一种检测生物可吸收聚酯膜中多种残留有机溶剂的方法与流程

本发明涉及分析检测技术领域，具体说是一种检测生物可吸收聚酯膜中多种残留有机溶剂的方法。

背景技术

聚乳酸类引导膜是一类生物可吸收聚酯膜，它是以聚乳酸类生物可吸收高分子为原料经过特殊工艺制备而成，用于引导组织再生(gtr)或者引导骨再生(gbr)，并且引导作用完成后不用手术取出，可完全被生物吸收，因此需要较高的安全性。另外，在原料和产品的生产过程中不可避免的会使用有机溶剂，由于聚乳酸类生物可吸收高分子材料是一种没有固定分子量，而是不同分子量同系物的混合体系，在聚乳酸类生物可吸收高分子材料生产过程中，为了提高高分子材料分子量的均一性，常常选择适当的溶剂进行纯化，并且引导膜制备过程中也会使用适当的有机挥发物作溶剂或致孔剂，由于这些挥发物在后期处理中很可能不能被完全除去，因此对产品的使用安全存在潜在危险，因而，建立精准的分析检测聚乳酸类可吸收引导膜中多种残留溶剂的方法是十分必要的。

目前的检测方法有以下缺点：第一，只能检测出聚乳酸类材料的其中一种或两种溶剂，并且由于乳酸及环状单体等小分子杂质的沸点和二氧六环的沸点相近，因此聚乳酸产品中的小分子会对二氧六环的检测有干扰，采用现有的方法不能准确的检测出二氧六环的含量；第二，聚乳酸材料的特殊性会对溶剂残留的检测具有干扰，这是由于，聚乳酸类材料的分解温度较高，直接进样带进去的聚乳酸类高分子会污染气相仪器系统，如进样口、衬管、色谱柱等，并且分解后会产生短链碳氢小分子化合物，会对检测带来干扰；第三，根据中华人民共和国药典2015版四部通则0861残留溶剂测定法中规定的残留溶剂含量要求及聚乳酸类可吸收引导膜的原料和制备工艺，必须控制乙醇(第三类溶剂)，丙酮(第三类溶剂)，二氯甲烷(第二类溶剂)，乙酸乙酯(第三类溶剂)，二氧六环(第二类溶剂)的残留量，保证聚乳酸类可吸收引导膜的使用安全。中华人民共和国药典2015版四部通则0861残留溶剂测定法中规定乙醇、丙酮、乙酸乙酯的限度均为0.5％，二氯甲烷的限度为0.06％，二氧六环的限度为0.038％。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种检测生物可吸收聚酯膜中多种残留有机溶剂的方法。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：

一种检测生物可吸收聚酯膜中多种残留有机溶剂的方法，采用顶空气相色谱法，同时检测生物可吸收聚酯膜中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环五种有机溶剂，所述生物可吸收聚酯膜为聚乳酸类引导膜；具体包括以下步骤：

①选定色谱条件：

agilent6890n气相色谱仪(fid检测器)，agilent7697a顶空进样器；

色谱柱：db-624，规格为30m×0.530mm×3.0μm；

柱温：程序升温，起始温度95～105℃，保持4～7min，然后以30℃/min的升温速率升温至175～185℃后保持4～7min；

进样口温度：195～210℃；

检测器温度：240～260℃；

载气：氮气，流速为2.0～4.0ml/min；

分流比：5～15:1；

顶空平衡温度：95～110℃，平衡时间20～40min；

进样方式：顶空进样方式，进样量1ml；

②溶液的配制

对照品贮备液的制备：精密称取乙醇0.98～1.02g、丙酮0.98～1.02g、乙酸乙酯0.98～1.02g，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，作为乙醇、丙酮和乙酸乙酯对照品贮备液；取二氯甲烷1.18～1.22g、二氧六环0.74～0.78g，精密称定，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，取10ml于100ml量瓶中，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中作为二氯甲烷和二氧六环对照品贮备液；

