本发明具体涉及一种蜂蜜中羟甲基糠醛快速检测试剂、试剂盒及检测方法，属于食品质量安全检测技术领域。
背景技术：
羟甲基糠醛（hmf）在新鲜纯正的蜂蜜中是没有的，它是蜂蜜在贮藏或加热过程中由果糖转化而来的，因此它是辨别蜂蜜是否新鲜的重要标志之一。国际上规定，蜂蜜中的羟甲基糠醛不应该超过40mg/kg，国家标准gh/t18796-2012中也规定，蜂蜜中羟甲基糠醛含量不应超过40mg/kg。
目前测定蜂蜜中的hmf含量的方法主要有液相色谱质谱法、高效液相色谱法、气相色谱法、紫外分光光度法、衍生化分光光度法等。其中液相色谱质谱法、高效液相色谱法虽然较准确，但实验步骤复杂、耗时长，并且需要相关的大型昂贵的精密设备，不适于现场快速检测；而紫外分光光度法方法简单，但由于仪器比较精密昂贵，也不适于现场快速检测。
常用的食品中羟甲基糠醛的现场检测方法为衍生化分光光度法和比色法，虽然操作简单，但是存在人为判定色差、准确性差、检测精度低等问题，影响结果的准确性，而已公布的蜂蜜中羟甲基糠醛快速检测方法中，其试剂和产物具有一定毒性，不适用于农贸市场、超市的大剂量使用。
另外，虽然市场中也有一些相应的检测试剂，但显色效果不好，显色的线性相关度不高，在仪器快检中存在检测精度不高的问题。
技术实现要素：
本发明的目的是在于提供一种配合仪器使用的蜂蜜中羟甲基糠醛快速检测试剂、试剂盒以及相应的检测方法，既能够现场完成对蜂蜜中羟甲基糠醛的快速测定，又可以对食品安全进行实时监管，具有所用试剂简单、不需要复杂的条件和操作简便、快速的特点。
为了完成上述发明目的，本发明提供一种蜂蜜中羟甲基糠醛快速检测试剂，所述试剂包括试剂a和试剂b，所述试剂a为盐酸溶液，所述试剂b为2-硫代巴比妥酸溶液。
更进一步，所述试剂a的浓度为2~9.5mol/l，所述试剂b的浓度为0.01~0.04mol/l。
更进一步，所述试剂a的浓度为2mol/l，所述试剂b的浓度为0.02mol/l。
本发明还提供一种包括所述的蜂蜜中羟甲基糠醛快速检测试剂的试剂盒。
更进一步，所述试剂盒包括1瓶40ml所述试剂a及1瓶40ml的所述试剂b。
更进一步，所述试剂盒还包括样品提取杯，5ml离心管以及滴管。
本发明还提供一种利用所述试剂盒的蜂蜜中羟甲基糠醛的检测方法，所述检测方法包括，多参数生化速测仪标准曲线建立步骤s1和多参数生化速测仪检测步骤s2；
所述多参数生化速测仪标准曲线建立步骤s1包括，
s11，将羟甲基糠醛分析标准品稀释形成标准品稀释液；
s12，向所述标准品稀释液中加入试剂a和试剂b，完成显色反应；
s13，取2ml蒸馏水于洁净干燥比色皿中，放入所述多参数生化速测仪通道内，完成仪器校零；
s14，将反应完成后的所述标准品稀释液倒入比色皿，放入所述多参数生化速测仪的检测通道，测得不同浓度所述标准品稀释液的光谱值，生成标准曲线，利用所述标准曲线计算所述标准品稀释液的浓度，并评估所述标准曲线的线性相关性，如果所述标准曲线的线性方程相关系数r2在0.999至1之间，则认为所述试剂线性相关性合适，并进入所述多参数生化速测仪检测步骤s2；
所述多参数生化速测仪检测步骤包括，
s21，制备蜂蜜检测样品；
s22，向所述蜂蜜检测样品中添加试剂a和试剂b，完成显色反应；
s23，取蒸馏水于洁净干燥比色皿中，放入所述多参数生化速测仪通道内，完成仪器校零；
s24，将反应完成后的溶液倒入比色皿，放入所述多参数生化速测仪的相应检测通道，完成检测，并利用标准曲线计算所述样品的羟甲基糠醛的浓度。
更进一步，所述多参数生化速测仪的检测光源波长为420nm。
采用上面的技术方案后，其显著好处包括：1.本发明所用试剂盒检测羟甲基糠醛显色明显，颜色稳定，同时，0~10mg/kg的羟甲基糠醛标准品在不同浓度梯度下，吸光度呈线性，相关系数r2达到0.999以上；2.本试剂盒能配合仪器自动检测上传，操作简便，不需人工判读，结果更准确，便于现场检测和实时监督管理；3.本方法快速，仪器同时进行10个通道检测，每次检测仅需1秒，多个样品所需时间更少。该方法适合于现场快速检测蜂蜜中的羟甲基糠醛含量，能够对蜂蜜产品的质量水平作出快速判断，检出率高，为维护人们的经济利益和保证人们的食用安全。
具体实施方式
实施例1：
本发明所使用的检测蜂蜜中羟甲基糠醛快速检测试剂盒，其中，试剂部分由试剂a和试剂b组成，其中试剂a为40ml的2mol/l的盐酸溶液1瓶；试剂b为40ml的0.02mol/l的2-硫代巴比妥酸溶液1瓶；测试工具部分包括：样品提取杯：5个；5ml离心管：5个；滴管：1包；说明书：1份。
