本发明涉及鳗鱼检测领域，具体涉及一种鳗鱼肉中磺胺类药物的检测方法。
背景技术：
：：磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。因其具有抗菌谱广、抗球虫和价廉易得等特点，至今仍在兽医临床和畜牧业中广泛应用。磺胺类药物是国家允许限量使用的一类抗菌药物，可被饲料生产者采用。目前，国家农业行业标准《NY5070无公害食品水产品中鱼药残留限量》中规定，磺胺类药物在水产品组织中的最高残留总量为0.1mg/kg。该药在体内的代谢时间较长，当达到一定浓度时就会对人体的机能产生损害，破坏人的造血系统，造成溶血性贫血，磺胺二甲基嘧啶等还存在潜在的致癌性。因此，为保护消费者的健康安全，建立灵敏、准确、快速的水产品中磺胺类药物的检测方法是十分紧迫的。目前磺胺类药物的检测方法主要包括免疫学方法、微生物学法、高效液相色谱法、气相色谱法、液质联用法、薄层色谱法和毛细管电泳法等。我国农业部颁布的检测方法有“动物源食品中磺胺类药物残留检测方法-高效液相色谱法”、“动物性食品中磺胺二甲嘧啶检测方法-高效液相色谱法”。这些方法优缺点各异：微生物学法检测速度较快，但检测灵敏度和特异性较差；薄层色谱法灵敏度、选择性较好，但重复性不够好；毛细管电泳最大的不足是其进样量小，限制了灵敏度、无法测定μg/kg级或更低浓度的残留量。液质联用仪虽然检测灵敏度和分辨率很高，但一般实验室很难配置这样的仪器，为了解决上述技术问题，特提出一种新的技术方案。技术实现要素：：本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的不足之处，而提供一种鳗鱼肉中磺胺类药物的检测方法。本发明采用的技术方案为：一种鳗鱼肉中磺胺类药物的检测方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：步骤一、筛选：从鳗鱼养殖池中随机抽取3-5条鳗鱼，并将鳗鱼进行宰杀，将宰杀后的鳗鱼进行清洗，清洗结束后放置到托盘上，待检测使用；步骤二、取样：将步骤一种清洗完毕的鳗鱼头利用刀具从待检测鳗鱼肉上切下，切下部分放置到电子称上进行称重，称取重量为3-6g的样品；步骤三、将步骤二中取样放置到离心管中，向浓缩瓶中加入5-20g的无水硫酸钠，再向浓缩瓶中加入10-30ml的乙腈，并放置到均质机中均质2-4min；步骤四、将均质好的样品放置到离心机内部，开启离心机开关进行离心，离心机的转速为4000rpm/5min；步骤五、待离心结束后，取上层液并将上层液放置到分液漏斗内部；步骤六、重复上述步骤三、步骤四及步骤五一次，得到新的溶液；步骤七、向步骤六中所得到的溶液中加入20-40ml的乙腈饱和正已烷溶液，然后通过震荡机进行震荡3-5min，震荡结束后将浓缩瓶静置3-5min，将溶液进行分层，取浓缩瓶中下层溶液；步骤八、将步骤七中获取的溶液放置到蒸馏装置中，对溶液进行减压浓缩至干，其中水温控制在35-40度；步骤九、向步骤八所得到的溶液中加入1-4ml的甲醇水溶液，并将加入甲醇水溶液的混合溶液放置到超声波震荡机中，利用超声波震荡机进行溶解洗脱，待震荡结束后将溶液放置到浓缩瓶中；步骤十、向步骤九中所得到的溶液中加入0.5-2ml的乙腈饱和正已烷溶液，并将其振摇混合，将混合后的溶液放入到4-6ml的离心管中，再次振摇混合；步骤十一、将步骤十所得到的溶液放置到离心机中，利用离心机进行净化离心4-6min，离心机的转速为16000rpm/min，待离心结束后取下层溶液，并将下层溶液通过0.22μm微孔过滤膜进行过滤；步骤十二、将步骤十一中过滤后的溶液放置到HPLC/MS机上进行分析，最后得到检测的数据。