一种娑罗子提取物磷脂复合物及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种娑罗子提取物磷脂复合物及其制备方法，由七叶皂苷含量为50～99％的娑罗子提取物与磷脂为原料，加入反应溶剂搅拌、加热制备而得。娑罗子提取物与磷脂的质量比为1∶1～1∶6，磷脂可以是大豆磷脂或蛋黄卵磷脂或合成磷脂或其中两种或三种磷脂的混合物。本发明的娑罗子提取物磷脂复合物制备工艺简单，条件易控，生产成本低，产品得率高，适合工业化规模生产。该娑罗子提取物磷脂复合物可以作为药物原料用于制备七叶皂苷口服制剂，以增加七叶皂苷的胃肠道吸收，提高生物利用度，改善疗效。
【专利说明】
一种娑罗子提取物磷脂复合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药制造技术领域，具体涉及一种娑罗子提取物磷脂复合物及其制备 方法。
【背景技术】
[0002] 娑罗子（Aescul i Semen)是我国药典收载的传统中药材，来源为七叶树科 植物七叶树 Aesculus chinensis Bge.、浙江七叶树 Aesculus chinensis. Bge. var. Chekiangensis (Hu et Fang) Fang 或天师栗 Aesculus Wilsonii Rehd.的干燥成熟种子。 七叶树在我国四川、甘肃、湖北、湖南、陕西、江西、江苏、河南、安徽、浙江和云南等十余省份 均有分布，目前市场销售使用的娑罗子绝大多数来源于野生的七叶树资源。
[0003] 娑罗子的有效部位为七叶皂苷，这是从七叶树种子中提取得到的多种三萜皂苷类 成分的混合物，其中主要有效成分为七叶皂苷A、七叶皂苷B、七叶皂苷C、七叶皂苷D，七叶 皂苷A和七叶皂苷B为β构型，七叶皂苷C和七叶皂苷D为α构型，含量以β-七叶皂苷 为主，通常占总皂苷的40~80%，陕西省汉中地区所产娑罗子药材的质量较优（β -七叶 皂苷含量高）。七叶皂苷具有明显的抗炎、抗渗出、恢复毛细血管通透性、提高静脉张力和 改善微循环等药理作用，用于治疗各种原因所致的软组织肿胀、骨折水肿、下肢静脉病、视 网膜水肿、痔疮、精索静脉曲张等疾病疗效显著，在骨科、外科、眼科、神经科和痔科等均有 使用。七叶皂苷制剂的适应症包括：各种手术后肿胀和疼痛，骨折后肿胀，慢性静脉功能不 全、静脉曲张、深静脉血栓形成、血栓性静脉炎等下肢静脉病，各种类型的痔疮，视网膜静脉 阻塞、中心浆液性视网膜脉络膜病变和糖尿病视网膜病变等视网膜疾病，周围面神经麻痹， 精索静脉曲张，以及神经、淋巴或静脉水肿引起的疾病。目前国内临床治疗使用的七叶皂苷 主流药品是注射用七叶皂苷钠，系将从娑罗子提取的七叶皂苷制成钠盐，静脉给药，疗效确 切。七叶皂苷虽然药效活性高，但溶血性亦高，血管刺激性也较大，静脉注射治疗时不良反 应发生率可高达30%以上，相关副反应事件屡见报道。患者使用注射用七叶皂苷钠后可出 现程度不同的皮肤红肿、静脉变硬、弹性消失、局部疼痛，常见不良反应有：静脉炎、静脉血 管萎缩、手指青紫和皮下坏死、皮疹、全身性过敏反应、过敏性水疱型组织坏死、横纹肌溶解 等。近年来，临床和药品管理部门对注射用七叶皂苷钠的安全性给予了密切关注，影响了该 药的治疗应用。而七叶皂苷口服吸收差，生物利用度很低，不仅影响七叶皂苷口服制剂的疗 效，而且增加了胃肠道局部副反应，并造成自然资源的浪费。
