刀额新对虾中磷脂的亲水色谱‑串联质谱检测方法与流程

文档序号:11824206阅读:来源:国知局

技术特征:

1.刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法,其特征在于包括以下步骤:

1)、样品前处理:

将刀额新对虾肉研磨成虾糜,按照1g/15~20ml的料液比,在虾糜中加入有机溶剂Ⅰ后震荡混匀;然后进行超声冰浴提取,提取完毕后加入纯水并震荡混匀,得混合物,每1g虾糜配用10~15mL的超纯水;有机溶剂Ⅰ为甲醇和氯仿的混合液,甲醇与氯仿的体积比为0.5~2:1;

混合物用冷冻离心机离心,从离心所得物中移取下相溶液;所述下相溶液低温干燥后,用有机溶剂Ⅱ复溶,得脂质粗提物;所述有机溶剂Ⅱ是体积浓度≥30%的甲醇水溶液、或甲醇,

2)、液相分离:

将脂质粗提物进行液相分离;色谱柱为YMC Triart二醇基HILIC柱;色谱条件采用梯度洗脱法,梯度系统由流动相A和流动相B组成;其中流动相A为含有53mmol/L甲酸的乙腈溶液,流动相B为含有60mM甲酸铵和53mM甲酸的水溶液;

梯度系统为:0~15min,维持2%流动相A;15~60min,将流动相A从2%提高到40%;60~70min,维持40%流动相A;70~80min,将流动相A从40%降回初始状态的2%;上述%均为体积%;

3)、将步骤2)所得的洗脱液进行质谱检测分析。

2.根据权利要求1所述的刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法,其特征在于:

所述步骤3):

采用QSTAR四级杆/飞行时间质谱仪,配以TurboIonSpray离子源;负离子模式检测;扫描范围为500~1000Da;去簇电压为50V;聚焦电势为200V;离子源电压为4500V;去簇电势2为10V;气源1为50psi;气源2为45psi;气帘气为40psi;温度为400℃;子离子扫描采用的碰撞能为20V;数据采集与分析采用Analyst QS v2.0。

3.根据权利要求1所述的刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法,其特征在于:

所述步骤1)中,以移取下相溶液后的离心所得物替代虾糜,以有机溶剂Ⅰ中的氯仿替代有机溶剂Ⅰ,再重复进行提取1~3次;

合并所有提取步骤所得的下相溶液合并后进行后续的干燥和复溶。

4.根据权利要求1~3任一所述的刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法,其特征在于:

所述步骤1)中超声条件为25kHz。

5.根据权利要求1~3任一所述的刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法,其特征在于:

所述步骤1)中冷冻离心为于4℃以8000rpm离心15分钟。

6.根据权利要求1~3任一所述的刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法,其特征在于:

所述步骤2)中,梯度洗脱时的流速为180~220μL/min。

7.根据权利要求6所述的刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法,其特征在于:

所述步骤2)中进样量为5~10μL。

8.根据权利要求1~3任一所述的刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法,其特征在于:

所述步骤1)中,虾糜与复溶用的有机溶剂Ⅱ的料液比为1g/1~2ml。

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