下面利用多参数生化速测仪为上述快速检测试剂盒建立标准曲线，包括如下步骤：
步骤一，样品的制备，称取0.1013g购于上海阿拉丁生物科技股份有限公司的5-羟甲基糠醛分析标准品，稀释成0，0.25，0.5，1，4，8，10mg/l，定容至2ml于5ml离心管中；
步骤二，显色，向标准品稀释液中加入0.4ml试剂a、0.4ml试剂b，然后30~60℃水浴20分钟；
步骤三，仪器校零，取2ml蒸馏水于洁净干燥比色皿中，放入多参数生化速测仪通道内，在“检测项目”一栏选择“羟甲基糠醛”，然后点击“仪器校零”，仪器自动调节波长至420nm，完成仪器校准；
步骤四，标准曲线建立，将反应完成后的溶液倒入比色皿，放入多参数生化速测仪相应的检测通道，点击“标准曲线建立”，仪器自动调节波长至420nm，生成标准曲线，并利用生成的标准曲线测量检测通道内的标准品稀释液，计算出来的羟甲基糠醛的含量值为0，0.285，0.488，0.991，3.951，7.950，10.07mg/l，所得线性方程相关系数r2为0.9998。
有了上面的标准曲线后，就可以利用上面的标准曲线、快速检测试剂盒以及上述定标过程中所采用的多参数生化速测仪，对样品中所包含的羟甲基糠醛的含量值进行检测，检测过程包括如下步骤：
步骤一，样品的制备，称取1.0g市售蜂蜜至样品提取杯中，加入10ml蒸馏水，用玻璃棒搅拌混匀，静置待检；
步骤二，显色，取2.00ml待测样品于5ml离心管中，然后向离心管中加入0.4ml试剂a、0.4ml试剂b，然后30~50℃水浴20分钟；
步骤三，仪器校零，取2ml蒸馏水于洁净干燥比色皿中，放入多参数生化速测仪通道内，在“检测项目”一栏选择“羟甲基糠醛”，然后点击“仪器校零”，仪器自动调节波长至420nm，校准完成。
步骤四，样本检测，将反应完成后的溶液倒入比色皿，放入仪器相应检测通道，点击“样本检测”，仪器显示羟甲基糠醛的含量值48.23mg/kg，结果为疑似阳性。
接下来验证该蜂蜜中羟甲基糠醛快速检测试剂盒的回收率，包括如下步骤：
步骤一，称取4份1.0g市售蜂蜜至样品提取杯中，分别向其中加入羟甲基糠醛标准品0，15，30，50mg/l，静置一天。
步骤二，向步骤一中所述样品中分别加入10ml蒸馏水，用玻璃棒搅拌混匀，静置待检。
步骤三，显色，取2.00ml待测样品于5ml离心管中，然后向离心管中加入0.4ml试剂a、0.4ml试剂b，然后30~60℃水浴20分钟。
步骤四，仪器校零，取2ml蒸馏水于洁净干燥比色皿中，放入前面定标所采用的多参数生化速测仪通道内，在“检测项目”一栏选择“羟甲基糠醛”，然后点击“仪器校零”，仪器自动调节波长至420nm，校准完成。
步骤五，将反应完成后的溶液倒入比色皿，放入仪器相应检测通道，点击“样本检测”，仪器显示羟甲基糠醛的含量值，换算得回收率为86.80%，96.20%，104.28%。
实施例2：
将实施例1中试剂部分中的试剂a的浓度调整为9.5mol/l，试剂b的浓度调整为0.04mol/l，配制的标准稀释液的浓度分别为0，0.4，0.8，1.6，2.4，3.2mg/l，其它基本不变，仪器测量标准稀释液的羟甲基糠醛的含量值为0，0.784，1.088，1.700，2.304，2.912mg/l，所得线性方程相关系数r2为0.999。
实施例3：
将实施例2中试剂部分中的试剂a的浓度调整为5.1mol/l，试剂b的浓度调整为0.01mol/l，其它基本不变，仪器测量标准稀释液的羟甲基糠醛的含量值为0，0.783，1.089，1.710，2.314，2.915mg/l，所得线性方程相关系数r2为0.9992。
从上面的数据可以看出，试剂a的浓度范围为2~9.5mol/l以及试剂b的浓度为0.01~0.04mol/l时，试剂的显色效果以及线性相关性都比较好，都可以作为检测试剂使用。其中，试剂a的浓度为2mol/l及试剂b的浓度为0.02mol/l，其线性相关性最佳。一般，线性方程相关系数r2在0.999至1之间时认为所述试剂的线性相关度合适，适合检测。
上述实验中的多参数生化速测仪均采用智锐达仪器科技南通有限公司所研发生产的dpr-ⅱ型多参数生化速测仪。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。