及4385或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4383的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。
本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4383及4386或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4383的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4383及4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4383的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4383及4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4383的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4383及4519或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4383的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4383的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4383的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4383的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4384及4385或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4384的重链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4385的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列；
· 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4384及4387或其人源化抗体；·· 一种抗体，包含抗体4384的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4384及4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4384的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4384及4519或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4384的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4384的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或
一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4384的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4385及4386或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4385的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体,包含抗体4385的重链和轻链可变区序列,和一种抗体,包含抗体4386的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4385及4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4385的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。 本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4385及4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4385的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体,包含抗体4385的重链和轻链可变区序列,和一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4385及4519或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4385的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4385的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4385的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体,包含抗体4385的重链和轻链可变区序列,和一种抗体,包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4385的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4386及4387或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4386的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体,包含抗体4386的重链和轻链可变区序列,和一种抗体,包含抗体4387的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。
·
本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为 抗体4386及4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4386的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4386及4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4386的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4386及4519或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4386的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4386的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体,包含抗体4386的重链和轻链可变区序列,和一种抗体,包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4386的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4387及4517或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4387的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； —种抗体，包含抗体4387的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4387及4518或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4387的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列；
· 一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； —种抗体，包含抗体4387的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4387及4519或其人源化抗体； · 一种抗体，包含抗体4387的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4387的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4387的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4387的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4517及4519或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4517的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列；· 一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体，包含抗体4517的重链和轻链可变区序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4517的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。本发明该方面的另一实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含第一和第二抗体，其中第一和第二抗体为·抗体4518及4519或其人源化抗体；· 一种抗体，包含抗体4518的重链⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列；· 一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链⑶R3序列,和一种抗体,包含抗体4519的重链和轻链⑶R3序列；· 一种抗体，包含抗体4518的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，和一种抗体，包含抗体4519的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列； 一种抗体,包含抗体4518的重链和轻链可变区序列,和一种抗体,包含抗体4519的重链和轻链可变区序列；或 一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4518的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85%，90%或95 %的相同序列，和一种抗体，包含一个重链可变区序列和一个轻链可变区序列，其分别与抗体4519的重链和轻链可变区序列具有至少80 %，85 %，90 %或95 %的相同序列。因此，优选本发明的重组多克隆抗HER2抗体组合物，其中包含的第一和第二抗体分别为以下抗体· 4380 和 4382，· 4380 和 4383，· 4380 和 4384，· 4380 和 4385，· 4380 和 4386，· 4380 和 4387，· 4380 和 4517，· 4380 和 4518，· 4380 和 4519，· 4382 和 4384，· 4382 和 4385，· 4382 和 4386，· 4382 和 4387，· 4382 和 4517，· 4382 和 4518，· 4383 和 4384，· 4383 和 4385，· 4383 和 4386，· 4383 和 4517，· 4383 和 4518，· 4383 和 4519，· 4384 和 4385，· 4384 和 4387，
· 4384 和 4517，· 4384 和 4519，· 4385 和 4386，· 4385 和 4517，· 4385 和 4518，· 4385 和 4519，· 4386 和 4387，· 4386 和 4517，· 4386 和 4518，· 4386 和 4519，· 4387 和 4517， · 4387 和 4518，· 4387 和 4519，· 4517 和 4519，· 4518 和 4519 ；或其人源化抗体；或抗体来源于列出的每对抗体对中的单个抗体，例如，其中的第一和第二抗体包含所述抗体重链的CDR3序列，或其中的第一和第二抗体包含所述抗体重链和轻链的CDR3序列，或其中的第一和第二抗体包含所述抗体重链和轻链的CDR1，CDR2和CDR3序列，例如所述抗体重链和轻链可变区及其人源化抗体。更优选本发明的重组多克隆抗HER2抗体组合物，其中包含选自以下组合的2、3或4种抗体· 4380 和 4382，· 4380 和 4384，· 4380 和 4518，· 4382 和 4385，· 4382 和 4518，· 4383 和 4518，· 4384 和 4385，· 4384 和 4517，· 4385 和 4518，· 4380,4382 和 4385，· 4380,4382 和 4517，· 4380,4382 和 4518，· 4380,4383 和 4384，· 4380,4384 和 4517，· 4380,4384 和 4518，· 4380,4384 和 4519，· 4382,4385 和 4518，· 4382,4387 和 4517，
· 4380，4382，4385 和 4518，· 4380，4384，4385 和 4518 ；或其人源化抗体；或抗体来源于列出的每一抗体组合中的单个抗体，例如，其中单个抗体包含所述抗体重链的CDR3序列，或其中单个抗体包含所述抗体重链和轻链的CDR3序列，或其中单个抗体包含所述抗体重链和轻链的⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，例如所述抗体重链和轻链可变区及其人源化抗体。仍然更优选本发明的重组多克隆抗HER2抗体组合物，其中包含选自以下组合的2或3种抗体· 4382 和 4518，· 4384 和 4517，· 4382,4385 和 4518，· 4382,4387 和 4517 ;或其人源化抗体；或抗体来源于列出的每一抗体组合中的单个抗体，例如，其中单个抗体包含所述抗体重链的CDR3序列，或其中单个抗体包含所述抗体重链和轻链的CDR3·序列，或其中单个抗体包含所述抗体重链和轻链的⑶R1，⑶R2和⑶R3序列，例如所述抗体重链和轻链可变区及其人源化抗体。另一项实施例涉及一种重组抗体组合物，其至少包含抗HER2的第一和第二抗体，其中第一和第二抗体与HER2的不同表位结合，而且第一和第二抗体与上述列出的每一组合物的单个抗体结合同一表位。在一优选方面中，本发明的一种抗HER2重组多克隆抗体组合物，其至少由可以与HER2不同表位结合的3种抗体，更优选第一和第二抗体与HER2结合可导致HER2受体内化，而第三抗体与HER2结合可抑制配体诱导的HER3磷酸化。一般认为，这类抗体组合物可通过以下机制起效其中2种抗体一旦与细胞表面的HER2结合，能够在细胞表面生成一种偶联的抗体-受体网格，这将升高HER2受体内化水平，而第三抗体与HER2结合，这样可阻断HER2和HER3的异源二聚化，从而抑制HER3磷酸化。此类重组多克隆抗体组合物的示例为，抗HER2抗体的第一抗体为4517或4518，抗HER2抗体的第二抗体为4380，4385或4387，和抗HER2抗体的第三抗体为4382，4383或4519 ；或其人源化抗体；或抗体来源于列出的每对抗体对中的单个抗体，例如，其中的第一、第二和第三抗体包含所述抗体重链的⑶R3序列，或其中的第一、第二和第三抗体包含所述抗体重链和轻链的CDR3序列，或其中的第一、第二和第三抗体包含所述抗体重链和轻链的CDR1，CDR2和CDR3序列，例如所述抗体重链和轻链可变区及其人源化抗体。此类优选重组多克隆抗体组合物示例包括以下组合物，其中抗HER2抗体的第一和第二抗体为4518+4385或4517+4387，抗HER2抗体的第三抗体为4382。或其人源化抗体；或抗体来源于列出的每对抗体对中的单个抗体，例如，其中的第一、第二和第三抗体包含所述抗体重链的⑶R3序列，或其中的第一、第二和第三抗体包含所述抗体重链和轻链的CDR3序列，或其中的第一、第二和第三抗体包含所述抗体重链和轻链的CDR1，CDR2和CDR3序列，例如所述抗体重链和轻链可变区及其人源化抗体。在某一实施例中，本发明涉及一种抗体组合物，其包含可与HER2不同表位结合的抗HER2抗体的第一、第二和第三抗体，其中(a)抗HER2抗体的第一抗体包含抗体4517 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO 47)和轻链 CDR3 序列(SEQ IDNO 76)，或者抗体4518 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO 50)和轻链 CDR3 序列(SEQ IDNO 78)；(b)抗HER2抗体的第二抗体包含抗体4380 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO 53)和轻链 CDR3 序列(SEQ IDNO 80)、抗体4385 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO 65)和轻链 CDR3 序列(SEQ IDNO 88)，或者
抗体4387 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO 71)和轻链 CDR3 序列(SEQ IDNO 92)；和(c)抗HER2抗体的第三抗体包含抗体4382 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO 56)和轻链 CDR3 序列(SEQ IDNO 82)、抗体4383 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO 59)和轻链 CDR3 序列(SEQ IDNO 84)，或者抗体4519 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO 74)和轻链 CDR3 序列(SEQ IDNO 93)。