本发明的有益效果为：采用液-液萃取的经典样品处理方法结合固相萃取对样品进行预处理，可以有效减少鱼肉组织中杂质的含量和基质干扰；同时采用乙腈饱和正己烷溶液代替二氯甲烷，减少了实验过程中有机溶剂对操作者和环境的污染，使对鳗鱼肉内部磺胺类药物检测更加准确，同时此检测方法检测步骤少还能节约检测时间使工作效率大大的提高。具体实施方式：结合具体实施例对本发明进行进一步说明：实施例一：一种鳗鱼肉中磺胺类药物的检测方法，该方法包括以下步骤：步骤一、筛选：从鳗鱼养殖池中随机抽取3-5条鳗鱼，并将鳗鱼进行宰杀，将宰杀后的鳗鱼进行清洗，清洗结束后放置到托盘上，待检测使用；步骤二、取样：将步骤一种清洗完毕的鳗鱼头利用刀具从待检测鳗鱼肉上切下，切下部分放置到电子称上进行称重，称取重量为3g的样品；步骤三、将步骤二中取样放置到离心管中，向浓缩瓶中加入5g的无水硫酸钠，再向浓缩瓶中加入10ml的乙腈，并放置到均质机中均质2min；步骤四、将均质好的样品放置到离心机内部，开启离心机开关进行离心，离心机的转速为4000rpm/5min；步骤五、待离心结束后，取上层液并将上层液放置到分液漏斗内部；步骤六、重复上述步骤三、步骤四及步骤五一次，得到新的溶液；步骤七、向步骤六中所得到的溶液中加入20ml的乙腈饱和正已烷溶液，然后通过震荡机进行震荡3min，震荡结束后将浓缩瓶静置3min，将溶液进行分层，取浓缩瓶中下层溶液；步骤八、将步骤七中获取的溶液放置到蒸馏装置中，对溶液进行减压浓缩至干，其中水温控制在35度；步骤九、向步骤八所得到的溶液中加入1ml的甲醇水溶液，并将加入甲醇水溶液的混合溶液放置到超声波震荡机中，利用超声波震荡机进行溶解洗脱，待震荡结束后将溶液放置到浓缩瓶中；步骤十、向步骤九中所得到的溶液中加入0.5ml的乙腈饱和正已烷溶液，并将其振摇混合，将混合后的溶液放入到4ml的离心管中，再次振摇混合；步骤十一、将步骤十所得到的溶液放置到离心机中，利用离心机进行净化离心4min，离心机的转速为16000rpm/min，待离心结束后取下层溶液，并将下层溶液通过0.22μm微孔过滤膜进行过滤；步骤十二、将步骤十一中过滤后的溶液放置到HPLC/MS机上进行分析，最后得到检测的数据。实施例二：一种鳗鱼肉中磺胺类药物的检测方法，该方法包括以下步骤：步骤一、筛选：从鳗鱼养殖池中随机抽取3-5条鳗鱼，并将鳗鱼进行宰杀，将宰杀后的鳗鱼进行清洗，清洗结束后放置到托盘上，待检测使用；步骤二、取样：将步骤一种清洗完毕的鳗鱼头利用刀具从待检测鳗鱼肉上切下，切下部分放置到电子称上进行称重，称取重量为5g的样品；步骤三、将步骤二中取样放置到离心管中，向浓缩瓶中加入10g的无水硫酸钠，再向浓缩瓶中加入20ml的乙腈，并放置到均质机中均质3min；步骤四、将均质好的样品放置到离心机内部，开启离心机开关进行离心，离心机的转速为4000rpm/5min；步骤五、待离心结束后，取上层液并将上层液放置到分液漏斗内部；步骤六、重复上述步骤三、步骤四及步骤五一次，得到新的溶液；步骤七、向步骤六中所得到的溶液中加入30ml的乙腈饱和正已烷溶液，然后通过震荡机进行震荡4min，震荡结束后将浓缩瓶静置4min，将溶液进行分层，取浓缩瓶中下层溶液；步骤八、将步骤七中获取的溶液放置到蒸馏装置中，对溶液进行减压浓缩至干，其中水温控制在38度；步