[0004] 磷脂复合物是一种新型载药系统。药物活性成分与磷脂形成复合物可改变母体药 物的理化性质，提高脂溶性，改善药物穿透生物膜的能力。磷脂是细胞膜的基本组成物质， 与细胞膜的亲和力强，当药物与卵磷脂形成磷脂复合物后，磷脂作为药物载体能促进活性 成分更好地从亲水环境转移透过亲脂环境的肠上皮细胞膜进入细胞后到达血液。磷脂还能 与具有刺激性和不良反应的相关基团作用，或将这些基团包裹，降低药物刺激性，减少毒副 作用。特别是一些天然活性物质形成磷脂复合物后，可有效地提高活性成分在体内的吸收， 显著地改善其生物利用度，并延长药物作用时间，降低药物不良反应。为了克服七叶皂苷口 服生物利用度低的缺点，本发明提供了一种以七叶皂苷为活性成分的娑罗子提取物磷脂 复合物及其制备方法，这种娑罗子提取物磷脂复合物可以作为药物原料制成七叶皂苷口服 制剂。国内外尚未见有关娑罗子提取物或七叶皂苷制成磷脂复合物以及应用的相关报道。
【发明内容】
[0005] 为了克服七叶皂苷脂溶性差而导致其口服生物利用度低的缺点，本发明提供了一 种以七叶皂苷为活性成分的娑罗子提取物磷脂复合物，还提供了娑罗子提取物磷脂复合物 的制备方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明提供的娑罗子提取物磷脂复合物及其制备方法，其特 征在于：它是由下述比例的娑罗子提取物与磷脂为原料，加入反应溶剂中搅拌、加热反应制 备而得：娑罗子提取物与磷脂的重量比为I : 1~1 : 6。娑罗子提取物与磷脂的重量比 优选为I : I. 1~1 : 3。
[0007] 所述的磷脂选自大豆磷脂或蛋黄卵磷脂或合成磷脂或其中两种或三种磷脂的混 合物。磷脂优选为大豆磷脂。
[0008] 所述的娑罗子提取物，其特征是娑罗子提取物中含有七叶皂苷的重量百分含量为 50~95%，符合我国《药品注册管理办法》对于中药有效部位制剂的药材提取物中有效部 位含量必须占到提取物50%以上的相关规定。娑罗子提取物中含有七叶皂苷的重量百分比 优选为70~95%。
[0009] 所述的有机溶剂选自：四氢呋喃，二氯甲烷，三氯甲烷，正己烷，正丁醇，乙醇，无水 乙醇，甲醇，或含有上述溶剂的不同比例混合溶剂。
[0010] 本发明提供的娑罗子提取物磷脂复合物制备方法，其特征在于包括以下步骤：
[0011] (1)将娑罗子提取物与磷脂分别加入少量反应溶剂中制成混悬液A和混悬液B ;
[0012] (2)将混悬液A和混悬液B加入全量反应溶剂中搅拌、加热反应；
[0013] (3)温度控制在35-80°C，搅拌至澄明；
[0014] (4)减压回收溶剂，真空干燥，即得娑罗子提取物磷脂复合物。
[0015] 上述全量反应溶剂的用量为娑罗子提取物在反应溶剂中的浓度为0.2~ 3g/100ml〇
[0016] 本发明的原理和应用前景是：七叶皂苷的脂溶性低，导致胃肠道吸收很差。研究 数据显示，当七叶皂苷钠片口服剂量（60mg)为七叶皂苷钠静脉注射剂量（20mg) 3倍时，口 服给药后七叶皂苷A和七叶皂苷B组分的AUC。t(药-时曲线下面积）不足静脉滴注给药 的1 % (吴丹：七叶皂苷的人体内定量分析方法及药代动力学研究，吉林大学硕士学论文， 2007. 06)，表明七叶皂苷的口服生物利用度非常低。七叶皂苷结构中大量的氢键易与磷脂 基团反应形成磷脂复合物，增加药物脂溶性，促进其通过肠上皮细胞膜进入体内循环。本发 明的娑罗子提取物磷脂复合物的制备工艺简单，条件易控，生产成本低，产品得率高，生产 所用的有机溶剂可以回收循环使用，适合工业化规模生产。本发明提供的娑罗子提取物磷 脂复合物可作为药物原料制成七叶皂苷口服制剂，改善七叶皂苷的胃肠道吸收，提高生物 利用度，同时可降低七叶皂苷的口服剂量，减少药物刺激性，降低消化道副反应。
【附图说明】
[0017] 附图1是实施例四的HPLC分析对比图谱，其中a为娑罗子提取物图谱，b为磷脂 图谱，c为娑罗子提取物磷脂复合物图谱，d为娑罗子提取物和磷脂混合物图谱。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体实施例，对本发明所述的技术方案做进一步说明。