在某一优选实施例中，本发明涉及一种抗体组合物，其包含可与HER2不同表位结合的抗HER2抗体的第一、第二和第三抗体，其中(a)该抗HER2第一抗体包含抗体4517重链可变区(SEQ ID NO 2)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQIDNO 4)的 CDR1、CDR2 和 CDR3,或者抗体4518重链可变区(SEQ IDNO 6)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQIDNO 8)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；(b)该抗HER2第二抗体包含抗体4380重链可变区(SEQ ID NO 10)的CDRl、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQIDN0 12)的 CDR1、CDR2 和 CDR3,抗体4385重链可变区(SEQ ID NO 26)的CDRl、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 28)的 CDR1、CDR2 和 CDR3,或者抗体4387重链可变区(SEQ ID NO 34)的CDRl、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 36)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及(c)该抗HER2第三抗体包含抗体4382重链可变区(SEQ ID NO 14)的CDRl、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQIDN0 16)的 CDR1、CDR2 和 CDR3,抗体4383重链可变区(SEQ ID NO 18)的CDRl、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQIDN0 20)的 CDR1、CDR2 和 CDR3,或者抗体4519重链可变区(SEQ ID NO 38)的CDRl、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO 40)的 CDR1、CDR2 和 CDR3。在某一特别优选实施例中，抗HER2抗体的第三抗体包含抗体4382重链可变区CDRl、CDR2 和 CDR3 (SEQ ID NO 14)以及轻链可变区 CDRl、CDR2 和 CDR3 (SEQ ID NO 16)。在这种情况下，抗HER2抗体组合物可以是(a)抗HER2抗体的第一抗体包含抗体4518重链可变区(SEQIDNO :6)CDR1、CDR2和 CDR3 以及轻链可变区(SEQ ID NO :8)CDR1、CDR2 和 CDR3,抗HER2抗体的第二抗体包含抗体4385重链可变区(SEQ ID NO :26) CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO :28) CDR1、CDR2和CDR3 ;或者(b)抗HER2抗体的第一抗体包含抗体4517重链可变区(SEQ ID NO :2)CDR1、CDR2和 CDR3 以及轻链可变区(SEQ ID NO :4)CDR1、CDR2 和 CDR3,抗HER2抗体的第二抗体包含抗体4387重链可变区(SEQ ID NO :34) CDR1、CDR2和CDR3 以及轻链可变区(SEQ ID NO :36) CDR1、CDR2 和 CDR3。特别地，本发明抗HER2抗体组合物可以是
抗HER2抗体的第一抗体包含抗体4518重链可变区(SEQ ID NO :6)CDR1、CDR2和CDR3 以及轻链可变区(SEQ ID NO :8) CDR1、CDR2 和 CDR3，抗HER2抗体的第二抗体包含抗体4385重链可变区(SEQ ID NO :26) CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO :28) CDR1、CDR2和CDR3 ;或者抗HER2抗体的第三抗体包含抗体4382重链可变区3 (SEQ ID NO : 14) CDRl、CDR2和 CDR 以及轻链可变区(SEQ ID NO :16)CDR1、CDR2 和 CDR3。抗体4382与HER2结构域II结合，帕妥珠单抗也是同样情况，以及如例9中所述，抗体4382与帕妥珠单抗类似物均能阻断配体诱导的HER3磷酸化。Franklin等(CancerCell 2004,5(4) :317-28)披露，帕妥珠单抗可在结构域II中心附近与HER2结合，结构阻断HER2-HER3异源二聚化和信号转导所需的结合口袋。因此，除了例如抗体4382和帕妥珠单抗之外，其他以类似方式与二聚化界面结合的抗HER2抗体将具有类似的阻断HER2-HER3异源二聚化的作用，因此从这方面看这类抗体适合用作本发明中的三抗。在与本发明相关的实验中发现，虽然联用本专利中所述2种或多种抗HER2抗体能够有效导致HER2内化和降解，但HER2被抗体靶向的细胞可能会上调HER3的生成。目前认为对抗HER2单克隆抗体(例如曲妥珠单抗)耐药可能与其上调HER3相关，这可能是通过以下机制产生，即HER2-HER3异源二聚体构成一个完整的受体，能够在无HER2同二聚体信号的情况下依然介导癌症信号转导。下面的例9描述了由3种抗HER2抗体组成的本发明抗体组合物，其中2种抗体能够与HER2结合，这样能够生成偶联抗体受体网格，从而导致HER2内化和降解，而三抗可结合HER2，这样阻断了 HER2-HER3异源二聚化，从而避免HER2磷酸化和HER3介导的信号转导。假定这些和类似抗HER2抗体组合物在阻断HER家族磷酸化和信号转导方面具有很强的优势，即该抗体组合物包含至少抗HER2抗体的混合物，其中2种抗体可导致HER2内化和降解，第三抗体可阻断HER2-HER3异源二聚化。特别地，假定这类抗体组合物能够显著降低对抗HER2抗体耐药的肿瘤细胞发育。因此，这类抗HER2抗体组合物可能对预防和减轻抗HER2抗体这类耐药很有价值，并且对治疗已对某种抗HER2单克隆抗体(例如曲妥珠单抗)治疗耐药肿瘤很有价值。本发明的另一方面与抑制对一种抗HER2抗体治疗耐药或部分耐药的肿瘤细胞生长的方法相关，该方法包含将细胞接触一种如上所述的抗HER2重组多克隆抗体组合物，其包含2种能够在细胞表面产生偶联抗体受体网格的抗HER2抗体(导致HER2内化)以及一种与HER2结合的可阻断HER2和HER3异源二聚化的三抗(抑制配体诱导的HER3磷酸化)。例如之前曾采用曲妥珠单抗治疗肿瘤细胞。下面的表2和3不根据本发明的各类抗HER2抗体的重链(表2)和轻链(表3)的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。附录的序列表中列出这些抗体重链可变区和轻链(包括轻链可变区)的氨基酸序列，以及编码DNA序列(优化用于CHO细胞表达)。参见表I中这些序列的SEQID编号汇总。表2 :所选抗HER2抗体重链CDRl，CDR2和CDR3序列
SHQ m XOs
MiMIIHCPRlH CDR2H CPR3CDRIU)
4517GFTFSSYOISGGGSYT CA RKGN YGN YG K LAYW45-47
4518GFN1KDIFIDPANDXP CAGGPAYFDYW48*50· 4380.4381 GYI'MNYVV IHPSDSDY CAKSY^'DSAMDYW 51-53
4182GYTFrDYYISPNKCiGT CVP(iCH.RSYFD￥\V54-5643K3(iVTFTDYSiSTAlXUiP (TAWAYIiPVM^'W57-5943X4 GYiFTSHW INPSNCKiT C'ARAY'i'DFSWFVYW 60-6243H5 (iYTFrCSYW ILPCiSCiSI' (AiUV(iD(iSFA YW 63-6543m (JYll-rSYW Il IFN-SCiSi VMimKGVMDYW 60-6K43H7 (i^*TFTNYW ILFilQQYl CARCiSSCJYPYYFDVW 69-71
4519(iYSITDYNI WYNXKiT CARCiACiYALOYW72-74表3 :所选抗HER2抗体轻链CDRl，CDR2和CDR3序列
SlQ ID NOs
ft律編号LCDRIL CDR2L CD13iCDRim
4517HNlYSNAATCQKIF WGTPWIT75-76
451XQDVLAAWASCQQH YSTPWT F77-78
4380/43H1KSVTTSGYSYVASCHilSRIlPWTF79-H0
4382QDVSAAWASCQQHYTFFFrFHI-K243X3QDVl-TASASCQQilFGIPWTFH3-H4 4M4Q01SNYISCQQCiNlI-PLIl'H5-H6 4385QNVCiTASTSCQQYRSYPFTI*K7-KX 43K6SSVSYRTSCQQYIINYPLTFH9-Q0 4387QDVX ΓΓ AWASCQQYSSYPYNYTf91-92 451ΜSSVSYLTSC'QQWSSTPYTl·'89,93本发明的另一方面涉及核酸分子，其包含一个编码本发明中一种抗体的核苷酸序列，即一种抗体可选自抗体 4380/4381，4382，4383，4384，4385，4386，4387，4517，4518 和4519，或其人源化变异体；或编码此类抗体的重链和/或轻链可变区序列，或一种重链和/或轻链序列，其与此类重链和/或轻链可变区序列具有至少80%，85%，90%或95%相同序列。在本发明该方面的一项实施例中，核酸分子包含一个核苷酸序列，可选自SEQ IDNOS 1，3，5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37 和 39，或编码与所述任一