混合对照品贮备液的制备：

精密称取乙醇0.98～1.02g、丙酮0.98～1.02g、乙酸乙酯0.98～1.02g置于100ml的第一容量瓶中，备用，然后再精密称取二氯甲烷1.18～1.22g和二氧六环0.74～0.78g置于100ml的第二容量瓶中，加入二甲基亚砜溶解并定容，取该溶液10ml置于第一容量瓶中，向第一容量瓶中添加二甲基亚砜溶解乙醇、丙酮和乙酸乙酯，定容后得到混合对照品贮备液；

③系统适用性试验

取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液和混合对照品贮备液各10ml分别置于100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释并定容，各取5ml置于顶空瓶中，密封，顶空条件下平衡进样，记录图谱；

④精密度试验

精密量取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液5ml，置于50ml容量瓶中用二甲基亚砜溶解并定容，取5ml于顶空瓶中，密封，顶空条件下平衡进样，连续进样6次，记录各个对照品的相对标准偏差rsd；

⑤线性试验

按体积梯度分别精密量取乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和二氧六环的对照品贮备液，分别置于同体积容量瓶中，加二甲基亚砜溶解并定容，制备一系列的线性试验溶液，然后分别取5ml置于顶空瓶中密封，顶空条件下平衡进样，然后以乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和二氧六环的线性试验液的峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，建立线性回归曲线；

⑥回收率试验

按体积梯度分别精密量取混合对照品贮备液3份，分别置于同体积容量瓶中，用二甲基亚砜溶解并定容，精密量取上述各溶液5ml，置于装有0.98～1.02g待测样品的10ml顶空瓶中，密封，水浴加热至待测样品完全溶解，冷却至室温，得到3个浓度的加样溶液，每个浓度平行制备3份，在顶空条件下平衡进样，计算各组分回收率；

⑦检测限和定量限试验

依次分别用二甲基亚砜稀释乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液，逐级稀释，以信噪比s/n≥3计算检测限，以信噪比s/n≥10计算定量限；

⑧样品检测

精密称取聚乳酸类引导膜0.98～1.02g，置于顶空瓶中，加入二甲基亚砜5ml密封后，水浴加热(温度在90℃以下)至聚乳酸类引导膜完全溶解，冷却至室温作为待测品溶液，顶空条件下平衡进样，记录色谱图；

精密吸取混合对照品贮备液1ml，置于10ml容量瓶中，用二甲基亚砜溶解定容，作为混合对照品溶液，取5ml混合对照品溶液置于顶空瓶中，密封顶空条件下平衡进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算聚乳酸类引导膜中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环的含量。

优选的，步骤①中选定色谱条件为：

柱温：柱温：程序升温，起始温度100℃，保持5min，然后以30℃/min的升温速率升温至180℃后保持5min；

进样口温度：200℃；

检测器温度：250℃；

载气：氮气，流速为3.0ml/min；

分流比：10:1；

顶空平衡温度：100℃，平衡时间30min。

优选的，步骤②中对照品贮备液的制备步骤为：

取乙醇1.00g、丙酮1.00g、乙酸乙酯1.00g，精密称定，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，作为乙醇、丙酮和乙酸乙酯对照品贮备液；取二氯甲烷1.20g、二氧六环0.76g，精密称定，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，取10ml于100ml量瓶中，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中作为二氯甲烷和二氧六环对照品贮备液。

优选的，步骤⑤线性试验为：

分别精密量取乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和二氧六环的对照品贮备液0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml和1.20ml，分别置于10ml容量瓶中，加二甲基亚砜溶解并定容，制备一系列的线性试验溶液。

