一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法、制备的传感器及应用与流程

文档序号:12450567阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)制备石墨烯量子点;

(2)将碱性磷酸酶溶液投入到过量的L-抗坏血酸-2-磷酸溶液中,然后将混合物置于碱性缓冲溶液中共同孵育,生成L-抗坏血酸;

(3)往步骤(2)的混合物中加入双蒸水、石墨烯量子点和硝酸银溶液进一步混合孵育;

(4)银纳米粒子逐步沉积在石墨烯量子点表面,石墨烯量子点表面的荧光强度逐步降低,石墨烯量子点表面沉积的银纳米粒子的吸光度逐渐增加;

(5)根据荧光强度或吸光度的变化,进行碱性磷酸酶活性的定量检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,石墨烯量子点的直径在10nm以下,平均直径为1~3nm,其荧光光谱的最大激发波长Ex和最大发射波长Em分别为362nm和461nm。

3.根据权利要求1所述的一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,共同孵育的条件是温度为25~40℃,时间为10~20min。

4.根据权利要求1所述的一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,混合孵育的条件为:温度为20~40℃,时间为20~60min,pH大于6。

5.根据权利要求1所述的一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,所述L-抗坏血酸-2-磷酸、石墨烯量子点和硝酸银溶液的体积比为1~3:1~3:1~6。

6.根据权利要求1所述的一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,纳米银粒子沉积在量子点表面得到纳米复合结构,所述纳米复合结构的直径在100nm以下,平均直径在10~20nm,在415nm波长处有最大紫外吸收。

7.根据权利要求1所述的一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,碱性酶活性的定量检测过程具体如下:配置一系列不同浓度的碱性磷酸酶标准品溶液加入到反应体系中,监测反应体系吸光度或相对荧光强度的变化,根据吸光度的变化ΔA415nm或相对荧光强度(F0-F)/F0随碱性磷酸酶标准品溶液活性的变化绘制标准曲线,得到碱性磷酸酶活性的标准曲线方程,将待测样品加入到反应体系中,监测反应体系吸光度的变化ΔA415nm或相对荧光强度的变化(F0-F)/F0,根据碱性磷酸酶活性的标准曲线方程,推算出碱性磷酸酶的用量,从而实现待测样品中碱性磷酸酶活性的定量检测。

8.根据权利要求1所述的一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,利用紫外可见光谱的比色法检测,碱性磷酸酶活性在0.3~10U/L范围内具有线性关系,检测限为0.1U/L;利用荧光光谱的荧光法检测,碱性磷酸酶活性在0.05~2.5U/L范围内具有线性关系,检测限为0.02U/L。

9.一种使用如权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的方法制备的传感器。

10.如权利要求9所述的一种传感器在碱性磷酸酶抑制剂中的应用。

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