骤九、向步骤八所得到的溶液中加入3ml的甲醇水溶液，并将加入甲醇水溶液的混合溶液放置到超声波震荡机中，利用超声波震荡机进行溶解洗脱，待震荡结束后将溶液放置到浓缩瓶中；步骤十、向步骤九中所得到的溶液中加入1ml的乙腈饱和正已烷溶液，并将其振摇混合，将混合后的溶液放入到5ml的离心管中，再次振摇混合；步骤十一、将步骤十所得到的溶液放置到离心机中，利用离心机进行净化离心4-6min，离心机的转速为16000rpm/min，待离心结束后取下层溶液，并将下层溶液通过0.22μm微孔过滤膜进行过滤；步骤十二、将步骤十一中过滤后的溶液放置到HPLC/MS机上进行分析，最后得到检测的数据。实施例三：一种鳗鱼肉中磺胺类药物的检测方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：步骤一、筛选：从鳗鱼养殖池中随机抽取3-5条鳗鱼，并将鳗鱼进行宰杀，将宰杀后的鳗鱼进行清洗，清洗结束后放置到托盘上，待检测使用；步骤二、取样：将步骤一种清洗完毕的鳗鱼头利用刀具从待检测鳗鱼肉上切下，切下部分放置到电子称上进行称重，称取重量为6g的样品；步骤三、将步骤二中取样放置到离心管中，向浓缩瓶中加入20g的无水硫酸钠，再向浓缩瓶中加入30ml的乙腈，并放置到均质机中均质4min；步骤四、将均质好的样品放置到离心机内部，开启离心机开关进行离心，离心机的转速为4000rpm/5min；步骤五、待离心结束后，取上层液并将上层液放置到分液漏斗内部；步骤六、重复上述步骤三、步骤四及步骤五一次，得到新的溶液；步骤七、向步骤六中所得到的溶液中加入40ml的乙腈饱和正已烷溶液，然后通过震荡机进行震荡5min，震荡结束后将浓缩瓶静置5min，将溶液进行分层，取浓缩瓶中下层溶液；步骤八、将步骤七中获取的溶液放置到蒸馏装置中，对溶液进行减压浓缩至干，其中水温控制在40度；步骤九、向步骤八所得到的溶液中加入4ml的甲醇水溶液，并将加入甲醇水溶液的混合溶液放置到超声波震荡机中，利用超声波震荡机进行溶解洗脱，待震荡结束后将溶液放置到浓缩瓶中；步骤十、向步骤九中所得到的溶液中加入2ml的乙腈饱和正已烷溶液，并将其振摇混合，将混合后的溶液放入到6ml的离心管中，再次振摇混合；步骤十一、将步骤十所得到的溶液放置到离心机中，利用离心机进行净化离心6min，离心机的转速为16000rpm/min，待离心结束后取下层溶液，并将下层溶液通过0.22μm微孔过滤膜进行过滤；步骤十二、将步骤十一中过滤后的溶液放置到HPLC/MS机上进行分析，最后得到检测的数据。使用效果实验：本研究连续检测50次，考察该磺胺类药物的检测效果。检测项目评分标准为：非常满意5分，满意4分，一般3分，不满意2分，非常不满意1分。其中普通组为利用常规方法检测鳗鱼肉内部的磺胺类药物；测试项目实施例一实施例二实施例三普通组磺胺嘧啶4.84.94.93.0磺胺间二甲氧嘧啶4.84.95.01.0磺胺喹噁啉4.74.94.83.0磺胺甲噁唑4.74.94.93.0综上所述，本发明实施例二的数据最稳定，故实施例二的数最符合本发明，本发明其不仅可以准确的检测出鳗鱼肉中磺胺类药物，而且检测的效率高，给使用者的工作效率得到提高，同样给使用者带来方便。对于本领域的技术人员来说，可根据以上技术方案以及构思，做出其他各种相应的改变以及变形，而所有的这些改变和变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。当前第1页1 2 3