重酒石酸卡巴拉汀中间体及其有关物质的分离检测方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种用hplc分离测定重酒石酸卡巴拉汀中间体及其有关物质的分析方法。
背景技术：
：重酒石酸卡巴拉汀是一种氨基甲酸类脑选择性乙酰胆碱酯酶抑制剂，通过延缓胆碱神经元对释放乙酰胆碱的降解，而促进胆碱能神经传到。重酒石酸卡巴拉汀可以改善阿尔茨海默病患者胆碱能介导的认知功能障碍，还可减慢淀粉样蛋白β-淡粉样前体蛋白片段的形成，而淀粉样斑块是阿尔茨海默病的主药病理特征之一。重酒石酸卡巴拉汀中间体的化学名为（3-（1-二甲氨基乙基）苯酚，分子式。其化学结构式为：。在合成重酒石酸卡巴拉汀的过程中，需要控制一些关键中间体的纯度，以减少副反应的发生和杂质的生成，从而提高产物收率和纯度。合成该化合物涉及的有关物质有2个，分别为间羟基苯乙酮（有关物质ａ）和3-（1-甲氨基乙基）苯酚（有关物质b），结构式分别为：有关物质ａ有关物质ｂ。对重酒石酸卡巴拉汀中间体的化学纯度进行控制，在终产品重酒石酸卡巴拉汀的合成及其质量控制方面具有重要的现实意义。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种分离测定重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质的高效液相色谱分析方法，从而保证重酒石酸卡巴拉汀中间体的化学纯度，减少副反应的发生和杂质的生成，以实现其终产品重酒石酸卡巴拉汀的质量控制。本方法所述的用高效液相色谱法分离检测3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以缓冲盐溶液-有机相为流动相进行等度洗脱。上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，色谱柱选自alltima、apollo或agela等品牌，优选apollo品牌。上述所说的有机相选自以下化合物中的一种或几种：甲醇、乙腈、异丙醇、四氢呋喃等，优选乙腈或甲醇溶液。上述所说的方法中，缓冲盐溶液选自磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、高氯酸盐，优选磷酸盐。缓冲盐溶液的浓度为0.01～0.1mol/l。上述所说的方法中，缓冲盐溶液中包含浓度为5mmol/l~10mmol/l的离子对试剂，选自十二烷基硫酸钠、辛烷磺酸钠、庚烷磺酸钠，优选十二烷基硫酸钠。本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现：（1）取3-（1-二甲氨基乙基）苯酚适量，用流动相溶解稀释，配制成每1ml含3-（1-二甲氨基乙基）苯酚0.1～1.0mg的样品溶液；（2）设置流动相流速为1.0ml/min，检测波长为210~240nm，柱温：20~30℃；（3）取（1）中的样品溶液10μl注入液相色谱仪，完成3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质的分离与测定。其中：高效液相色谱仪型号无特别要求，本发明采用岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵；spd-m20a检测器；sil-20ac自动进样器；cto-10asvp柱温箱；dgu-20a3脱气机；cbm-20a控制器；色谱柱：c18(apollo，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液（0.01mol/l磷酸二氢钠，加5mmol/l十二烷基硫酸钠）-乙腈（60:40）；流速：1.0ml/min；检测波长：218nm；柱温：室温；进样体积：10μl。本发明采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，磷酸盐缓冲液（含离子对试剂）-乙腈为流动相进行梯度洗脱，能够有效分离3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质，准确测定重酒石酸卡巴拉汀中间体的化学纯度；本发明解决了重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚溶液及其有关物质的分离测定问题，确保了3-（1-二甲氨基乙基）苯酚的化学纯度，从而保证了重酒石酸卡巴拉汀的质量可控（结果见附图）。附图说明：图1为实施例1时的重酒石酸卡巴拉汀中间体及其有关物质hplc图；图2为实施例2时的重酒石酸卡巴拉汀中间体及其有关物质hplc图；图3为实施例3时的溶剂hplc图；图4为实施例3时的重酒石酸卡巴拉汀中间体及其有关物质的hplc图；图5为实施例3时的重酒石酸卡巴拉汀中间体的hplc图。具体实施方式：以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本发明涉及的分离3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质的方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。实施例1仪器与条件：岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵；spd-m20a检测器；sil-20ac自动进样器；cto-10asvp柱温箱；dgu-20a3脱气机；cbm-20a控制器；色谱柱：c18(apollo，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液（0.01mol/l磷酸二氢钠，加0.005mol/l十二烷基硫酸钠）-乙腈（60:40）；流速：1.0ml/min；检测波长：218nm；柱温：室温；进样体积：10μl。