一种含油脂的豆制品中桐油的检测方法与流程

本发明属于食品检测领域，具体涉及一种高油脂豆制品中桐油的定性检测方法。

背景技术：

桐油是桐油树种子榨取所得的油脂，是一种重要的工业用植物油。桐油主要含有桐酸、亚油酸、棕桐酸、亚麻酸、硬脂酸等脂肪酸和脂肪酸甘油酯，其中桐酸为9,11,13-十八碳三烯酸，具有多种异构体，在桐油中以桐酸甘油三酯的形式存在，对肠胃具有强烈的刺激作用，如果误食桐油，会引起恶心、呕吐、腹痛、头痛、呕血、便血等中毒症状，严重者甚至会出现抽搐、呼吸困难、昏迷和呼吸道痉挛等症状。

在平湖一带流行一种叫“泼浆饭粢”的豆制品中，经常检测发现有毒桐油。按照传统工艺，需要将黄豆浆泼到圆锅里，形成一张圆形的饭粢。为了使饭粢不粘到锅上，在泼豆浆时需要先在锅里抹一层油。这层油一般使用菜籽油等食用油，但是，有些商家为了卖相好看，制作方便，降低成本，使用含有毒性的桐油。由于桐油在成品中的含量较低，一般针对食用油掺桐油的检测方法，如硫酸法、亚硫酸法、三氯化锑法和苦味酸法等方法的检出限和灵敏度都不能达到检测要求。因此，需要建立一种灵敏度高、检出限低的分析方法，用于高油脂豆制品中违法添加桐油的定性检测。

技术实现要素：

为解决现有检测技术的缺点和不足之处，本发明的目的在于提供一种桐油的提取、甲酯化和气相色谱仪器分析方法，测定样品中是否含有桐酸甲酯，并以桐酸甲酯作为鉴别样品中桐油的特征指示成分，从而实现豆制品中违法添加桐油的定性检测。

本发明的桐油检测方法，其技术方案包括以下步骤：

(1)称取豆制品样品，加入石油醚和乙醚混合溶剂对油脂进行萃取，得到油脂样品；

(2)皂化油脂样品后，使用三氟化硼甲醇溶液进行甲酯化；

(3)取上层清液，用气相色谱质谱联用仪进行检测，若检测到桐酸甲酯，即判断该样品中含有桐油。

步骤(1)中，所述石油醚与乙醚的体积比为1:1～3:1。

步骤(1)中，所述豆制品样品的质量与溶剂体积之比为1:3～1:5g/ml。

步骤(3)中，气相色谱仪的程序升温过程如下：100℃保持2min，10℃/min升至280℃保持20min。

本发明利用甲酯化和气相色谱质谱联用法建立了豆制品中违法添加的桐油的定性检测方法，与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：

(1)本发明以桐油中的特征成分桐酸和桐酸甘油三酯为指示物，并通过甲酯化技术将沸点高、在气相色谱中难以气化的桐酸和桐酸甘油三酯转化为桐酸甲酯，沸点变低，在gc-ms中峰型良好，灵敏度高。

(2)本发明将样品中的桐油经过提取和甲酯化后，再利用gc-ms进行检测，使用面积归一法，对比nist谱库，对样品各组分进行定性分析，通过鉴定样品成分中是否含有桐酸甲酯为依据，判断高油脂豆制品中是否含有违法使用的桐油。

(3)本发明特征成分桐酸甲酯在gc-ms中灵敏度高，方法检出限低至0.01％。

(4)这种方法的抗干扰性好，适用性广，避免了硫酸法、亚硫酸法、三氯化锑法和苦味酸法等现有方法可能出现的假阳性现象，而且操作简单，实验时间短，适用于豆制品中桐油的定性检测。

