专利名称：动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种动物性食品中兽药残留量的测定方法，特别是涉及一种测定动物 性食品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶五种 磺胺类药物残留量的液相色谱法。
背景技术：
磺胺类药物在畜牧生产中的应用十分广泛，在降低动物发病率、死亡率方面的作 用非常显著；还可以显著改善水产动物的品质。但如果长期食用含有磺胺类药物残留的动 物性食品，残留的药物能造成中毒；破坏人的造血系统，造成溶血性贫血症、粒细胞缺乏症、 血小板减少等症；甚至可影响中枢神经系统。磺胺类药物的残留不仅给人类的健康带来极 大的危害，而且严重影响我国动物性食品的出口，造成巨大的经济损失，因此研究磺胺类药 物在动物性食品中的残留量是十分必要的。中国发明专利CN 100376893C公布了一种测 定鱼肉中磺胺甲恶唑的液相色谱法，在该方法的样品前处理时，样品先要与盐酸混合静置1 小时、然后用3 1比例的二氯甲烷/丙酮混合液作为提取液提取，加入提取液后，仍需要 在4°C冰箱内静置8-12小时，还需用高速均质器均质并多次离心，步骤繁杂，耗时，不能自 动化。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率 高，回收率和重复性好的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法。本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，包括以下步骤a、样品制备将样品绞碎，冷冻保存；b、样品前处理准确称取样品，与硅藻土混和均勻至样品没有结块，转移至底部放 一层纤维滤纸的萃取池中，将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取，所得到的提取液 中加入正己烷去除脂类杂质，剧烈振荡后静止分层，弃去正己烷层，再加入正己烷重复操作 两次，下层溶液转入浓缩瓶中，在水浴40°C的旋转蒸发仪中减压旋蒸至干，以流动相溶解残 渣，溶液经滤膜过滤供HPLC分析；C、标准溶液的配制分别准确称取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺 胺甲恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶标准品，溶于乙腈中，配制成同时含有上述四种标准品且其浓 度均为200mg/L的混合标准储备液，冷冻保存；临用前，准确量取上述混合标准储备液，用 流动相稀释成系列梯度的标准工作液，低温条件下避光保存，当天使用；d、高效液相色谱测定吸取配制好的不同浓度的标准工作液，注入配有UV检测器 的高效液相色谱仪；e、残留量测定结果的计算以保留时间进行磺胺类药物的定性分析，以峰面积进 行磺胺类药物的定量分析，用外标法计算结果；所述流动相的配制取乙腈、乙酸、水按体积比25 2 73配制流动相。
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其中所述步骤a与步骤 c中的冷冻保存条件是_18°C。本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其中所述步骤b中的样 品前处理，硅藻土与样品的质量比例是(1 3) 1 ；正己烷浓度为每克样品中加入5 IOml正己烷；快速溶剂萃取仪参数设置为萃取溶剂乙腈，温度120°C，压力10. OMPa, 加热时间5min，静态时间5min，冲洗体积萃取池体积的40%，氮气吹扫时间60s，静态 循环次数1次；减压旋蒸时真空度为-0. 096Mpa ；滤膜孔径为0. 45 μ m。本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其中所述步骤c中系列 梯度的标准工作液为0. 05,0. 1,0. 2,0. 5、1和5mg/L。本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其中所述步骤d中 采用的高效液相色谱条件为基质为B型超高纯球形硅胶的C18液相色谱柱，规格为 4. 6_\250_父5“111，硅胶纯度> 99. 999%，柱温30°C ；流动相流速为1. OmL/min，进样量 SlOyL,紫外检测波长为268nm。本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其中所述快速溶剂萃取 仪选用北京吉天仪器有限公司APLE2000快速溶剂萃取仪。本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法利用快速溶剂萃取仪在 高温高压下萃取动物性食品中磺胺类药物，萃取液经净化进高效液相色谱进行分析测定。 快速溶剂萃取法萃取溶剂用量少，操作简单，自动化程度高，萃取效率高，回收率和重复性 好。
图1是五种磺胺类药物的标准色谱图。其中(1)代表磺胺嘧啶，⑵代表磺胺甲基嘧啶，(3)代表磺胺二甲基嘧啶，⑷代 表磺胺甲恶唑，(5)代表磺胺二甲氧基嘧啶。
具体实施例方式本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法包括以下步骤标准溶液的配制分别准确称取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺 甲恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶标准品，溶于乙腈中，配制成同时含有上述四种标准品且其浓度 均为200mg/L的混合标准储备液，_18°C条件下保存(有效期为1个月)；临用前，准确量取 上述混合标准储备液，用流动相稀释成0. 05,0. 1,0. 2,0. 5、1和5mg/L系列梯度的标准工作 液，4°C条件下避光保存，当天使用；流动相的配制取乙腈、乙酸、水按体积比25 2 73 配制流动相。高效液相色谱测定吸取配制好的不同浓度的标准工作液，注入配有UV检测器的 高效液相色谱仪，采用的高效液相色谱条件为基质为B型超高纯球形硅胶的C18液相色谱 柱，规格为4. 6_\250_父5“111，硅胶纯度> 99. 999%，柱温30°C ；流动相流速为LOmL/ min，进样量为10 μ L，紫外检测波长为^8nm。残留量测定实施例1 测定5个鸡肉样品，将样品绞碎，_18°C条件下冷冻保存；