实验步骤：取重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质适量，用流动相溶解稀释，配制成每1ml含3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质0.1～1.0mg的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1，图1中保留时间12.014min的色谱峰为重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚色谱峰，保留时间5.277min的色谱峰为间羟基苯乙酮，保留时间11.176min的色谱峰为3-（1-甲氨基乙基）苯酚。由图1可知，在该条件下，重酒石酸卡巴拉汀中间体与其有关物质可实现完全分离。实施例2仪器与条件：岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵；spd-m20a检测器；sil-20ac自动进样器；cto-10asvp柱温箱；dgu-20a3脱气机；cbm-20a控制器；色谱柱：c18(apollo，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液（0.01mol/l磷酸二氢钠，加0.005mol/l十二烷基硫酸钠）-乙腈（55：45）；流速：1.0ml/min；检测波长：218m；柱温：室温；进样体积：10μl。实验步骤：取重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质适量，用流动相溶解稀释，配制成每1ml含3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质0.1～1.0mg的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图2，图2中保留时间7.478min的色谱峰为重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚色谱峰，保留时间4.656min的色谱峰为间羟基苯乙酮，保留时间6.885min的色谱峰为3-（1-甲氨基乙基）苯酚。由图2可知，在该条件下，重酒石酸卡巴拉汀中间体与其有关物质实现完全分离。实施例3仪器与条件：岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵；spd-m20a检测器；sil-20ac自动进样器；cto-10asvp柱温箱；dgu-20a3脱气机；cbm-20a控制器；色谱柱：c18(alltima，250mm×4.6mm，5μm)；流动相：磷酸盐缓冲液（0.01mol/l磷酸二氢钠，加0.005mol/l十二烷基硫酸钠）-乙腈（65:35）；流速：0.8ml/min；检测波长：218m；柱温：室温；进样体积：10μl。实验步骤：取重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质适量，用流动相溶解稀释，配制成每1ml含3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质0.1～1.0mg的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3~5，图3为溶剂的色谱图，图4中保留时间25.484min的色谱峰为重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚色谱峰，保留时间6.230min的色谱峰为间羟基苯乙酮，保留时间23.625min的色谱峰为3-（1-甲氨基乙基）苯酚。图5中保留时间为25.354min的色谱峰为重酒石酸卡巴拉汀中间体3-（1-二甲氨基乙基）苯酚色谱峰。由图3~图5可知，在该条件下，重酒石酸卡巴拉汀中间体与其有关物质可实现完全分离。对上述重酒石酸卡巴拉汀中间体及其有关物质的分析方法进行如下验证：1、系统适用性试验取3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含3-（1-二甲氨基乙基）苯酚约0.1mg/ml及各有关物质约20μg/ml的混合样品溶液。按实施例1的色谱条件进行分离测定，记录色谱图。由图1可知，在此条件下，3-（1-二甲氨基乙基）苯酚及其有关物质的色谱峰峰形良好，分离度符合要求。2、进样重复性取3-（1-二甲氨基乙基）苯酚的样品溶液，按实施例1的色谱条件，重复进样6针，考察样品定量测定时的进样重复性。由结果可见，保留时间和峰面积无明显变化，rsd%值符合要求，进样重复性良好。时间（min）t1t2t3t4t5t6rsd%有关物质a5.3325.3415.3425.3445.3485.3540.14有关物质b11.63711.68711.69311.70111.71411.7280.273-（1-二甲氨基乙基）苯酚12.47512.53112.53812.54712.56212.5770.28；峰面积a1a2a3a4a5a6rsd%有关物质a1591473159233815928351594151159333415942640.07有关物质b4254714249984247334252334255634246150.093-（1-二甲氨基乙基）苯酚2272144227313822727582273188227495722741450.043、溶液稳定性取3-（1-二甲氨基乙基）苯酚样品溶液，在室温条件下，按实施例1的色谱条件，分别于0、4、9、12、14小时进样，考察样品定量测定时溶液的稳定性，由结果可见，该供试品溶液在24小时内稳定。6、定量限在实施例1条件下，取3-（1-二甲氨基乙基）苯酚适量，加流动相溶解并逐级稀释，直至信号与噪音的比值约为10:1。由结果可见，检测限均为纳克级，满足检测需要。样品定量限浓度（ng/μl）3-（1-二甲氨基乙基）苯酚0.177、检测限在实施例1条件下，将上述定量限浓度溶液，逐级稀释，直至信号与噪音的比值约为3:1。由结果可见，检测限为纳克级，满足检测需要。样品检测限浓度（ng/μl）3-（1-二甲氨基乙基）苯酚0.058、耐用性我们进一步考察了流速、柱温的耐用性。结果发现，改变流速、柱温时，各个色谱峰峰面积略有变化，各色谱峰之间均能有效分离，理论塔板数符合要求。本方法对流速、柱温耐用性良好。当前第1页12