一种磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒。试剂盒包括盒体、盒盖、设置于盒体内的底部固定座和顶部固定座，所述的底部固定座上有各种试剂瓶下凹瓶位，用于放置抗磺胺类药物抗体工作液、酶标二抗工作液、显色液、终止液、浓缩洗涤液、磺胺类药物标准液、基质稀释液和Tween-20备用液，所述的顶部固定座上有各种卡槽或凹槽，用于放置酶标板、微孔条、吸管、比色卡和pH试纸。该实用新型采用间接竞争ELISA方法进行磺胺类药物残留的定性、定量检测，具有操作简单、灵敏度高、成本低廉等优点，适合大批量样品的现场快速检测。
【专利说明】一种磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种医药生物领域的检测试剂盒，具体涉及一种用于测定样品溶液中磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]磺胺类药物(Sulfonamides, SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，多为两性化合物，是一类传统的人工合成抗菌药物。磺胺类药物的抑菌机理是由于磺胺类药物能分解出对氨基苯磺酰胺，其分子的形状和大小与组成叶酸中的对氨基苯甲酸类似，化学性质也相似。由于细菌对二者缺乏选择性，大量的对氨基苯磺酰胺替代了对氨基苯甲酸而被细菌吸收，干扰了细菌叶酸的合成而影响其生长繁殖。磺胺类药物抗菌谱较广，对大多数革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌均有抑制效果，具有一定疗效的SAs就有几十种。因具有广谱、稳定、经济、易用以及联合抗菌增效剂效果可提高数十倍的特点，磺胺类药物常用于治疗家畜子宫炎、呼吸道和消化道感染、猪萎缩性鼻炎、禽霍乱、伤寒、副伤寒和球虫感染。当磺胺类药物以亚治疗浓度作为饲料添加剂使用时，可预防疾病的发生，提高饲料转化效率和促进动物生长。
[0003]磺胺类药物在动物体内代谢时间较长，往往造成动物可食性组织中磺胺类药物残留超标。而长期食用含有磺胺类药物残留的食品，会引起磺胺类药物的逐渐蓄积，危害人体健康，主要表现为变态反应、过敏反应、泌尿系统障碍、致畸作用、致突变作用、致癌作用以及激素样作用。而且磺胺类药物在食品、饲料中的残留极易引发细菌耐药性和环境污染。动物排泄物中的抗菌药物和耐药菌株被释入环境后，将污染水源和土壤，在污泥中细菌可长期保持耐药性。同时，磺胺类药物残留也是目前动物性食品贸易的主要技术问题，严重影响了畜牧业的正常发展。为了保障动物用药的安全性和有效性，许多国家规定了磺胺类药物的最高残留限量(maximum residue limits, MRL),加拿大、欧盟、美国规定动物组织中磺胺类药物总量的最大残留量是100μ g/kg，日本为20μ g/kg，并且有逐步严格控制的发展趋势。2002年12月我国农业部公告第235号文件规定，食用动物产品中磺胺类药物最高残留限量为100 μ g/kg，并将其列为兽药残留监控的重点。
[0004]磺胺类药物残留检测方法主要有微生物学法、理化分析法和免疫法等。微生物学法简便、费用低，但操作费时且敏感性、特异性都较差，在定性定量上均存在困难，不能满足现代残留检测的需要；理化法常作为确证方法用于测定动物组织中的药物残留，如气相色谱(GC)、高效液性色谱(HPLC)、气质联用(GC-MS)和液质联用(HPLC-MS)等，这些方法灵敏准确、特异性强，分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器设备、样品前处理复杂、繁琐费时、检测成本高，不能现场操作，而且需要专业技术人员；与之相比，酶联免疫方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国畜禽养殖户、屠宰场、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。
【发明内容】
[0005]本实用新型的目的是提供了一种小巧轻便的磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒，使用该试剂盒操作简便，灵敏度高，成本低，稳定性好，可进行一次连续多个样品中磺胺类药物残留含量的测定，减少了样品检测所需要的时间。
[0006]本实用新型的技术方案是:
[0007]一种磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒，包括盒体、盒盖、设置于盒体内的底部固定座和顶部固定座，所述的盒体上设有与盒盖上的盒盖卡头相对应的盒体卡槽，用于开关试剂盒。