[0019] 实施例一：
[0020] 称取大豆磷脂16. Og加入无水乙醇60ml，搅拌成混悬状；称取娑罗子提取物（七 叶皂苷含量79. 3% )8. 0g，加入无水乙醇30ml，搅拌使混悬；将上述两混悬液加入360ml无 水乙醇反应溶剂中，搅拌，水浴温度保持50°C，搅拌2小时后溶液澄明，过滤，滤液减压回收 溶剂，真空干燥48小时，得到淡棕色粉末状娑罗子提取物磷脂复合物22. 9g，收率95. 42%。
[0021] 实施例二：
[0022] 称取大豆磷脂12. Og加入四氢呋喃50ml，搅拌成混悬液；称取娑罗子提取物（七 叶皂苷含量83. 5% ) 7. 0g，加入四氢呋喃30ml，搅拌使混悬；将上述两混悬液加入520ml四 氢呋喃反应溶剂中，搅拌，水浴温度55°C，搅拌100分钟至溶液澄明，过滤，滤液减压回收溶 剂，真空干燥48小时，得到淡棕色粉末状娑罗子提取物磷脂复合物17. 9g，收率94. 2 %。
[0023] 实施例三：
[0024] 称取大豆磷脂75. Og加入正丁醇300ml，搅拌成混悬液；称取娑罗子提取物 50. 0g(七叶皂苷含量83. 5% )，加入正丁醇200ml，搅拌成混悬液；将上述两混悬液加入 2500ml正丁醇反应溶剂中，搅拌，水浴温度60°C，搅拌3小时至溶液澄明，过滤，滤液减压回 收溶剂，真空干燥48小时，得到娑罗子提取物磷脂复合物120. 5g，收率96. 4%。
[0025] 实施例四：
[0026] 分别称取a娑罗子提取物（七叶皂苷含量83. 5% )、b大豆磷脂、c实施例三制备 的娑罗子提取物磷脂复合物和d娑罗子提取物与大豆磷脂混合物四份样品进行HPLC分析。 色谱条件 ：岛津1(：-1(^，（：18柱，51^-1(^叩紫外检测器，以乙腈-甲醇-磷酸（85%磷酸 5.51^水稀释至100〇11^)(35:7:58)为流动相，流速1.〇1111711^11，检测波长22〇11111，分析 图谱见图1。HPLC分析结果显示，样品c娑罗子提取物磷脂复合物的七叶皂苷A和七叶皂 苷B与娑罗子提取物在上述条件下的色谱行为一致，保留时间均为七叶皂苷A21. 78min ;七 叶皂苷B25. 07min。说明娑罗子提取物与大豆磷脂形成的是一种复合物，而不是新化合物。
[0027] 实施例五：
[0028] 药物经口服给药的主要吸收部位在小肠，研究药物肠吸收参数是开发口服药物的 重要环节。采用大鼠小肠在体单向灌流实验，比较了娑罗子提取物和娑罗子提取物磷脂复 合物在十二指肠、空肠、回肠、结肠的吸收情况。
[0029] 供试液a娑罗子提取物水溶液；b娑罗子提取物磷脂复合物溶于水的混悬液；a和 b两者的七叶皂苷浓度相当。
[0030] 实验模型取禁食12h大鼠，乌拉坦（Ig · kg 4麻醉，沿腹中线打开腹腔，暴露待考 察肠段。用37°C生理盐水冲洗肠段内容物，至干净，插入玻璃管并结扎固定。取供试液以 0. 流速栗入肠段，使肠段内充满供试液，后将流速调至0.2mL· min 1同时开始 计时，约0. 5h后，吸收达到稳定状态。进口处用已知重量装有供试液的小瓶进行灌流，每隔 15min在出口处用另一已知重量的小瓶收集一次，称重量，计算灌入和收集的供试液重量。 于出口处收集流出的灌流液直到120min。实验结束时，将所灌流的肠段剪下，测量其长度 和内径。所取样品置于I. 5mL离心管中，以3000r/min速度离心15min后，精密量取灌流液 2g至IOmL容量瓶中用K-R缓冲液稀释至刻度，样品HPLC法测定含量。