核苷酸序列相同的氨基酸序列的核苷酸序列。本发明的另一方面涉及一种表达载体，其包含上述核酸分子。如上所述，在本发明中所用表达载体可以是现有技术已知的任何合适类型，例如质粒或病毒载体。本发明的另一方面涉及一种宿主细胞，其包含上述核酸分子，所述宿主细胞能够表达所述核酸分子编码的抗HER2抗体。另一方面，任何2种本专利中披露的抗体的结合特异性可与一种双特异性结合分子组合。优选这类双特异性结合分子包含所选2种抗体的重链和轻链⑶R1，⑶R2和⑶R3序列。双特异性结合分子可以为双向可变区抗体，即其中抗体两臂包含2个不同的可变区，或可以为抗体片段，例如双特异性Fab片段或双特异性scFv。制备抗HER2抗体和抗体组合物本发明的另一方面涉及制备本发明抗HER2抗体或抗HER2多克隆抗体的方法。本发明的一项实施例涉及一种制备所述抗HER2抗体的方法，包含提供一种所述能够表达抗HER2抗体的宿主细胞，在适合表达该抗体的条件下培养所述宿主细胞，并分离得到的抗体。在另一实施例中，本发明涉及制备一种抗HER2多克隆重组抗体组合物的方法，该组合物至少包含第一和第二宿主细胞，其中第一和第二宿主细胞能够表达抗HER2重组抗体，在适合表达第一和第二抗体的条件下培养第一和第二宿主细胞，并分离得到的第一和第二抗体本发明中的一种抗体或抗体组合物可通过现有技术生产重组单克隆或单克隆抗体方法制备。因此，生产本发明的单个抗体时，可采用现有生产重组单克隆抗体的任何方·法。生产由本发明中2种或多种抗HER2抗体组成的一种抗体组合物时，可分别生产单个抗体，即在独立的生物反应器中分别制备单种抗体，或在一个生物反应器中同时生产单种抗体。当一种抗体组合物中的不同抗体数量超过，例如2种或3种，则通常处于成本效率的考虑，优选在一个生物反应器中同时生产抗体。另一方面，当该组合物仅包含少量不同抗体时，例如2种、3种或4种不同抗体，则需要根据具体情况决定是分别在不同的生物反应器中生产,还是在一个生物反应器中同时生产。如果在多个生物反应器中生产抗体组合物，则可通过从每一生物反应器分别纯化得到上清液，再汇总上清液中的抗体，最后得到纯化的抗HER2抗体组合物。在多个生物反应器中生产多克隆抗体的各类方法参见WO2009/129814(引用参考)，其中描述在上游稍晚时间点或在下游加工之前或期间合并细胞系或抗体制备物。在单个生物发生器中生产2种或多种单个抗体，可按WO 2004/061104或W02008/145133所述进行(本专利中引用参考)。W02004/061104所述方法基于抗体编码序列位点特异性整合入宿主细胞中，确保V1^P '在生产过程中维持其原始配对。再者，位点特异性整合可最小化位置效应，因此预期多克隆细胞系中单个细胞的生长和表达特性会非常类似。通常，该方法涉及i) 一种带有I个或多个重组酶识别位点的宿主细胞；ii)与该宿主细胞兼容的至少包含一个重组酶识别位点的表达载体；iii)通过将所选V1^P Vl编码对转移至一个表达载体中，组成表达载体集，从而可从该载体表达全长抗体或抗体片段，如果筛选载体与表达载体相同，则无需这种转移；iv)用表达载体集及一个编码能够与宿主细胞基因在中重组酶识别位点结合的载体转染宿主细胞；v)从转染的宿主细胞获得/生成多克隆细胞系；和vi)从该多克隆细胞系表达和收集抗体组合物。WO 2008/145133描述了一种在单个生物发生器中生产2种或多种抗体的另一种方法。该方法涉及生成一种多克隆细胞系，该细胞系能够表达一种多克隆抗体或其它包含2种或多种不同成分的多克隆蛋白，方法为a)提供一套表达载体，其中所述载体包含至少一种独特的核苷酸拷贝，其编码多克隆蛋白的一种独特成员，在避免表达载体位点特异性整合入细胞基因在的条件下，分别将表达载体转染宿主细胞，从而获得2种或多种细胞组合物，每一组合物表达该多克隆蛋白的一种独特成分；和c)将至少2种细胞组合物混合得到一多克隆细胞系。WO 2004/061104和WO 2008/145133的方法优点为可在单个生物反应器中生产重组多克隆抗体的所有组合物，并通过单一程序纯化，从而避免分别生产和纯化每一种抗体，与此同时可统一生产不同抗体。WO 2008/145133方法还具有提高产量的优点，因为每一种生产细胞可携带编码某一抗体的多核苷酸的多个拷贝。可在各类细胞中生产本发明的抗体，包括哺乳动物细胞和非哺乳动物的真核或原核细胞，例如植物细胞、昆虫细胞、酵母细胞、真菌、大肠杆菌等。但优选在哺乳动物细胞中生产抗体，例如CHO细胞、COS细胞、BHK细胞、myeloma细胞(例如，Sp2/0或NSO细胞)、成纤维细胞，例如NIH 3T3，或永生化人类细胞，例如HeLa细胞、HEK 293细胞或PER. C6细胞。目前本领域技术人员熟知将核苷酸序列转染入宿主细胞的方法(参见，例如Sambrook et al. , Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory Press, 3rd Edition, 2001)。WO 2004/061104 中所述位点特异性整合,适合的 宿主细胞基因组内包含I个或多个重组酶识别位点。在这种情况下，合适的表达载体包含一个匹配宿主细胞重组酶的重组识别位点。W02004/061104详述更多相关信息，例如采用位点特异性整合的方法从一个筛选载体转移所选Vh和\编码对。在单个生物发生器中生成一种包含2个或多个抗HER2抗体的本发明抗体组合物时，可选择具有类似增殖速度和优选类似抗体表达水平的细胞系生成一个多克隆细胞系。然后通过按预定比例混合单个细胞系获得多克隆细胞系。有关生成一种表达多克隆抗体的多克隆细胞系以及使用此类细胞系生产多克隆抗体，如需了解更详细的信息和示例，请参阅 WO 2009/129814、WO 2004/061104 和 WO 2008/145133 (本专利引用参考)。本发明中的一个实施例为一种多克隆细胞系，其能够表达本发明中2种或多种抗HER2抗体。另一实施例为一种多克隆细胞系，其中单一细胞能够表达单一 Vh和\对，而多克隆细胞系整体能表达Vh和\对集合，其中每一 Vh和\对编码一种抗HER2抗体。可在单个生物反应器中生产本发明的一种重组抗体组合物，方法如下在合适的培养基中，将来自多克隆工作细胞库(PWCB)的一个安瓿培养一段时间，以达到足够的抗体表达水平，同时维持多克隆细胞系表达不同抗体的相对表达水平基本均一。通常生产时间在大约15-50天为宜。可采用现有培养技术，例如分批补料式培养或灌注培养。培养基优选无血清培养基，更优选无血清和蛋白培养基，例如化学限定培养基。这类培养基通常用于某种生产类型的细胞培养，而且目前市售有大量合适的培养基制剂。从培养基获得重组抗体组合物，并采用传统纯化技术进行纯化。这些技术包括，例如，亲和层析偶联后续纯化步骤，例如离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤，这些纯化技术经常用于重组抗体纯化。在单个生物反应器中由一个多克隆细胞系生产2种或多种抗体，通常在纯化后评估多克隆抗体组合物中所有单个成分，例如离子交换层析。例如，可采用W02006/007853和WO 2009/065414 (本专利引用参考)中所述方法对一种多克隆抗体组合物定性分析。治疗用组合物本发明的另一方面为一种药物组合物，包含一种活性成分，可以是至少本发明中的一种抗HER2抗体作为，或一种抗HER2重组Fab或另一种抗HER2重组抗体片段组合物。优选此类药物组合物的活性成分为如上所述的包含2种或多种抗HER2抗体的抗HER2重组抗体组合物。此组合物可用于改善、预防和/或治疗癌症。药物组合物可用于人类、家畜或宠物给药，不过通常是人类给药。本发明的一种治疗性组合物中不同抗体间的比例，或在同时、序贯或分别给予本发明不同抗体的情况下，不同抗体间的比例，经常为等量，也可不等量。因此，本发明中含有2种抗HER2抗体的抗体组合物经常采用I : I的比例，而包含3种抗HER2抗体的抗体组合物经常采用I : I : I的比例。不过，根据不同抗体的特性，可能需要不等量配比。本发明抗体组合物中不同抗HER2抗体的合适比例可按W02010/040356所述确定(本专利引用参考)，其中描述了组合药物中化学物质间最佳化学计量比例的确定和选择方法，例如一种多克隆抗体组合物，以获得具有最佳效力和疗效的组合药物。
除了至少一种本发明的抗体或片段外，药物组合物还包括至少一种药用可接受稀释剂、载体或赋形剂。这些可包括，例如防腐剂、稳定剂、表面活性剂/润湿剂、乳化剂、增溶剂和用于调节渗透压的盐和/或缓冲液。溶液或悬液还可包含增稠剂，例如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。药物组合物的合适PH值通常在5. 5-8. 5范围内，约6-8，例如7，可使用缓冲液维持合适的pH值。可采用传统的制药方法提供，例如癌症患者给药，合适剂型或组合物。给药通常用于治疗目的，这意味着在确诊癌症后给药。可采用任何合适的给药途径，例如肠胃外、静脉内、动脉内、皮下、肌内、腹膜内、鼻内、气雾剂、栓剂或口服给药。通常本发明的药物组合物以液体溶液或悬液形式给药，更经常以水溶液或悬液，某些情况以等渗溶液或悬液。本发明的药物组合物以已知方法制备，例如通过传统的溶解、冻干、混合、造粒或成型工艺。可根据传统制药技术制备药物组合物(例如，参阅Remington :The Scienceand Practice ofPharmacy(21st edition), ed. A. R. Gennaro,2005, Lippincott Williams& Wilkins, Philadelphia, PA, USA ；and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,ed.J. Swarbrick, 3rd edition,2006, InformaHealthcare, New York, NY, USA)。作为液体剂型的替代剂型，本发明的组合物可制成冻干粉，包含至少一种抗体或与载体一起，例如甘露醇，在使用前可用液体溶解组合物，例如无菌水。药物组合物包含约I %至约95%的活性成分，优选约20%至约90 %。根据本发明，药物组合物可以采用例如单剂量形式，例如安瓿、小瓶、栓剂、片剂或胶囊剂。可以给予人体这些剂型的治疗或预防有效量(例如，预防、消除或减轻病理状况的剂量)，从而治疗癌症或其他疾病。治疗药物的优选给药剂量可能取决于以下变量，例如癌症严重度、某位患者的整体健康状态、化合物赋形剂配方以及给药途径。本发明中抗体和组合物的治疗用途根据本发明制备的抗HER2抗体和药物组合物可用于治疗或改善哺乳动物疾病，特别是治疗人类癌症。本发明的一个实施例为一种预防、治疗或改善人类或其它哺乳动物癌症相关的I种或多种症状的方法，包含向所述哺乳动物给予本发明抗HER2重组抗体组合物的有效剂量。