一种磷酯酰丝氨酸的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物工程领域，特别涉及一种磷酯酰丝氨酸的制备方法。
【背景技术】
[0002] 磷脂酰丝氨酸的制备方法主要有提取法和酶转化法，其中，提取法主要是从植物 细胞、动物卵磷脂中提取PS，植物中的PS含量较少，所以提取法以动物的卵磷脂中提取 为主，从动物的卵磷脂中提取PS主要是从动物的大脑及内脏中提取，目前，国外大部分以 牛、羊、兔、马、驴等家禽的动物脑为原料来提取PS。近年来，由于疯牛病等动物疾病的原 因，利用动物卵磷脂提取PS的方法的安全性受到人们的质疑。
[0003] 酶转化法主要是以天然的卵磷脂为基质，加入丝氨酸，在磷脂酶的作用下，生成磷 脂酰丝氨酸。现有技术中，磷脂酰丝氨酸的酶促合成多采用"有机相-缓冲液"的液液双相 反应体系，通常使用氯仿、苯、丁酸乙酯、乙酸乙酯或乙醚等有机溶剂能够获得较高的反应 转化率。但由于上述有机溶剂沸点很低，易燃易爆，有毒有害，容易造成环境污染，不适于工 业化生产。
【发明内容】
[0004] 为了解决现有技术中的问题，本发明提出了一种绿色环保的磷酯酰丝氨酸的制备 方法。
[0005] 本发明是通过以下技术方案实现的： 包括以下步骤： (1) 向反应容器内加入纯净水，水浴升温至50_60°C，并保持温度固定不变； (2) 再向容器内中加入以下重量组分的物质:磷脂酰胆碱50份，L-丝氨酸100份，氯化钙 1份，搅拌1-2小时，使其充分乳化； (3) 乳化完全后再向溶液中加入20份酶，待其充分反应7-9小时，得到含有磷酯酰丝氨 酸产物的混合物； (4) 向反应完成的混合物中加入正己烷，萃取磷酯酰丝氨酸，搅拌8-15分钟，待其分层， 分离出正己烷溶液，再向剩余的溶液中再次加入正己烷进行进一步萃取，分离，将两次得到 的正己烷溶液混合;加热正己烷溶液使其挥发，得到粗质的磷酯酰丝氨酸产物； (5) 将得到粗质的磷酯酰丝氨酸产物加入乙醇进一步去除杂质，搅拌5-7个小时后，过 滤，再进行烘干后得到磷酯酰丝氨酸产品。
[0006] 进一步的是，步骤(1)中，所述纯净水重量组分为200份。
[0007] 进一步的是，步骤(4)中两次分别加入正己烷和步骤(5)中加入乙醇的体积比为4: 1 ： 4〇
[0008] 本发明的有益效果在于:本发明反应体系中采用纯净水代替传统的有机溶剂，条 件温和，绿色环保，多次萃取和去除杂质，得到高纯度的磷酯酰丝氨酸，该制备方法具有高 收率、短周期，低能耗的特点，适用于规模化工业生产，有效促进磷脂产业的发展。
【具体实施方式】
[0009] 下面结合具体实施例，对本发明做详细说明。
[0010] 实施例1 按照如下步骤制备： (1) 向1L三颈瓶内加入200ml纯净水，水浴升温至55 °C，并保持温度固定为55 °C ; (2) 再向容器内中加入以下物质：磷脂酰胆碱50g，L-丝氨酸100g，氯化钙lg，搅拌1小 时，使其充分乳化； (3) 乳化完全后再向溶液中加入20g酶，待其充分反应8小时，得到含有磷酯酰丝氨酸产 物的混合物； (4) 向反应完成的混合物中加入200ml正己烷，萃取磷酯酰丝氨酸，搅拌10分钟，待其分 层，分离出正己烷溶液，再向剩下的溶液中再次加入50ml正己烷进行进一步萃取，分离，将 两次得到的正己烷溶液混合;加热正己烷溶液使正己烷挥发，得到粗质的磷酯酰丝氨酸产 物； (5) 将以上粗质的磷酯酰丝氨酸产物加入乙醇进一步去除杂质，搅拌5个小时后，过滤 掉乙醇，将得到的产物进行烘干得到磷酯酰丝氨酸产品33.5g，其磷脂酰丝氨酸含量为 54.2%〇
[0011] 实施例2 按照如下步骤制备： (1) 向1L三颈瓶内加入200ml纯净水，水浴升温至50 °C，并保持温度固定为50 °C ; (2) 再向容器内中加入以下物质：磷脂酰胆碱50g，L-丝氨酸100g，氯化钙lg，搅拌1小 时，使其充分乳化； (3) 乳化完全后再向溶液中加入20g酶，待其充分反应8小时，得到含有磷酯酰丝氨酸产 物的混合物； (4) 向反应完成的混合物中加入200ml正己烷，萃取磷酯酰丝氨酸，搅拌10分钟，待其分 层，分离出正己烷溶液，再向剩下的溶液中再次加入50ml正己烷进行进一步萃取，分离，将 两次得到的正己烷溶液混合;加热正己烷溶液使正己烷挥发，得到粗质的磷酯酰丝氨酸产 物； (5) 将以上得到的粗质的磷酯酰丝氨酸产物加入乙醇进一步去除杂质，搅拌5个小时 后，过滤掉乙醇，将得到的产物进行烘干得到磷酯酰丝氨酸产品32.7g，其磷脂酰丝氨酸含 量为52.6%。