优选的，步骤⑥回收率试验为：

取0.80ml、1.00ml和1.20ml混合对照品贮备液分别置于10ml容量瓶中，加入二甲基亚砜溶解并定容，分别取5ml上述溶液置于装有1.00g聚乳酸类引导膜的顶空瓶中，密封，80℃水浴加热至聚乳酸类引导膜完全溶解，冷却至室温，得到3个浓度的加样溶液，每个浓度平行制备3份，在顶空条件下平衡进样，计算各组分回收率。

优选的，步骤⑧样品检测为：

精密称取聚乳酸类引导膜1.00g，置于顶空瓶中，加入二甲基亚砜密封后，80℃水浴加热至聚乳酸类引导膜完全溶解，冷却至室温作为待测品溶液，然后将待测品溶液和乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液分别顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算聚乳酸类引导膜中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环的含量。

本发明相比现有技术具有以下优点：

本发明的检测生物可吸收聚酯膜中多种残留有机溶剂的方法，采用顶空气相色谱法能够同时检测出乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环五种溶剂，灵敏度高，重复性好，准确度高；由于采用的是外标法，不需要其他的标准物质作为内标物，只需要检测组分的纯物质，对进样精度的要求低，操作简单；由于采用顶空气相色谱法，避免了聚乳酸产品对检测的干扰，不会污染气相仪器系统，并且分解后产生的短链碳氢小分子化合物不会对检测结果带来干扰；本发明的检测方法能够避免聚乳酸类高分子材料中的乳酸和环状单体等小分子杂质对二氧六环的干扰，能够准确的检测出二氧六环的残留量。

附图说明

图1乙醇系统适应性试验气相色谱图(附图标记1.乙醇；2.二甲基亚砜)；

图2丙酮系统适应性试验气相色谱图(附图标记1.丙酮；2.二甲基亚砜)；

图3二氯甲烷系统适应性试验气相色谱图(附图标记1.二氯甲烷；2.二甲基亚砜)；

图4乙酸乙酯系统适应性试验气相色谱图(附图标记1.乙酸乙酯；2.二甲基亚砜)；

图5二氧六环系统适应性试验气相色谱图(附图标记1.二氧六环；2.二甲基亚砜)；

图6乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯和二氧六环混合系统适应性试验气相色谱图(附图标记1.乙醇；2.二氯甲烷；3.丙酮；4.乙酸乙酯；5.二氧六环；6.二甲基亚砜)。

具体实施方式

以下结合具体实施例来对本发明作进一步的描述。

实施例1

一种检测生物可吸收聚酯膜中多种残留有机溶剂的方法，采用顶空气相色谱法，同时检测生物可吸收聚酯膜中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环五种有机溶剂，所述生物可吸收聚酯膜为聚乳酸类引导膜；具体包括以下步骤：

①选定色谱条件：

仪器：agilent6890n气相色谱仪(fid检测器)，agilent7697a顶空进样器；agilent色谱工作站；

所用试剂均为色谱纯，聚乳酸引导骨再生膜(批号20170112)；

色谱柱：db-624，规格为30m×0.530mm×3.0μm；

柱温：程序升温，起始温度100℃，保持5min，然后以30℃/min的升温速率升温至180℃后保持5min；

进样口温度：200℃；

检测器温度：250℃；

载气：氮气，流速为3.0ml/min；

分流比：10:1；

顶空平衡温度：100℃，平衡时间30min；

进样方式：顶空进样方式，进样量1ml；

②溶液的配制

对照品贮备液的制备：精密称取乙醇1.00g、丙酮1.00g、乙酸乙酯1.00g，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，作为乙醇、丙酮和乙酸乙酯对照品贮备液；取二氯甲烷1.20g、二氧六环0.76g，精密称定，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，取10ml于100ml量瓶中，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中作为二氯甲烷和二氧六环对照品贮备液；

混合对照品贮备液的制备：

精密称取乙醇1.00g、丙酮1.00g、乙酸乙酯1.00g置于100ml的第一容量瓶中，备用，然后再精密称取二氯甲烷1.20g和二氧六环0.76g置于100ml的第二容量瓶中，加入二甲基亚砜溶解并定容，取该溶液10ml置于第一容量瓶中，向第一容量瓶中添加二甲基亚砜溶解乙醇、丙酮和乙酸乙酯，定容后得到混合对照品贮备液；