附图说明

图1是实施例1中的不含桐油的豆制品1的gc-ms总离子流图(tic)；

图2是实施例2中0.01％桐油加标豆制品2的gc-ms总离子流图(tic)，其中箭头所指的分别是7号和8号峰；

图3是实施例2中7号峰桐酸甲酯质谱图；

图4是实施例2中8号峰桐酸甲酯质谱图；

图5是实施例3中疑似含有桐油豆制品3的gc-ms总离子流图(tic)，其中箭头所指的分别是9号、10号和11号峰；

图6是实施例3中9号峰桐酸甲酯质谱图；

图7是实施例3中10号峰桐酸甲酯质谱图；

图8是实施例3中11号峰桐酸甲酯质谱图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明做进一步详细的描述。

实施例1：

广州市百佳超市油豆腐豆制品1的定性检测，包括以下步骤：

(1)将油豆腐样品剪碎至0.5cm²以下的小块，称取样品1.0g于具塞离心管中，加入体积比1:1的石油醚/乙醚混合溶剂3.0ml，盖上塞子，超声1min，于涡旋器上涡旋30s，使油脂完全溶解，用滤纸过滤，滤液转移至另一具塞离心管中，静置待溶剂挥发，得到油脂样品。

(2)往油脂样品中，加入1ml0.5mol/l的氢氧化钠-甲醇混合溶液，超声1min，在60℃水浴中皂化10min，待溶液澄清后，加入2ml14％三氟化硼-甲醇溶液，在65℃水浴上煮沸2min，冷却，加入1ml乙醚，震荡混合，待上层溶液澄清后，加入2ml饱和氯化钠溶液，取上层清液进行检测。

(3)用进样针吸取上层清液，注入gc-ms中进行检测，仪器型号为日本岛津qp2010，色谱柱db-5ms(30.0m×250μm,0.25μmthickness)，载气he，进样体积为2μl，不分流进样，柱流量1ml/min；前进样口温度为280℃，质谱端温度为280℃；程序升温过程如下：100℃保持2min，10℃/min升至280℃保持20min。离子源ei，温度230℃，电离能70ev，扫描模式为scan模式，扫描范围为50-500m/z。

(4)样品溶液总离子流图如图1所示，使用面积归一法，并对比nist谱库，各组分的定性结果和相对含量如表1所示。样品溶液不含9,11,13-十八碳三烯酸甲酯，即桐酸甲酯，因此样品豆制品1中不含有桐油。

表1豆制品1气相色谱质谱分析结果

实施例2：

在广州市百佳超市油豆腐豆制品1中加入0.01％桐油，制成加标样品豆制品2，验证方法检出限，加标方法与检测方法如下：

准确称取0.01g桐油于10ml容量瓶中，加入乙醚定容，混合均匀，配制成1mg/ml的桐油溶液。称取1.0g油豆腐样品豆制品1于具塞离心管中，加入100μl桐油溶液，则样品中含有0.01％桐油，等乙醚挥发后，按实施1的操作进行提取和分析。

样品溶液总离子流图如图2所示，各组分的定性结果和相对含量如表2所示。峰号7和8为桐酸甲酯，即9,11,13-十八碳三烯酸甲酯的顺反异构体，都属于桐油的特征指示物，其顺反异构体的个数和相对丰度与桐油品种和产地有关，从图2可以看出，样品中含有0.01％桐油的时候，经过本方法处理后，可见非常明显的桐油甲酯峰，且峰型尖锐，响应灵敏，可用于定性，因此，本方法检出限完全可达到0.01％。

表2豆制品2气相色谱质谱分析结果

实施例3：

浙江省嘉兴市海宁市农副产品批发市场某疑似添加桐油的“泼浆饭粢”豆制品3，按照实施例1的方法进行检测，样品溶液总离子流图如图所示，使用面积归一法，并对比nist谱库，各组分的定性结果和相对含量如表3所示。峰号9-11为桐酸甲酯，即9,11,13-十八碳三烯酸甲酯的顺反异构体，都属于桐油的特征指示物，因此样品豆制品3中含有桐油。

表3豆制品3气相色谱质谱分析结果

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。