[0031] 灌流液重量的矫正采用重量法矫正因肠内水分吸收引起灌流液重量的变化。装 供试液小瓶和装接收液小瓶的空瓶重量分别为Ws。和Wr。，15min灌流结束后装供试液小瓶 和接收液小瓶的重量分别为WsJP Wr i，则入肠液体的重量Win = Wsid-Ws1;出肠液体的重量 Wout = WrfWr。。Win与Wout的差异就是肠道吸收或分泌的水分的重量。
[0032] 小肠吸收部位实验动物分为2组，每组5只大鼠，分别取供试液a和供试液b (七 叶皂苷浓度均为Img · ml 4各50mL，按'实验模型'项下方法进行实验，分别考察各供试液 在十二指肠、空肠、回肠、结肠组各区段吸收情况。按下式计算药物不同肠段的吸收速率常 数Ka和表观渗透系数Papp。
[0033]
[0034]
[0035] 式中Qin和Qout分别为肠道进出口灌流液的质量（mg) ;Cin和Cout分别为肠道 进出口灌流液的浓度（mg/mg) ;1和r分别为被灌流肠段的长度（cm)和横截面半径（cm) ;Q 为灌流速度（〇. 2ml/min) ;V为灌流肠段的容积。结果见表1和表2。 「00361 表1婆要子提取物在太鼠不同肠段的Ka和PaDD (元土 s, η = 5)
[0040] 比较七叶皂苷含量相当的娑罗子提取物和娑罗子提取物磷脂复合物在十二指肠、 空肠、回肠、结肠的吸收速率常数Ka和表观渗透系数Papp，发现二者在整个肠段均有吸收， 各肠段Ka和Papp大小顺序为结肠> 空肠 > 回肠 >十二指肠，且娑罗子提取物磷脂复合物 的Ka和Papp均显著高于娑罗子提取物，说明娑罗子提取物制成磷脂复合物后吸收得到明 显改善，能够提高药物的生物利用度。
【主权项】
1. 一种娑罗子提取物磷脂复合物，其特征在于：它是由下述比例的娑罗子提取物与磷 脂为原料，加入反应溶剂搅拌、加热制备而得：娑罗子提取物与磷脂的质量比为1 : 1~ 1 : 6,所述的娑罗子提取物中含七叶皂苷的重量百分比为50~95%，所述的反应溶剂选 自：四氢呋喃，二氯甲烷，三氯甲烷，正己烷，正丁醇，乙醇，无水乙醇，甲醇，或含有上述溶剂 的不同比例混合溶剂。2. 根据权利要求1所述的娑罗子提取物磷脂复合物，其特征在于：所述的磷脂是大豆 磷脂或蛋黄卵磷脂或合成磷脂或其中两种或三种磷脂的混合物。3. 根据权利要求2所述的娑罗子提取物磷脂复合物，其特征在于：所述的磷脂是大豆 磷脂。4. 根据权利要求1所述的娑罗子提取物磷脂复合物，其特征在于：它是由下述比例的 娑罗子提取物与磷脂为原料，加入反应溶剂搅拌、加热制备而得：娑罗子提取物与大豆磷脂 的质量比为1 : 1. 1~1 : 3。5. 根据权利要求1所述的娑罗子提取物磷脂复合物，其特征在于：所述的娑罗子提取 物中含七叶皂苷的重量百分比为70~95%。6. -种如权利要求1所述的娑罗子提取物磷脂复合物的制备方法，其特征在于，它包 括以下步骤： (1) 将娑罗子提取物与磷脂分别加入少量反应溶剂制成混悬液A和混悬液B ; (2) 将混悬液A和混悬液B加入全量反应溶剂中搅拌、加热反应； (3) 反应温度控制在35~80°C，搅拌至澄明； (4) 减压回收溶剂，真空干燥，即得娑罗子提取物磷脂复合物。7. 根据权利要求6所述的娑罗子提取物磷脂复合物的制备方法，其特征在于：娑罗子 提取物在全量反应溶剂中的浓度为〇. 2~3g/100ml。
【文档编号】A61K47/48GK105982926SQ201510063596
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月3日
【发明人】杨雪梅, 王俊卿
【申请人】南京星银药业集团有限公司, 深圳市星银医药有限公司