其中一个实施例与治疗患有以HER2过表达为特征的疾病方法，特别是癌症，该方法包含给予所述患者一种本专利中定义的抗HER2抗体，或优选一种包含至少2种本专利中定义的抗HER2重组抗体组合物。另一个实施例涉及一种降低过表达HER2细胞内HER2和其它ErbB家族受体间异源二聚体形成的方法，该方法包含将所述细胞接触一种本专利中定义的抗HER2重组抗体，或优选一种包含至少2种本专利中定义的抗HER2重组抗体组合物。本发明的另一实施例为应用本发明的一种抗HER2重组抗体或抗体组合物制备一种组合物，该组合物用于治疗、改善或预防人类或其它哺乳动物癌症相关的I种或多种症状，例如治疗一名患者，其所患疾病特征为HER2过表达。基于一些因素，包括HER2表达水平，以下癌症类型特别适合采用本发明的一种抗体组合物治疗乳腺癌、卵巢癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、头颈癌和非小细胞肺癌。本发明的抗体组合物特别适合用于治疗过表达HER2的癌症，例如某些上皮细胞癌，例如乳腺癌、卵巢癌和胃癌。这些适应症相关的2个主要临床通路为I)辅助性治疗，至少一种额外治疗性治疗；或2)单药治疗。以下简要讨论这两个选择。I)辅助性治疗在辅助性治疗中，也成为联合治疗，将会使用本发明中的抗体与至少一种其它治疗性疗法联合，通常为一种化疗或抗癌药物和/或放疗。或者或额外地，也 可将本发明中的抗HER2抗体与组合物与一种不同的抗癌抗体联合，例如一种靶向EGFR或VEGF的抗体。因此，除了标准一线和二线疗法外，可通过给予一种本发明的抗体或组合物治疗上述主要癌症靶标。方案设计将通过肿瘤质量减轻及降低常规标准化疗的剂量评估疗效。此剂量降低可通过降低化疗药物的剂量相关毒性从而额外增加和/或延长质量。通过本发明抗体组合物与已知可诱导癌细胞终末分化药物联合，可进一步改善疗效。这类化合物可选自，例如包含视黄酸、反式视黄酸、顺式视黄酸、苯基丁酸盐、神经生长因子、二甲亚砜、维生素D3活性形式、过氧化物酶体增殖物激活受体Y、12-0_十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯、六亚甲基双乙酰胺、转化生长因子-β、丁酸、环磷酸腺苷、和维司力农的基团。优选化合物选自包含视黄酸、苯基丁酸盐、全反式视黄酸和维生素D活性形式的基团。包含本发明的一种抗体组合物和至少一种化疗或抗癌化合物的药品可用于癌症治疗中同时、分开或连续给药的联合治疗。化疗化合物可通过任何适于治疗某一癌症的合适化疗药，例如一种选自含有烷化剂的药物，例如钼类衍生物，例如顺钼、卡钼或奥沙利钼；植物生物碱，例如紫杉醇、多西紫杉醇或伊立替康；抗肿瘤抗生素，例如多柔比星(阿霉素)；拓扑异构酶抑制剂，例如托泊替康；和抗代谢物，例如氟尿嘧啶或其他氟嘧啶。同时预计本发明抗体可用作辅助性治疗，与酪氨酸酶抑制剂(TKI)联用。这些是合成的，通常为喹唑啉衍生物、低分子量分子，其可与受体胞内酪氨酸集美结构域发生相互作用，通过竞争胞内Mg-ATP结合位点，抑制配体诱导的受体磷酸化。目前正在临床开发一些可阻断HER2激酶的酪氨酸酶抑制剂。其中一些还可以靶向EGFR或其它EGFR家族受体。有关这些 TKI 的综述，参阅 Spector et al. (2007)Breast Cancer Res. 9(2) :205。因此由本发明的一种抗体组合物和至少一种靶向HER2的TKI组成的药品还可用于癌症治疗中同时、分开或连续给药的联合用药。在其它实施例中，本发明的抗体组合物可与其它抗体药物联合应用。这些包括靶向EGFR ( Erbkux 或Vectibix.fi)或VEGF (Ava-+'+)的药物。在其它实施例中，本发明的抗体组合物可与一种已知能够刺激免疫系统细胞的药物联用，这类联合用药可增强免疫介导的本发明抗体组合物的疗效。这类免疫刺激药物包括重组白介素(例如IL-21和IL-2)。2)单药治疗根据本发明在肿瘤单药治疗中应用抗体，可在不同时应用化疗或抗癌药物的情况下给予抗体，即单一疗法。免疫偶联物本发明中抗体和组合物的治疗作用的另一选择为免疫偶联物，即将抗体与I种或多种抗癌药物偶联。特别地，当组合物包含本发明的2种或多种不同抗体，其可与不同HER2表位结合，预计其在细胞表面会生成偶联抗体受体网格，与使用单一单 克隆抗体相比，这样可能会升高受体内化水平。因此将此组合物的I种或多种抗体与I种或多种抗癌药偶联可特异地、有效地将偶联抗癌药输送至肿瘤细胞内侧，从而增强本发明抗HER2抗体的作用，提闻杀伤肿瘤细胞的活性。本发明的抗体可与各类抗癌药物偶联，包括细胞毒性药物(包传统化疗药和其它小分子抗癌药)、细胞因子(其中偶联物被称为“免疫细胞因子”)、毒素(其中偶联物被称为“免疫毒素”)和放射性核素，以及一些已批准临床应用的免疫偶联物。其中包括&_11 (偶联9ciY的小鼠抗⑶20抗体)、.Bexxar (偶联mI的小鼠抗⑶20抗体)和Mylotarg (偶联刺孢霉素的小鼠抗CD33抗体).在临床试验测试的其它免疫偶联物包括偶联至，例如阿霉素或美登素化合物的抗体。已经临床试验测试的免疫毒素包括一些偶联至截断的绿脓杆菌外毒素A的抗体。同时还测试过包含人源化EpCAM抗体的免疫细胞因子。本发明中与细胞毒性药物偶联的抗体，可以属于，例如化疗药主要类别的任何一种，包括烷基化剂(例如，卡钼、顺钼、奥沙利钼)，抗代谢物(例如，氨甲喋呤、卡培他滨、吉西他滨)，蒽环类抗生素(如博来霉素、阿霉素、丝裂霉素-c)和植物生物碱(例如，如多西他赛、紫杉醇、紫杉烷类和长春花生物碱，如长春花碱、长春新碱、长春瑞滨)。由于免疫偶联物可特异性将抗癌药靶向肿瘤，特别是内化后靶向肿瘤细胞内部，基于本发明的抗HER2抗体的免疫偶联物基于高细胞毒性剂，例如刺孢霉素或美登生碱衍生物，或基于毒素，如细菌毒素(如绿脓杆菌外毒素A、白喉毒素)或植物毒素(如蓖麻毒素)，较有优势。免疫偶联物中偶联的抗癌药通常通过一个不稳定的接头与抗体连接，该接头在血清中相对稳定的，但当免疫偶联物被内化进入靶向细胞后，它可将药物释放出来。合适的接头包括，例如，化学接头，在血清中性PH值下稳定，但内化后容易在溶酶体内弱酸性条件下发生酸水解，二硫键接头可被细胞内的硫醇裂解，多肽接头在血清中稳定，但在胞内容易被酶解。可在含有2种或多种本发明抗体的组合物内设计各种偶联。例如，2种抗体的话，可以将抗体与2种或多种不同抗癌药偶联，或将一种抗体与一种前药偶联，该前药可被与另一抗体偶联的物质激活(例如酶)。单克隆抗体的抗体导向酶-前体药物疗法(ADEPT)的一般概念已经论述，其中前药通过单克隆抗体-酶偶联物被一种靶向肿瘤的酶激活，但本发明提供一种可调整该方法用于某些情况的方法。因此，可以特异性增加肿瘤细胞杀伤力，同时避免或减轻对正常组织的损伤。有关抗癌免疫偶联物的更多信息，参见Wu et al. (2005)NatureBiotechnology23 (9) : 1137-1146 ;Schrama et al. (2006)Nature Reviews/DrugDiscovery 5 :147-159 ;andRohrer(2009)chimica oggi/Chemistry Today 27(5) :56_60o给药剂量与途径给予有效剂量的本发明抗体和组合物用于治疗疾病，即给予达到所需结果的剂量和时间。治疗有效剂量随多种因素改变，例如治疗的具体疾病、年龄、性别、患者体重以及抗HER2抗体治疗是否为单药治疗还是与I种或多种其它抗癌疗法联合治疗。肿瘤治疗的有效剂量可通过其稳定疾病进展和/或改善患者症状的能力来测定，优选逆转疾病进展，例如通过降低肿瘤大小。本发明的一种抗体组合物抑制肿瘤的能力可通过体外试验评估,如示例中所述,也可通过合适的可预测其对人体肿瘤疗效的动物模型进行评估。可选择合适的剂量方案从而为每一种情况提供最佳的治疗应答，例如，可单次输注或持续输注，并根据每一患者的紧急情况进行剂量调整。虽然目前尚未确定本发明的抗体给药剂量，可通过与类似的已获批用于治疗的药品(一种抗HER2单克隆抗体)比较来确定某一给药剂量。因此，本发明的一种抗体组合物的合理剂量将于抗HER2单克隆抗体曲妥珠单抗(赫赛汀 )的推荐剂量类似。根据具体情况，可给予赫赛汀(输液给药)用于治疗乳腺癌，起始剂量为4mg/kg,然后每周剂量为2mg/kg,或起始剂量为8mg/kg,然后每3周剂量为6mg/kg.本发明抗体组合物的合适剂量在O. Ι-lOOmg/kg范围内，例如约O. 5_50mg/kg,例 如约l_20mg/kg。例如,抗体组合物的给药剂量至少为O. 25mg/kg,例如至少O. 5mg/kg,例如至少lmg/kg,例如至少I. 5mg/kg,例如至少2mg/kg,例如至少3mg/kg,例如至少4mg/kg,例如至少5mg/kg,和例如高达最多50mg/kg,例如高达最多30mg/kg,例如高达最多20mg/kg,例如高达最多15mg/kg。通常以合适间隔重复给药,例如每周一次,每2周一次,每3周一次，或每4周一次，只要负责医师觉得合适即可，医师可按需要增减剂量。本发明抗体可采用3种不同的给药方式。传统静脉内给药是大多数肿瘤的标准给药技术。但腹腔肿瘤，例如卵巢癌、胆管癌、其它管道癌及类似癌症，经证明，腹腔给药对获得肿瘤部位高浓度抗体有利，可使抗体清除降至最低。类似地，某些实体肿瘤具有适合局部灌注的血管结构。局部灌注可在肿瘤部位获得高浓度抗体,并将抗体短期清除降至最低。与任何蛋白或抗体输注治疗用药品相似，安全性问题主要包括(i)细胞因子释放综合征，即低血压、发热、颤抖、寒战；(ii)对该蛋白发生免疫原性反应(即患者对重组抗体药物产生抗体)，及(iii)对表达HER2受体的正常细胞的毒性，例如许多上皮细胞。可采用标准测试和后续程序监视任何此类安全性问题。在此引用参考本申请中所引用的所有专利和非专利文献。在下面的示例(非限制性示例)中将进一步描述本发明。示例例I :抗HER2抗体的克隆免疫注射经纯化的不同蛋白及HER2过表达细胞对雌性BALB/c (品系A)或C57B16小鼠(8-10周龄)进行免疫。采用市售HER2蛋白(R&D Systems cat. #1129_ER)用于免疫。