本发明涉及农业育种技术领域，特别涉及一种以蛋白质含量为指标来高效率筛选耐盐碱水稻的新方法。
背景技术：
盐碱土是一系列受土体中盐碱成分作用的，是各种盐土和碱土以及其他不同程度盐化和碱化的各种类型土壤的通称，盐碱土又称盐渍土，俗称盐碱地。盐化，是指可溶性盐类在土壤中的积累，又称盐渍化；所谓碱土主要指土壤胶体发生的钠质化过程。盐土和碱土作为盐碱土土纲下属的两个亚纲并列；盐土亚纲中根据盐分组成和积盐方式的重大区域性差别等，划分出了草甸盐土、滨海盐土、酸性硫酸盐土、漠境盐土和寒原盐土5个土类，碱土亚纲暂列碱土土类。当土壤表层含盐量为0.1％-0.3％为轻度盐碱土；0.3％-0.6％为中度盐碱土；0.6％-0.9％为重度盐碱土。
水稻(oryzasatival.)是我国重要的粮食作物之一，关于水稻耐盐性筛选、鉴定及评价的研究工作已有许多相关报道。梁正伟等研究发现，盐碱胁迫使水稻株高降低、杆长缩短、抽穗期延长，且受抑制程度随盐碱度的提高而增大；杨福指出水稻分蘖、叶尖和叶片症状及整个植株死亡程度，都可以作为耐盐碱标准。但上述鉴定标准以人为定性观察为主，不同的观察者往往会判断出不同的耐盐碱程度。因此，以往的这些鉴定筛选方法不能完整准确地反映水稻对盐地相应程度。本方法是以蛋白质含量作为筛选标准，能够客观地反映出水稻耐盐碱程度，结果显示，耐盐碱水稻的蛋白质含量不会随着盐碱度的提高而呈现显著性下降；非耐盐碱水稻会随着盐碱度提高呈现显著性下降。这表明蛋白质含量的变化可以用来筛选耐盐碱水稻，从而为高效率筛选耐盐碱水稻提供科学依据。
我们在对水稻品种-海稻86(耐盐碱水稻)和长粒香(一般品种)进行田间试验，对两个品种分别施以0、0.3％、0.6％、0.9％稀释的海水，来观察产量和测定蛋白质含量的变化。结果表明：与对照组相比，耐盐碱水稻蛋白质含量没有显著变化。此为首次报道，该项实验即可作为筛选耐盐水稻的新思路和新方法。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于，提供了一种更高效的筛选耐盐碱水稻的新方法。本发明高效的筛选耐盐碱水稻的新方法，可以显示不同盐度处理下影响水稻可溶性蛋白含量。如果耐盐碱水稻的蛋白质含量没有显著性差异，这说明细胞活性没有降低，这与产量高的情况相一致，说明该种水稻确实耐盐碱。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种高效筛选耐盐碱水稻的方法，包括以下步骤：
a.将待筛选稻分别种植在多块质地相同的田地里；
b.分别将每块田地分为4个区，分别灌溉0、0.3％、0.6％、0.9％稀释的海水；
c.记录生长情况并且保证灌溉海水的盐度；
d.收割期时随机挑选植株进行蛋白质含量测定。
为解决上述技术问题，本发明还提供了一种水稻产量的测试方法，理论亩产量按照以下方式计算：
理论亩产量＝亩有效穗数*平均穗粒数*千粒重
所述水稻产量的测试方法，优选包括以下步骤：
(1)：田间均匀抽样几个点，在每个点取一平方米的面积，数出每平方米的穗数，算出每平方米的平均穗数a穗；
(2)：随机抽取部分稻穗，数出粒数，算出每穗平均粒数b粒；
(3)：随机干燥部分稻谷，用天平称重，算出平均千粒重c克；
测得亩产＝(a穗*b粒)/1000粒*c克*667平方米/1000。
为解决上述技术问题，本发明另提供了一种水稻中蛋白质含量的测定方法，采用小牛血清白蛋白为标准蛋白。
所述水稻中蛋白质含量的测定方法，具体测定步骤优选如下：
(1)：bradford浓染液的配制；
(2)：标准曲线蛋白质样本的准备；
(3)：将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液与制作标准曲线的缓冲溶液相同；
(4)：用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去；
(5)：显色反应：每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。测定其吸光度。
(6)：根据标准曲线计算待测样本的浓度。
所述步骤(1)bradford浓染液的配制中可以进一步包括：将100mg考马斯亮蓝g-250溶于50ml95％乙醇，加入100ml85％的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，放4℃6～18个月保持稳定。
所述步骤(2)标准曲线蛋白质样本的准备中可以进一步包括：使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品；如果待测样本是未知的，用抗体作为标准蛋白；
所述步骤(3)中可以进一步包括：将待测样本溶于pbs缓冲溶液中。
所述步骤(4)中，可以进一步包括：按1∶5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
所述步骤(5)中，可以进一步包括：显色反应：每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用8～25min；在595nm波长下测定其吸光度。
本发明有益效果包括：本发明高效的筛选耐盐碱水稻的新方法，可以显示不同盐度处理下影响水稻可溶性蛋白含量。如果耐盐碱水稻的蛋白质含量没有显著性差异，这说明细胞活性没有降低，这与产量高的情况相一致，说明该种水稻确实耐盐碱。
附图说明
图1为本发明实施例所述在不同盐度水平下两种水稻蛋白质的含量图。
具体实施方式
下面结合实施例详述本发明。为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚、明确，以下参照附图并举实施例对本发明进一步详细说明，但本发明并不局限于这些实施例。
如无特别说明，本发明的实施例中的原料和催化剂均通过商业途径购买。为解决上述技术问题，本发明提供了一种高效筛选耐盐碱水稻的方法，包括以下步骤：
