一种菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量的测定方法与流程

本发明属于中药领域，尤其是涉及一种菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量的测定方法。

背景技术：

超微粉碎是近年来迅速发展起来的一项高新技术，用于中药领域能把原材料加工成微米甚至纳米级的微粉。超微粉碎中药最大的优势是有效提高了药物的生物利用度。从药物学原理来说，药物的溶出速度与药物的颗粒比表面积呈正相关，而比表面积与颗粒粒径成反比。因此，药物的粒径越小，则其表面积越大，越有助于药物有效成分的溶出。超微粉碎中药及其颗粒达到超细粉末的水平，其比表面积显著增大，药物在胃肠道里的溶解度明显增加，从而增加药物的生物利用度，并加快药物起效时间。此外，由于纳米或微米粒的粘附性及小的粒径，既有利于延长局部用药时滞留性的增加，也有利于延长药物与肠壁接触时间，加大接触面积，从而提高药物口服吸收的生物利用度。传统中药饮片往往采用煎煮的方法，目前虽已进行了中药制剂的改良，但只是提取中药所含的小部分成分，占总成分的10％-30％，药效大受影响。使用超微粉碎技术可充分提取中药成分，具有吸收快及使用方便等优点。

将超微粉碎技术应用于菊三七，制得菊三七超微粉，但是其中有效成分千里光宁生物碱没有规定相应的含量测定方法。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明旨在提出一种菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量的测定方法，解决菊三七超微粉中千里光宁生物碱无相应含量测定方法的问题。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量的测定方法，该方法为高效液相色谱法，利用C₁₈色谱柱实施分离，并利用蒸发光散射检测器实施检测；

其色谱条件为：

填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；

流动相：体积百分比为15-25:75-85的乙腈和0.2％磷酸溶液的混合；

流动相流速：0.8-1.2ml/min；

检测器：蒸发光散射检测器；

进样体积：10μl；

漂移管温度：90℃，气体流速：30psi；

包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取千里光宁生物碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

(2)供试品溶液的制备：取菊三七超微粉末约1g，精密称定置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得；

(3)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

优选的,所述的乙腈和0.2％磷酸溶液的体积百分比为20:80。

优选的,所述的流动相流速为1.0ml/min。

相对于现有技术，本发明所述的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量的测定方法具有以下优势：

本发明所述的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量的测定方法对菊三七超微粉中的有效成分千里光宁生物碱进行含量测定方法进一步探索，并确定一种更为简单易操作的稳定的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量测定方法，为千里光宁生物碱超微粉的质量控制提供可靠的有效成分含量测定方法。

附图说明

构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1为本发明实施例所述的千里光宁生物碱对照品的HPLC检测图谱；

图2为本发明实施例所述的千里光宁生物碱含量与峰面积的线性关系图。

具体实施方式

除非另外说明，本文中所用的术语均具有本领域技术人员常规理解的含义，为了便于理解本发明，将本文中使用的一些术语进行了下述定义。

下面结合实施例来详细说明本发明。

实施例1

(1)色谱条件

色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物，用Agilent C₁₈柱(4.6*250mm，5μm)，流动相是乙睛-0.2％磷酸溶液(20:85)，流速是1.0ml/min，柱温为35℃，蒸发光散射检测器的漂移管温度为90℃，气体流速为30psi，自动进样器进样量为10μl。

(2)标准曲线的绘制

精密称取标准品50.0mg，置于50ml容量瓶中，加色谱甲醇超声溶解后稀释定容至刻度线，作为千里光宁标准溶液储备液，逐级稀释制成千里光宁含量为10、20、50、100、150、200ug/ml的标准溶液，分别注入步骤(1)设置的进入工作状态的HPLC装置的色谱柱10μl，分别计算同一保留时间下的峰面积，以浓度的对数log10(C)为横坐标X，以峰面积的对数log10(A)为纵坐标Y，做出标准曲线方程Y＝1.003X+1.301,R²＝0.9999，结果表明千里光宁在10-200ug/ml范围内，峰面积和浓度呈以上线性关系。

(2)检测菊三七超微粉中千里光宁的含量

取菊三七超微粉约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm有机滤头过滤。注入步骤(1)设置的进入工作状态的HPLC装置的色谱柱10μl，计算同一保留时间下的峰面积，带入步骤(2)所得的标准曲线方程，计算出上机待测的菊三七中千里光宁溶液的浓度，再通过样品的重量计算出千里光宁的含量，千里光宁含量的计算方法如下：

菊三七中千里光宁的含量(mg/g)＝待测菊三七中千里光宁溶液的浓度*稀释因子/菊三七取样重量*100％

根据上式计算出千里光宁的含量为0.21％(稀释因子为样品稀释的倍数)。

(3)精密度试验

对同一菊三七超微粉中千里光宁生物碱样品，连续进样6次，峰面积如表1所示：

表1菊三七超微粉中千里光宁含量测定方法精密度试验结果

由结果可见，菊三七超微粉中千里光宁的相对标准偏差为0.94％，表明本方法的进样精密度良好。

(4)加样回收率试验

供试品溶液的制备：精密称取菊三七超微粉约1g 6份，置圆底烧瓶中，分别加入千里光宁生物碱对照品溶液1ml，精密加入甲醇49ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：取千里光宁生物碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml含50μg的溶液，即得。

表2千里光宁生物碱回收率试验结果

由结果可见，菊三七超微粉中千里光宁的相对标准偏差为0.97％，表明本方法的回收率良好。

实施例2

(1)对江西德兴产地的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量进行检测

检测仪器为Agilent C₁₈，DAD检测器，色谱柱Agilent C₁₈柱(4.6*250mm，5μm)，流动相是乙睛-0.2％磷酸溶液(20:85)，流速是1.0ml/min，柱温为35℃，蒸发光散射检测器的漂移管温度为90℃，气体流速为30psi。自动进样器进样量为10μl。

对照品溶液的制备：取千里光宁生物碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成，每1ml含50.00μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取江西都昌产地的菊三七超微粉，称取三份1.0009g、1.0012g、1.0017g，分别置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

经计算江西德兴产地的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量结果见表3。

表3江西德兴产地的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量测定结果

(2)对湖北神农架产地的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量进行检测检测仪器为Agilent C₁₈，DAD检测器，色谱柱Agilent C₁₈柱(4.6*250mm，5μm)，流动相是乙睛一0.2％磷酸溶液(20:85)，流速是1.0ml/min，柱温为35℃，蒸发光散射检测器的漂移管温度为90℃，气体流速为30psi。自动进样器进样量为10μl。

对照品溶液的制备：取千里光宁生物碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50.00μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取湖北神农架产地的菊三七超微粉，称取三份1.0021g、1.0018g、1.0002g，分别置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加乙腈溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

经计算湖北神农架产地的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量结果见表4。

表4湖北神农架产地的菊三七超微粉中千里光宁生物碱含量测定结果

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。