样品前处理准确称取Ig样品，与2g硅藻土混和均勻至样品没有结块，转移至底 部放一层纤维滤纸的萃取池中，将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取，萃取溶剂乙 腈，温度:120°C，压力10. OMPa，加热时间5min，静态时间5min，冲洗体积萃取池体积的 40%，氮气吹扫时间60s，静态循环次数1次，用乙腈快速冲洗样品，氮气吹扫收集全部提 取液。所得到的提取液中加入5ml正己烷去除脂类杂质，剧烈振荡后静止分层，弃去正己烷 层，再加入5ml正己烷重复操作两次，下层溶液转入浓缩瓶中，在水浴40°C的旋转蒸发仪中 减压旋蒸至干，减压旋蒸时真空度为-0. 096Mpa。以流动相溶解残渣，并准确定容lmL，溶液 经0. 45 μ m滤膜过滤供HPLC分析；快速溶剂萃取仪选用北京吉天仪器有限公司APLE2000 快速溶剂萃取仪。残留量测定结果的计算以保留时间进行磺胺类药物的定性分析，以峰面积进行磺胺类药物的定量分析， 用外标法计算结果，结果在三个鸡肉样品中检测到磺胺类药物，结果见表1。表1实际样品中磺胺类兽药的含量
权利要求
1.一种动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，包括以下步骤a、样品制备将样品绞碎，冷冻保存；b、样品前处理准确称取样品，与硅藻土混和均勻至样品没有结块，转移至底部放一 层纤维滤纸的萃取池中，将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取，所得到的提取液中 加入正己烷去除脂类杂质，剧烈振荡后静止分层，弃去正己烷层，再加入正己烷重复操作两 次，下层溶液转入浓缩瓶中，在水浴40°C的旋转蒸发仪中减压旋蒸至干，以流动相溶解残 渣，溶液经滤膜过滤供HPLC分析；C、标准溶液的配制分别准确称取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲 恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶标准品，溶于乙腈中，配制成同时含有上述四种标准品且其浓度均 为200mg/L的混合标准储备液，冷冻保存；临用前，准确量取上述混合标准储备液，用流动 相稀释成系列梯度的标准工作液，低温条件下避光保存，当天使用；d、高效液相色谱测定吸取配制好的不同浓度的标准工作液，注入配有UV检测器的高 效液相色谱仪；e、残留量测定结果的计算以保留时间进行磺胺类药物的定性分析，以峰面积进行磺 胺类药物的定量分析，用外标法计算结果；所述流动相的配制取乙腈、乙酸、水按体积比25 2 73配制流动相。
2.根据权利要求1所述的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其特征在 于所述步骤a与步骤c中的冷冻保存条件是_18°C。
3.根据权利要求1所述的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其特征 在于所述步骤b中的样品前处理，硅藻土与样品的质量比例是(1 幻1;正己烷浓度 为每克样品中加入5 IOml正己烷；快速溶剂萃取仪参数设置为萃取溶剂乙腈，温度 120°C，压力10. OMPa，加热时间5min，静态时间5min，冲洗体积萃取池体积的40 %， 氮气吹扫时间60s，静态循环次数1次；减压旋蒸时真空度为-0. 096Mpa ；滤膜孔径为 0. 45 μ m0
4.根据权利要求1所述的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其特征在 于所述步骤c中系列梯度的标准工作液为0. 05,0. 1,0. 2,0. 5、1和5mg/L。
5.根据权利要求1所述的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法，其特征在 于所述步骤d中采用的高效液相色谱条件为基质为B型超高纯球形硅胶的C18液相色谱 柱，规格为4. 6_\250_父5“111，硅胶纯度> 99. 999%，柱温30°C ；流动相流速为LOmL/ min，进样量为10 μ L，紫外检测波长为^8nm。
6.根据权利要求1至5所述之一的动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法， 其特征在于所述快速溶剂萃取仪选用北京吉天仪器有限公司APLE2000快速溶剂萃取仪。
全文摘要
本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法涉及一种测定动物性食品中药物残留量的液相色谱法。其目的是为了提供一种操作简单，快速，自动化程度高，萃取效率高，回收率和重复性好的测定方法。本发明动物性食品中五种磺胺类药物残留量的测定方法包括以下步骤样品制备；样品前处理称取样品，与硅藻土混和均匀，转移至萃取池中，将萃取池放置于快速溶剂萃取仪上进行萃取，所得到的提取液中加入正己烷去除脂类杂质，剧烈振荡后静止分层，弃去正己烷层，再加入正己烷重复操作两次，下层溶液转入浓缩瓶中，在旋转蒸发仪中减压旋蒸至干，以流动相溶解残渣，溶液经滤膜过滤供HPLC分析；标准溶液的配制；高效液相色谱测定。
文档编号G01N30/06GK102081077SQ20111004540
公开日2011年6月1日 申请日期2011年2月24日 优先权日2011年2月24日
发明者于辉, 赵萍 申请人:北京吉天仪器有限公司