[0012] 实施例3 按照如下步骤制备： (1) 向1L三颈瓶内加入200ml纯净水，水浴升温至60 °C，并保持温度固定为60 °C ; (2) 再向容器内中加入以下物质：磷脂酰胆碱50g，L-丝氨酸100g，氯化钙lg，搅拌1小 时，使其充分乳化； (3) 乳化完全后再向溶液中加入20g酶，待其充分反应8小时，得到含有磷酯酰丝氨酸产 物的混合物； (4) 向反应完成的混合物中加入200ml正己烷，萃取磷酯酰丝氨酸，搅拌10分钟，待其分 层，分离出正己烷溶液，再向剩下的溶液中再次加入50ml正己烷进行进一步萃取，分离，将 两次得到的正己烷溶液混合;加热正己烷溶液使正己烷挥发，得到粗质的磷酯酰丝氨酸产 物； (5)将以上得到的粗质的磷酯酰丝氨酸产物加入乙醇进一步去除杂质，搅拌5个小时 后，过滤掉乙醇，将得到的产物进行烘干得到磷酯酰丝氨酸产品31.4g，其磷脂酰丝氨酸含 量为49.2%。
[0013] 从3个实施例中可以看出，当温度为55°C时，得到的产品产量和纯度更高。
[0014] 下表为不同温度和不同酶含量的实验结果表
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[0015] 应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换， 而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
【主权项】
1. 一种磷酯酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 向反应容器内加入纯净水，水浴升温至50-60°C，并保持温度固定不变； (2) 再向容器内中加入以下重量组分的物质：磷脂酰胆碱50份，L-丝氨酸100份，氯化钙 1份，搅拌1-2小时，使其充分乳化； (3) 乳化完全后再向溶液中加入20份酶，待其充分反应7-9小时，得到含有磷酯酰丝氨 酸产物的混合物； (4) 向反应完成的混合物中加入正己烷，萃取磷酯酰丝氨酸，搅拌8-15分钟，待其分层， 分离出正己烷溶液，再向剩余的溶液中再次加入正己烷进行进一步萃取，分离，将两次得到 的正己烷溶液混合;加热正己烷溶液使正己烷挥发后，得到粗质的磷酯酰丝氨酸产物； (5) 将得到的粗质的磷酯酰丝氨酸产物加入乙醇进一步去除杂质，搅拌5-7个小时后， 过滤，再进行烘干后得到磷酯酰丝氨酸产品。2. 根据权利要求1所述的一种磷酯酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（1)中，所述 纯净水重量组分为200份。3. 根据权利要求1所述的一种磷酯酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，步骤(4)中两次 加入正己烷和步骤(5)中加入乙醇的体积比为4:1: 4。
【专利摘要】本发明公开了一种磷酯酰丝氨酸的制备方法，包括以下步骤：在温水中加入磷脂胆酰碱，L-丝氨酸，氯化钙及酶，充分反应后，得到含有磷酯酰丝氨酸的混合溶液，然后加入正己烷，将磷酯酰丝氨酸萃取出来，进行加热使正己烷挥发后得到含有磷酯酰丝氨酸的产物，向产物加入乙醇搅拌进一步去除杂质，最后过滤烘干得到本产品；本发明采用用水代替有机溶剂，在温和条件下的绿色合成，该制备方法具有高收率、短周期，低能耗的特点，适用于规模化工业生产，有效促进磷脂产业的发展。
【IPC分类】C12P13/00
【公开号】CN105567755
【申请号】CN201610056120
【发明人】舒智, 张俊勇, 李兵, 徐俊杰
【申请人】成都显诚生物工程有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月28日