人乳腺癌细胞系AU565(ATCC，CRL-2351)用于细胞免疫。在添加10%胎牛血清(FBS)和I %青链霉素(P/S)的RPMI-1640培养基中培养细胞。在每次免疫之前，用PBS洗涤细胞，用TrypLE消化，然后在生长培养基中重悬。然后用PBS洗涤细胞悬液2次，250g下离心5分钟，然后取出并在15ml无菌PBS中重悬。在PBS中稀释细胞或抗原，然后与弗氏佐剂I : I混合。弗氏佐剂可增强和调节免疫反应。第一次免疫，使用完全弗氏佐剂(CFA)，但在后续的免疫中使用不完全弗氏佐剂(IFA)。IFA是一种水包油的矿物油乳剂，CFA为向IFA添加加热杀死干燥的结核分枝杆菌制成。两种佐剂均具有储备效应。CFA可产生长期持续的免疫反应，可用于首次免疫以增强免疫反应，而IFA用于后续免疫。可通过将一滴滴在一杯水的表面来测试。当这滴仍保持为一滴，则乳剂稳定，可用于注射。只能给小鼠注射稳定的乳剂。根据日程表(参见表4)，每次注射25-100 μ g抗原或IO7个细胞。共注射小鼠4次。所有老鼠注射300μ1或200μ1乳剂。根据日程表，可皮下(s. C.)、腹腔(i. P.)或静脉(i. V.)注射。最后，断颈处死小鼠，取出脾脏，转移至一个74μ m细胞滤网中(Corning#136350-3479)。细胞通过滤网被离析，在用冰冷的含10 %胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基重悬，在300g下离心5分钟。用含I %胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基重悬细胞团，通过50 μ m注射滤器(BD#340603)过滤，再离心收集。用含10% DMSO的 胎牛血清(FCS)重悬细胞后冻存，冻存细胞贮存于_80°C下直至FACS分选。小鼠浆细胞FACS分选将冻存的脾细胞小瓶在37°C下解冻，然后在仍有冰存在的情况下转移至15ml管中。向管中逐滴加入IOml冰冷的RPMI，10% FBS，并摇动试管。用IOml FACS PBS洗涤一次，将细胞过50μπι Filcon过滤前加入5ml FCS PBS。然后沉淀细胞并用Iml PBS+2%FBS(终体积)重悬，然后用稀释至终浓度为5μ g/ml抗⑶43-FITC和抗⑶138-PE抗体染色。黑暗条件下在4°C孵育20分钟。然后，用2mlFACS缓冲液洗涤细胞2次。最多加入15mlFACSPBS。按I : 100的比例加入碘化丙啶(PI)，I份PI至100份FACS PBS缓冲液，然后将细胞分至含有PCR反应缓冲液的96孔PCR板(见下文)，然后在400g离心2分钟，然后将细胞板冻存在_80°C下。浆细胞分选门为⑶43-阳性/tD-138阳性。同源Vh和'对连锁对分选为浆细胞的细胞进行Vh和\编码序列进行连锁，利于Vh和\编码序列同源配对。该程序使用二步法PCR，即一步法多重重叠延伸RT-PCR，然后再进行巢式PCR。本示例中所用的引物混合物仅扩增K轻链。不过，可向多引物混合物和巢式PCR引物混合物中添加扩增λ轻链的引物。如果添加λ引物，可修改分选程序，这样λ阳性细胞不会被排除。同源Vh和'序列连锁原则详见WO 2005/042774和Meijer et al. (2006) J MolBiol. 358(3) :764-72 中所述。解冻96孔PCR板，分选细胞用于多重重叠延伸RT-PCR的模板。在单细胞分选前向含有反应缓冲液(OneStep RT-PCR Buffer ；Qiagen)、RT-PCR引物(参见表5)和RNase抑制剂(RNasin, Promega)的每一孔中添加分选缓冲液。用OneStep RT-PCR5EnzymeMix (25; dilution ；Qiagen)和dNTP混合物(每孔200 μ Μ)补足至20 μ I反应体积下的指定终浓度。在55°C下孵育30分钟，使每孔进行RNA的逆转录(RT)。在RT后，将PCR板进行以下PCR循环94°C下10分钟，35 ^ (94°C下40秒，60°C下40秒，72°C下5分钟)，72°C下10分钟。在H20BIT热循环仪中进行24块96孔板(ABgene)的PCR反应以获得高通量。完成循环后将PCR板贮存于-20°C下。巢式PCR中，制备96孔PCR板，每孔含有以下混合物(20 μ I反应)，以获得指定的终浓度I丨FastStart缓冲液(Roche)、dNTP混合物(每个200 μ Μ)、巢式引物混合物(参见表 6)、Phusion DNA 聚合酶(O. 08U ；Finnzymes)和 FastStart 高保真酶混合物(O. 8U ；Roche)。作为巢式PCR的模板，将I μ I转移至多重重叠延伸RT-PCR反应。巢式PCR板进行以下热循环35, (95°C下30秒，60°C下30秒，72°C下90秒)，72°C下10分钟。然后随机选择反应物用I %琼脂糖电泳分析以验证存在约890个碱基对(bp)的重叠延伸片段。将PCR板贮存于-20°C下，直至对PCR片段进行进一步处理。收集巢式PCR获得的连锁Vh和\编码对，不混合不同供体来源的编码对，然后制备I %琼脂糖凝胶电泳纯化。按WO 2008/104183所述，重叠延伸人K恒定轻链编码序列至连锁Vh和\编码对PCR产物的\编码序列。从含有带有K轻链的人类抗体的编码序列的质粒扩增人κ恒定轻链,反应体系包含Phusion酶(2U ;Finnzymes)、Ix Phusion缓冲液、dNTP混合物(每个200 μ Μ)、hKCforw-v2引物和Kappa3’引物(表5)和质粒模板 1^138(10叩/^1)，总体积5(^1。然后进行以下热循环:25' (95°C下30秒，55°C下30秒，72°C下45秒)，72°C下10分钟。然后制备I %琼脂糖凝胶电泳纯化获得的PCR片段。通过以下重叠延伸PCR拼接，将每份纯化的PCR片段拼接至人κ恒定轻链编码 区扩增和纯化的PCR片段(SEQ ID NO 41) :50 μ I反应体系包含人κ恒定轻链编码区片段(I. 4ng/ μ I)，纯化的 PCR 片段(I. 4ng/ μ I)，Phusion DNA 聚合酶(O. 5U ；Finnzymes)，FastStart 高保真酶混合物(O. 2U ；Roche)、IxFastStart 缓冲液(Roche)、dNTP 混合物(每个200 μ M)、mhKCrev引物和mJH引物(表7)。然后进行以下热循环95°C下2分钟，25' (95 V下30秒，55°C下30秒，72°C下I分钟)，72°C下10分钟。然后制备I %琼脂糖凝胶电泳纯化获得的PCR片段(约4518bp)。将同源Vh和\编码对插入筛选载体中为了确定与HER2特异结合的抗体，获得的Vh和\编码序列表达为全长抗体。这涉及将Vh和\编码对插入表达载体和转染宿主细胞。采用二步法克隆步骤生成含有连锁的Vh和\编码对表达载体。统计学上，如果表达载体包含10倍于Vh和\同源对PCR产物数量，用于生成筛选库，所有独特基因对存在99%可能性。因此，如果获得400重叠延伸V基因片段，可生成至少4000个克隆库以进行筛选所有独特基因对存在99%可能性。简单来说，连锁的V1^P'编码对库经纯化的PCR产物，拼接至人κ恒定轻链编码区，用XhoI和NotI DNA内切酶在引入PCR产物末端的识别位点进行剪切。按标准连接程序，将剪切和纯化的片段连接至Xhol/Notl酶切的哺乳动物IgG表达载体00-VP-002 (见W02008/104183所述)。将连接混合物电转入大肠杆菌，再添加至含有合适抗生素的2' YT板中，孵育过夜。采用标准DNA纯化法(Qiagen)将板中复苏的细胞纯化扩增的载体库。用AscI和NheI酶切质粒，用于插入启动子前导片段。这些酶的限制性内切酶位点位于Vh和Vl编码基因对之间。在纯化质粒后，按标准连接程序将AscI-NheI酶切的双向哺乳动物启动子前导片段插入AscI和NheI限制性内切酶位点。连接的质粒在大肠杆菌中扩增，然后采用标准方法纯化质粒。按传统程序将生成的筛选质粒库转化大肠杆菌。获得的克隆在384孔板中贮存。筛选结合HER2过表达细胞首先，采用共聚焦显微镜筛选抗体库中与HER2过表达乳腺癌细胞系(SKBR-3)结合的抗体。将5000个SKBR-3细胞接种至384孔细胞培养板(Perkin Elmer, cat. #6007439)的每孔中，细胞过夜贴壁。将10 μ I抗体上清液转移至每孔中，然后将培养板孵育2小时，之后弃每孔中的培养基，再向每孔加入30 μ I新培养基，包含2yg/mlAlexa-488标记的羊抗人 IgG (H+L, Invitrogen cat. #A11013), 2 μ g/ml CellMask Blue (Invitrogencat. #H34558)和 I μ M Hoechst33342 (Invitrogen cat. #H3570)，然后再孵育 30 分钟。再次弃培养基，洗涤细胞，用2%福尔马林溶液(Aldrich cat. #533998)固定。然后使用OPERA高通量共聚焦显微镜测量荧光水平(Perkin Elmer)。共聚焦筛选数据鉴别出266个阳性靶标，对应于总克隆的3. 46%。序列分析和克隆选择鉴别出的与SKBR-3细胞结合的克隆回溯至原始的384孔板，并转移至新的培养板中。从克隆中提取DNA，然后进行V基因的DNA测序。比对序列，选择所有独特克隆。获得序列的多重比对显示每一克隆的唯一性，进行独特抗体的鉴别。在对266个克隆进行序列 分析后，鉴别出超过70个基因独特的抗体序列簇。通过共同前体克隆的体细胞高频突变获得每一相关序列。总之，选择每簇的1-2个克隆进行序列和特异性验证。所选抗体可变区序列参见附录的序列表。如上所释，序列表中的轻链序列包含相同的人K恒定轻链区，其起始氨基酸为TVAAP，结束氨基酸为C-端NRGEC。序列和特异性验证为了验证抗体编码克隆，制备DNA质粒，并用2ml转染FreeStyle CH0-S细胞(Invitrogen)表达。转染后96小时收集上清。用标准抗IgG ELISA估计表达水平，其特异性通过HER2特异性ELISA和OPERA分析结合细胞的抗体来确定特异性。简单来说，对于ELISA，用 I μ g/ml HER2 蛋白(R&D Systems cat. #1129_ER)包被NuncMaxisorb 板(cat. #464718)，用 PBS 稀释，4°C过夜。在 50 μ I 2% Milk-PBS-T 封闭之前，用 PBS+0. 05% Tween20 (PBS-T)洗涤 I 次板子。用 PBS-T 和 20 μ 12% milk-PBS-T 洗涤I次板子，加入5 μ I FreeStyle CH0-S转染物上清液(见下文)，于室温下孵育I. 5小时，然后用PBS-T洗涤I次板子，每孔20 μ I。加入稀释度为I : 25000的2% milk-PBS-T 二抗(HRP-羊抗人K轻链，Serotec, cat. #STAR 100P)，以检测与孔结合的抗体，并在室温下孵育 I 小时。在加入 25 μ I 底物(Kem-En-Tec Diagnostics, cat. #4518)之前用 PBS-T 洗涤I次板子，孵育5分钟。在孵育后加入25 μ I IM硫酸终止反应。用ELISA酶标仪在450nm下检测特异信号。在HER2ELISA中也发现266个克隆中有178个克隆与SKBR-3细胞结合。表4.用于生成抗HER2克隆起始物质的免疫日程表