[0008]所述试剂盒的形状没有特定限制，可为长方体，正方体，菱形体和圆柱体等，优先选择为长方体。
[0009]所述试剂盒的材质没有特定限制，可为纸质材料，塑料材料或竹子材料等，优先选择为硬纸盒。
[0010]所述的底部固定座由底部间隔分为A、B两部分，A部分设有7个试剂瓶下凹瓶位，分别用于放置抗磺胺类药物抗体工作液、酶标二抗工作液、显色液、终止液、浓缩洗涤液和磺胺类药物标准液，B部分设有5个试剂瓶下凹瓶位，分别用于放置基质稀释液和Tween-20备用液。
[0011]所述试剂瓶的颜色可以有白色、黑色、棕色、橙色、蓝色等，所述试剂瓶的材料可以分为玻璃或塑料两种，所述试剂瓶的容积，最小的为2ml,最大的为50ml。
[0012]所述的顶部固定座由手柄分为A、B两部分，A部分设有2个卡槽，分别用于放置96孔酶标板和反应微孔条，B部分设有6个凹槽，分别用于放置不同容量的微吸管、比色卡、pH试纸，B部分凹槽的上方放置有基质标准曲线和说明书。
[0013]所述的酶标板由聚苯乙烯制成，采用96孔试剂板作为固相载体，放于铝钼袋内，并置于酶标板卡槽中，且酶标板由外框支撑架和放置其上的可拆装酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有12个反应孔，其上预包被对氨基苯磺酰胺偶联抗原。
[0014]所述的微吸管有四种不同容量，分别为1.0πι1、100μ1、60μ1和50μ1。
[0015]本实用新型的有益效果是:试剂盒所需仪器较少，操作简单易行，且能快速、准确、批量地用于样品溶液中磺胺类药物残留的定量、定性检测。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1是本实用新型的结构示意图，图2是本实用新型中底部固定座的结构示意图，图3是本实用新型中顶部固定座的结构示意图。
[0017]图面说明:1、盒体,2、盒盖，3、底部固定座，4、顶部固定座；5、盒体卡槽，6、盒盖卡头，7、底座间隔，8、抗磺胺类药物抗体工作液瓶位，9、酶标二抗工作液瓶位，10、显色剂A液瓶位，11、显色剂B液瓶位，12、终止液瓶位，13、浓缩洗涤液瓶位，14、磺胺类药物标准液瓶位，15、禽肉稀释液瓶位，16、禽蛋稀释液瓶位，17、牛奶稀释液瓶位，18、饲料稀释液瓶位，19、Tween-20备用液瓶位，20、手柄，21、酶标板卡槽，22、酶标反应微孔条卡槽，23、1.0ml吸管凹槽，24、100μ1微吸管凹槽，25、60μ1微吸管凹槽，26、50μ1微吸管凹槽，27、比色卡凹槽，28、pH试纸凹槽。
【具体实施方式】
[0018]结合附图详细描述实施例。一种磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2、设置盒体I内的底部固定座3和顶部固定座4，所述的盒体I上有盒体卡槽5，与盒盖2上的盒盖卡头6相对应，用于开关试剂盒。
[0019]所述的底部固定座3由底部间隔7分为A、B两部分，A部分设有7个试剂瓶下凹瓶位，B部分设有5个试剂瓶下凹瓶位。A部分抗磺胺类药物抗体工作液瓶位8放置有白色塑料试剂瓶封装的6ml磺胺类药物抗体工作液，酶标二抗工作液瓶位9放置有红色塑料试剂瓶封装的6ml兔抗鼠酶标二抗(RaMIgG-HRP)，显色剂A液瓶位10放置有黑色塑料试剂瓶封装的4ml底物显色剂A液，显色剂B液瓶位11放置有绿色塑料试剂瓶封装的4ml底物显色剂B液，终止液瓶位12放置有黄色塑料试剂瓶封装的7ml 2M硫酸溶液，浓缩洗涤液瓶位13放置有半透明塑料试剂瓶封装的40ml浓缩洗涤液(10 X )，磺胺类药物标准液瓶位14放置有白色透明塑料试剂瓶封装的2ml磺胺类药物标准液(lmg/ml )。B部分禽肉稀释液瓶位15放置有红色帽的半透明塑料试剂瓶封装的50ml禽肉样品稀释液，禽蛋稀释液瓶位16放置有黄色帽的半透明塑料试剂瓶封装的50ml禽蛋样品稀释液，牛奶稀释液瓶位17放置有白色帽的半透明塑料试剂瓶封装的20ml牛奶样品稀释液，饲料稀释液瓶位18放置有灰色帽的半透明塑料试剂瓶封装的20ml饲料样品稀释液，Tween-20备用液瓶位19放置有黑色帽的黑色塑料试剂瓶封装的3ml Tween-20表面活性剂。