a.将待筛选稻分别种植在多块质地相同的田地里；
b.分别将每块田地分为4个区，分别灌溉0、0.3％、0.6％、0.9％稀释的海水；
c.记录生长情况并且保证灌溉海水的盐度；
d.收割期时随机挑选植株进行蛋白质含量测定。
为解决上述技术问题，本发明还提供了一种水稻产量的测试方法，理论亩产量按照以下方式计算：
理论亩产量＝亩有效穗数*平均穗粒数*千粒重
所述水稻产量的测试方法，优选包括以下步骤：
(1)：田间均匀抽样几个点，在每个点取一平方米的面积，数出每平方米的穗数，算出每平方米的平均穗数a穗；
(2)：随机抽取部分稻穗，数出粒数，算出每穗平均粒数b粒；
(3)：随机干燥部分稻谷，用天平称重，算出平均千粒重c克；
测得亩产＝(a穗*b粒)/1000粒*c克*667平方米/1000。
为解决上述技术问题，本发明另提供了一种水稻中蛋白质含量的测定方法，采用小牛血清白蛋白为标准蛋白。
所述水稻中蛋白质含量的测定方法，具体测定步骤优选如下：
(1)：bradford浓染液的配制；
(2)：标准曲线蛋白质样本的准备；
(3)：将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液与制作标准曲线的缓冲溶液相同；
(4)：用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去；
(5)：显色反应：每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。测定其吸光度。
(6)：根据标准曲线计算待测样本的浓度。
所述步骤(1)bradford浓染液的配制中可以进一步包括：将100mg考马斯亮蓝g-250溶于50ml95％乙醇，加入100ml85％的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，放4℃6～18个月保持稳定。
所述步骤(2)标准曲线蛋白质样本的准备中可以进一步包括：使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品；如果待测样本是未知的，用抗体作为标准蛋白；
所述步骤(3)中可以进一步包括：将待测样本溶于pbs缓冲溶液中。
所述步骤(4)中，可以进一步包括：按1∶5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
所述步骤(5)中，可以进一步包括：显色反应：每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用8～25min；在595nm波长下测定其吸光度。
在本发明的一实施例中，提供了一种更高效的筛选耐盐碱水稻的新方法。其实验操作步骤包括：
a.将海稻86和长粒香分别种植在两块质地相同的田地里(1亩)；
b.分别将一亩田地分为4大块，分别灌溉0、0.3％、0.6％、0.9％稀释的海水；
c.及时记录生长情况并且保证灌溉海水的盐度。
d.收割期时随机挑选植株进行蛋白质含量测定。
实验结果
1.耐盐碱水稻和普通水稻在不同盐度水平下的产量统计情况。
表1.在不同盐度水平下两种水稻的产量
由表1可知，在不同盐度条件下，耐盐碱水稻产量没有显著变化，而普通水稻产量则出现了显著下降，在最高浓度下，几乎没产量。这说明耐盐碱水稻可以适应盐碱逆境，具有耐盐碱能力。
在本发明的一实施例中，提供了一种水稻产量的测试方法：
理论亩产量＝亩有效穗数*平均穗粒数*千粒重
具体测产步骤：(1)：田间均匀抽样几个点，在每个点取一平方米的面积(可以事先做一个一平方米的框)，数出每平方米的穗数，算出每平方米的平均穗数a穗；(2)：抽取部分稻穗，数出粒数，算出每穗平均粒数b粒；(3)：干燥部分稻谷，用天平称重，算出平均千粒重c克；
测得亩产＝(a穗*b粒)/1000粒*c克*667平方米/1000
2.蛋白质含量的测定采用如下方法，以小牛血清白蛋白为标准蛋白。具体步骤如下：
(1)：bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝g-250溶于50ml95％乙醇，加入100ml85％的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
(2)：标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug-150ug/100ul之间绘制标准曲线。
(3)：将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用pbs)。
(4)：按1∶5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
(5)：每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min。
(6)：根据标准曲线计算待测样本的浓度。
如图1所示，为本发明耐盐碱水稻和普通水稻在不同盐度水平下的蛋白质含量。其中，可溶性蛋白参与细胞各类代谢活动，是反映细胞活性的重要指标。在多种逆境胁迫下，作物体内正常的蛋白质合成常会受到抑制。图1b数据显示不同盐度处理也会影响水稻可溶性蛋白含量，随着盐度处理浓度的增大，水稻可溶性蛋白含量逐渐降低，最高盐度下，水稻蛋白质含量几乎为0。图1a显示，耐盐碱水稻的蛋白质含量没有显著性差异，这说明细胞活性没有降低，这与产量高的情况相一致，说明该种水稻确实耐盐碱。
以上所述，仅是本发明的几个实施例，并非对本发明做任何形式的限制，虽然本发明以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限制本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于本发明技术方案保护范围内。