权利要求
1.一种抗体组合物,至少由可与HER2不同表位结合的第一、第二和第三抗-HER2重组抗体组成，其中第一和第二抗体与HER2的结合导致HER2受体内化，而第三抗体与HER2的结合导致配体诱导HER3磷酸化的抑制。
2.权利要求I中所述抗体组合物，其中第一和第二抗体可与细胞表面的HER2结合，以这样的方式在细胞表面生成一种偶联的抗体-受体网格；而第三抗体与HER2结合，以这样的方式阻断HER2和HER3之间的异源二聚化。
3.权利要求I或2中所述的抗体组合物，其中 (a)该抗-HER2第一抗体包含 抗体4517的重链CDR3序列(SEQ ID NO:47)和轻链CDR3序列(SEQ ID N0:76)，或者 抗体 4518 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO: 50)和轻链 CDR3 序列(SEQ ID NO: 78)； (b)该抗-HER2第二抗体包含 抗体 4380 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO: 53)和轻链 CDR3 序列(SEQ ID NO:80)、 抗体4385的重链CDR3序列(SEQ ID NO: 65)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO: 88)，或者 抗体4387的重链CDR3序列(SEQ ID NO:71)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO:92);和 (c)该抗-HER2第三抗体包含 抗体 4382 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO:56)和轻链 CDR3 序列(SEQ ID NO:82)、 抗体4383的重链CDR3序列(SEQ ID NO: 59)和轻链CDR3序列(SEQ ID NO: 84)，或者 抗体 4519 的重链 CDR3 序列(SEQ ID NO:74)和轻链 CDR3 序列(SEQ ID NO:93)
4.权利要求I或2中所述的抗体组合物，其中 (a)该抗HER2第一抗体包含 抗体4517重链可变区(SEQ ID NO:2)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ IDNO: 4)的 CDRl、CDR2 和 CDR3，或者 抗体4518重链可变区(SEQ ID NO:6)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ IDNO:8)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ； (b)该抗-HER2第二抗体包含 抗体4380重链可变区(SEQ ID NO: 10)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ IDNO: 12)的 CDR1、CDR2 和 CDR3, 抗体4385重链可变区(SEQ ID NO: 26)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ IDNO: 28)的 CDRl、CDR2 和 CDR3，或者 抗体4387重链可变区(SEQ ID NO: 34)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ IDNO: 36)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及 (c)该抗-HER2第三抗体包含 抗体4382重链可变区(SEQ ID NO: 14)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ IDNO: 16)的 CDR1、CDR2 和 CDR3, 抗体4383重链可变区(SEQ ID NO: 18)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ IDNO: 20)的 CDRl、CDR2 和 CDR3，或者 抗体4519重链可变区(SEQ ID NO: 38)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ IDNO:40)的 CDR1、CDR2 和 CDR3。
5.权利要求I或2中所述抗体组合物，其中该抗-HER2第三抗体包含抗体4382重链可变区(SEQ ID NO: 14)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 以及轻链可变区(SEQ ID NO: 16)的 CDR1、CDR2 和 CDR3。
6.权利要求5中所述的抗体组合物，其中 (a)该抗-HER2第一抗体包含抗体4518重链可变区(SEQID NO:6)的CDR1、CDR2和CDR3 以及轻链可变区(SEQ ID NO:8)的 CDR1、CDR2 和 CDR3， 该抗-HER2第二抗体包含抗体4385重链可变区(SEQ ID NO: 26)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO: 28)的CDR1、CDR2和CDR3 ;或者 (b)该抗-HER2第一抗体包含抗体4517重链可变区(SEQID NO: 2)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO:4)的CDR1、CDR2和CDR3，以及 该抗-HER2第二抗体包含抗体4387重链可变区(SEQ ID NO: 34)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO: 36)的CDR1、CDR2和CDR3。
7.一种抗体组合物，至少由可以与HER2不同表位结合的抗-HER2第一、第二和第三重组抗体组成，其中第一和第二抗体与HER2结合可导致HER2受体内化，而第三抗体与HER2结合导致配体诱导HER2磷酸化的抑制，其中所述每一第一、第二和第三抗-HER2抗体均与权利要求4-6中所述的相应第一、第二和第三抗体的相同表位结合并与之竞争结合。
8.一种抗体组合物，至少包含与HER2不同表位结合的抗-HER2第一和第二重组抗体，其中至少一种所述抗体选自以下 (a)一种抗体，包含抗体4382的重链CDR3序列(SEQ ID NO:56)和轻链CDR3序列(SEQID NO:82)； (b)一种抗体，包含抗体4383的重链CDR3序列(SEQ ID NO:59)和轻链CDR3序列(SEQID NO:84)； (c)一种抗体，包含抗体4384的重链CDR3序列(SEQ ID NO:62)和轻链CDR3序列(SEQID NO:86)； (d)一种抗体，包含抗体4385的重链CDR3序列(SEQ ID NO:65)和轻链CDR3序列(SEQID NO:88)； (e)一种抗体，包含抗体4386的重链CDR3序列(SEQ ID NO:68)和轻链CDR3序列(SEQID NO:90)； (f)一种抗体，包含抗体4387的重链CDR3序列(SEQ ID NO:71)和轻链CDR3序列(SEQID NO:92)； (g)一种抗体，包含抗体4517的重链CDR3序列(SEQ ID NO:47)和轻链CDR3序列(SEQID NO:76)； (h)一种抗体，包含抗体4518的重链CDR3序列(SEQ ID NO:50)和轻链CDR3序列(SEQID NO:78)； ⑴一种抗体，包含抗体4519的重链CDR3序列(SEQ ID NO: 74)和轻链CDR3序列(SEQID NO: 93);以及 (j) 一种抗体，包含抗体4380的重链CDR3序列(SEQ ID NO:53)和轻链CDR3序列(SEQID NO:80)。
9.权利要求8中所述的抗体组合物，其中所述抗-HER2第一和第二重组抗体两者均选自抗体(a)-(j) ο
10.权利要求9中所述的抗体组合物，包含一个选自抗体(a)-(j)的抗-HER2第三重组抗体。
11.一种抗体组合物，至少包含与HER2不同表位结合的第一和第二抗-HER2重组抗体，其中每一所述第一和第二抗体与权利要求8中定义的任一抗体(a)-(j)的相同表位结合并与其竞争结合。