[0020]所述的顶部固定座4由手柄20分为A、B两部分，A部分设有2个卡槽,B部分设有6个凹槽。A部分的酶标板卡槽21放置一块由聚苯乙烯制成的酶标板，采用96孔试剂板作为固相载体，放于铝钼袋内，且酶标板由外框支撑架和放置其上的可拆装酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有12个反应孔，其上预包被对氨基苯磺酰胺偶联抗原，酶标反应微孔条卡槽22放置有24-36条散装酶标反应微孔条，使用时安装在酶标板外框支撑架上，使试剂盒检测容量扩大2-3倍。B部分的1.0ml吸管凹槽23放置有50根1.0ml容量的吸管，用于样品基质的采样，ΙΟΟμΙ微吸管凹槽24放置有50根ΙΟΟμΙ容量的微吸管，用于添加终止液，60μ1微吸管凹槽25放置有50根60μ1容量的微吸管，用于添加显色剂溶液，50μ1微吸管凹槽26放置有50根50μ1容量的微吸管，用于添加抗磺胺类药物抗体工作液和酶标二抗工作液，比色卡凹槽27放置有不同基质条件下的比色卡，显示不同颜色试剂孔对应的吸光度值和磺胺类药物残留含量，用于样品含量的大概推算，PH试纸凹槽28放置不同种类的PH试纸，用来测定不同溶液的pH值。B部分凹槽的表面还放置有基质标准曲线和说明书，将酶标仪测定的吸光度值代入标准曲线，可准确测定样品溶液中磺胺类药物残留含量。
[0021]动物组织中磺胺类药物残留含量测定:
[0022]I)样本前处理:将动物组织或其它样品切碎、研磨后称取3±0.05g样本于50ml离心管中，再加入9ml乙酸乙酯；剧烈震荡5min后，室温下4000r/min离心5min ;移取6ml上清液，于60°C下氮气吹干；加入Iml正已烧,震荡Imin,再加入0.5ml复溶液,振荡1s ;吸取至少500ml下层溶液待检。
[0023]2)试剂盒的操作步骤:①将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温平衡20min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀取出所需数量的微孔条，将不用的微孔条放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2-8°C;③编号:将样品对应微孔按序编号，每个样品做2孔平行，并记录样品孔所在的位置加样品:加样品50 μ I到对应的微孔中，随即加入酶标二抗工作液50 μ I /孔，再加入抗磺胺类药物抗体工作液50 μ I /孔，轻轻振荡混匀，置37°C避光环境中反应30min 洗板:将孔内液体甩干，用洗涤工作液300 μ I/孔，充分洗涤5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干；?显色:加入底物显色剂溶液60 μ I/孔(A液和B液各30 μ I )，轻轻振荡混勻，置37°C避光环境反应15_20min ；?测定:加入终止液100 μ I/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔吸光度值。
[0024]3)测定样品溶液中磺胺类药物残留含量:
[0025]①定性测定:底物显色15_20min后，将样品孔蓝色深浅与比色卡对比，获得不同样品基质中磺胺类药物残留大概含量。
[0026]②定量测定:加入终止液100 μ I/孔后，将酶标仪测定的吸光度值代入标准曲线，可准确测定样品溶液中磺胺类药物残留含量。
【权利要求】
1.一种磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒，包括盒体和连接于盒体上的盒盖，开口一侧的盒盖与盒体上分别设有相对应的盒盖卡头和盒体卡槽，其特征在于:所述的盒体内部由上到下依次设有顶部固定座和底部固定座,其中底部固定座由底部间隔分为A、B两部分，A部分设有7个试剂瓶下凹瓶位，B部分设有5个试剂瓶下凹瓶位，A部分的7个试剂瓶下凹瓶位内分别放置有抗磺胺类药物抗体工作液、酶标二抗工作液、显色剂A液、显色剂B液、终止液、浓缩洗涤液和磺胺类药物标准液，B部分的5个试剂瓶下凹瓶位内分别放置有禽肉稀释液、禽蛋稀释液、牛奶稀释液、词料稀释液和Tween-20备用液，所述的顶部固定座由手柄分为A、B两部分，A部分设有2个卡槽，B部分设有6个凹槽，A部分的2个卡槽内分别放置有96孔酶标板和酶标反应微孔条，B部分的6个凹槽内分别放置有1.0mL吸管、100 μ L微吸管、60 μ L微吸管、50 μ L微吸管、比色卡和pH试纸，在顶部固定座B部分的上方放置有基质标准曲线和说明书。
2.根据权利要求1所述的磺胺类药物多残留免疫学检测试剂盒，其特征在于:所述的酶标板由聚苯乙烯制成，采用96孔试剂板作为固相载体，放于铝钼袋内，并置于酶标板卡槽中，且酶标板由外框支撑架和放置其上的可拆装酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有12个反应孔，其上预包被对氨基苯磺酰胺偶联抗原。
【文档编号】G01N33/543GK203929781SQ201420337346
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年6月23日 优先权日:2014年6月23日
【发明者】原小燕, 王毅红, 杨英军, 怀文辉, 孙志文, 张宝, 郭芳 申请人:河南知微生物工程有限公司