12.—种抗体组合物，至少包含与HER2不同表位结合的第一和第二抗HER2重组抗体，其中至少一种所述抗体选自以下 (A)一种抗体，包含抗体4382重链可变区(SEQ ID NO: 14)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO: 16)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ; (B)一种抗体，包含抗体4383重链可变区(SEQ ID NO: 18)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQIDN0:20)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ； (C)一种抗体，包含抗体4384重链可变区(SEQ ID NO:22)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO: 24)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ; (D)一种抗体，包含抗体4385重链可变区(SEQ ID NO: 26)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID 勵:28)0 1、0)1 2和0)1 3; (E)一种抗体，包含抗体4386重链可变区(SEQ ID NO: 30)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO: 32)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ; (F)一种抗体，包含抗体4387重链可变区(SEQ ID NO: 34)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO: 36)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ; (G)一种抗体，包含抗体4517重链可变区(SEQ ID NO: 2)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID 勵:4)0 1、0)1 2和0)1 3; (H)一种抗体，包含抗体4518重链可变区(SEQ ID NO:6)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO:8)的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ; (I)一种抗体，包含抗体4519重链可变区(SEQ ID NO: 38)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO: 40)的CDR1、CDR2和CDR3 ;以及 (J) 一种抗体，包含抗体4380重链可变区(SEQIDNO: 10)的CDR1、CDR2和CDR3以及轻链可变区(SEQ ID NO: 12)的 CDR1、CDR2 和 CDR3。
13.权利要求12中所述的抗体组合物，其中所述第一和第二抗-HER2重组抗体两者均选自抗体⑷-(J)。
14.权利要求13中所述的抗体组合物，包含一个选自抗体(A)- (J)的第三抗-HER2重组抗体。
15.一种抗体组合物，至少包含与HER2不同表位结合的第一和第二抗HER2重组抗体，其中每一所述第一和第二抗体与权利要求12中定义的任一抗体(A)-(J)的相同表位结合并与之竞争结合。
16.权利要求8-15所述任一重组抗体组合物，由2、3、4、5或6种抗-HER2抗体组成。
17.权利要求16中所述的重组抗体组合物，由2种抗-HER2抗体组成。
18.权利要求17中所述的重组抗-HER2抗体，包含第一和第二重组抗体，其中该第一和第二抗体包含抗体重链⑶R3和轻链⑶R3序列 4380 和 4382， 4380 和 4384， 4380 和 4518， 4382 和 4385， 4382 和 4518， 4383 和 4518， 4384 和 4385，4384 和 4517，或者 4385 和 4518.
19.权利要求18中所述的抗-HER2重组抗体组合物，其中该第一和第二抗体包含抗体重链CDR1、CDR2和CDR3和轻链CDR1、CDR2和CDR3序列 4380 和 4382， 4380 和 4384， 4380 和 4518， 4382 和 4385， 4382 和 4518， 4383 和 4518， 4384 和 4385，4384 和 4517，或者 4385 和 4518.
20.权利要求16中所述的重组抗体组合物，由3种抗-HER2抗体组成。
21.权利要求20中所述的抗-HER2重组抗体组合物，包含第--、第二和第三重组抗体，其中该第一、第二和第三抗体包含抗体重链⑶R3和轻链⑶R3序列 4380，4382 和 4385， 4380，4382 和 4517， 4380，4382 和 4518， 4380，4383 和 4384， 4380,4384 和 4517， 4380,4384 和 4518， 4380,4384 和 4519，4382，4385 和 4518，或者 4382，4387 和 4517。
22.权利要求21中所述的抗-HER2重组抗体组合物，包含第一、第二和第三重组抗体，其中该第一、第二和第三抗体包含抗体重链⑶R1、⑶R2和⑶R3和轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列 4380，4382 和 4385， 4380，4382 和 4517， 4380，4382 和 4518， 4380，4383 和 4384， 4380,4384 和 4517， 4380, 4384 和 4518， 4380,4384 和 4519，4382，4385 和 4518，或者 4382，4387 和 4517。
23.权利要求16中所述的重组抗体组合物由4种抗-HER2抗体组成。
24.权利要求23中所述的抗-HER2重组抗体组合物，包含重组第一、第二、第三和第四抗体，其中该第一、第二、第三和第四抗体包含抗体重链⑶R3和轻链⑶R3序列4380，4382，4385 和 4518，或者 4380，4384，4385 和 4518。
25.权利要求24中所述的抗HER2重组抗体组合物，包含第一、第二、第三和第四重组抗体，其中第一、第二、第三和第四抗体含抗体重链⑶R1XDR2和⑶R3和轻链⑶R1XDR2和CDR3序列4380，4382，4385 和 4518，或者 4380，4384，4385 和 4518。
26.权利要求1-25中所述任一重组抗体组合物，其中在所述组合物中至少有一种抗-HER2抗体为一种免疫偶联物，其由一种与一种抗癌药物偶联的抗-HER2重组抗体组成。
27.权利要求26中所述的重组抗体组合物，其中抗癌药物选自细胞毒药物、细胞因子、毒素和放射性核素。
28.一种双特异性结合分子，其可特异性结合权利要求1-25中任一权利要求中定义的两种抗体。
29.权利要求28中所述的双特异性结合分子，由所述两种抗体的重链和轻链CDR1、⑶R2和⑶R3序列组成。
30.一种核酸分子,包含一个可编码权利要求1-25所定义的任一种抗体的核酸序列。
31.一种表达载体，包含根据权利要求30所述的核酸分子。
32.—种宿主细胞，包含根据权利要求30所述的核酸分子或根据权利要求31所述的表达载体，其中所述宿主细胞能够表达由所述核酸分子编码的一种抗-HER2抗体。
33.一种生成抗-HER2抗体的方法，包括根据权利要求32所述提供一种宿主细胞，在适宜表达该抗体的条件下培养该宿主细胞，以及分离所生成的抗体。
34.一种生成抗-HER2重组抗体组合物的方法，该抗体组合物至少包含第一和第二抗-HER2重组抗体。此方法包含提供至少一种第一宿主细胞和第二宿主细胞，其中第一和第二宿主细胞均能表达权利要求1-25所定义的任一抗-HER2重组抗体；在适宜表达该第一和第二抗体的条件下培养该第一和第二宿主细胞，并分离所生成的至少第一和第二抗体。
35.权利要求34中所述方法，其中至少第一和第二宿主细胞是在分开的生物反应器中培养。
36.权利要求34中所述方法，其中至少第一和第二宿主细胞在一生物反应器中培养。
37.一种治疗人类或其它哺乳动物癌症的方法，该方法包含给予所述哺乳动物一种根据权利要求1-27所述的任一抗-HER2重组抗体组合物。
38.一种治疗患有以HER2过表达为特征的疾病患者的方法，该方法包含给予所述患者一种根据权利要求1-27所述的任一抗-HER2重组抗体组合物。
39.一种减少过表达HER2细胞中HER2与其它ErbB家族受体异源二聚体形成的方法，该方法包含令所述细胞接触一种根据权利要求1-27所述任一的抗-HER2重组抗体组合物。
40.一种诱导过表达HER2细胞表面HER2内化的方法，该方法包含令所述细胞接触一种根据权利要求1-27所述的任一抗-HER2重组抗体组合物。
41.一种抑制对抗-HER2抗体治疗产生耐药或部分耐药的肿瘤细胞增殖的方法，该方法包含令所述细胞接触一种根据权利要求1-7所述的任一抗-HER2重组抗体组合物。
42.权利要求41中所述方法，其中该肿瘤细胞既往已接受曲妥珠单抗治疗。
全文摘要
本发明涉及新型HER2(ErbB2)靶向治疗性抗体以及抗-HER2重组多克隆抗体组合物，以及将该抗体和抗体组合物用于治疗癌症的用途。所述抗体组合物包含至少三种与HER2的不同表位结合的重组抗体。其中两种抗体结合细胞表面的HER2，导致它们在细胞表面产生交联的抗体-受体网格，并因此导致HER2受体内化。组合物中的第三种抗体结合HER2，它因此阻断HER2与HER3之间的异二聚化。
文档编号C07K16/30GK102884084SQ201180022307
公开日2013年1月16日 申请日期2011年3月3日 优先权日2010年3月4日
发明者M·W·佩德森, A·詹森, P-J·梅杰 申请人:西福根有限公司