③系统适用性试验

取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液和混合对照品贮备液各10ml分别置于100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释并定容，各取5ml置于顶空瓶中，密封，顶空条件下平衡进样，记录图谱；各组分的保留时间及分离度结果如表1所示，各组分的系统适应性图谱如图1～6所示。

表1各组分的保留时间及分离度结果

④精密度试验

精密量取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液5ml，置于50ml容量瓶中用二甲基亚砜溶解并定容，取5ml于顶空瓶中，密封，顶空条件下平衡进样，连续进样6次，记录各个对照品的相对标准偏差rsd，如表2所示，从结果可以看出，各组分的rsd值均在5％之内。

表2各个对照品的rsd结果表(n＝6)

⑤线性试验

分别精密量取乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和二氧六环的对照品贮备液0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml和1.20ml，分别置于10ml容量瓶中，加二甲基亚砜溶解并定容，制备一系列的线性试验溶液，然后分别取5ml置于顶空瓶中密封，顶空条件下平衡进样，然后以乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和二氧六环的线性试验溶液的峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，建立线性回归曲线，结果如表3所示。

表3线性试验测定结果

⑥回收率试验

取0.80ml、1.00ml和1.20ml混合对照品贮备液分别置于10ml容量瓶中，加入二甲基亚砜溶解并定容，分别取5ml上述溶液置于装有1g聚乳酸类引导膜的顶空瓶中，密封，水浴加热至聚乳酸类引导膜完全溶解，水浴温度一般在90℃以下，冷却至室温，得到3个浓度的加样溶液，每个浓度平行制备3份，在顶空条件下平衡进样，计算各组分回收率，结果如表4所示。

表4回收率试验测定结果

⑦检测限和定量限试验

依次分别用二甲基亚砜稀释乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液，逐级稀释，以信噪比s/n≥3计算检测限，以信噪比s/n≥10计算定量限；分别取5ml于顶空瓶中，密封，顶空条件下平衡进样，记录色谱图。检测限及定量限测定结果见表5。

表5各组分的检测限和定量限结果

⑧样品检测

精密称取聚乳酸类引导膜1.00g，置于顶空瓶中，加入二甲基亚砜5ml密封后，水浴加热至聚乳酸类引导膜完全溶解，水浴温度一般在90℃以下，最优温度为80℃，冷却至室温作为待测品溶液，顶空条件下平衡进样，记录色谱图；

精密吸取混合对照品贮备液1ml，置于10ml容量瓶中，用二甲基亚砜溶解定容，作为混合对照品溶液，取5ml混合对照品溶液置于顶空瓶中，密封顶空条件下平衡进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算聚乳酸类引导膜中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环的含量。根据《中华人民共和国药典》2015版常见残留溶剂的限度要求，乙醇不得超过0.5％，丙酮不得超过0.5％，二氯甲烷不得超过0.06％，乙酸乙酯不得超过0.5％，二氧六环不得超过0.038％。

按照上述方法检测样品中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环的残留量分别为：0.019％、0.0021％、0.00057％、0.00014％和0.0045％，五种溶剂的残留量均满足《中华人民共和国药典》安全限度要求。

实施例2

一种检测生物可吸收聚酯膜中多种残留有机溶剂的方法，采用顶空气相色谱法，同时检测生物可吸收聚酯膜中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环五种有机溶剂，所述生物可吸收聚酯膜为聚乳酸类引导膜；具体包括以下步骤：

①选定色谱条件：

仪器：agilent6890n气相色谱仪(fid检测器)，agilent7697a顶空进样器；agilent色谱工作站；

试剂：所用试剂均为色谱纯；聚乳酸类可吸收引导骨再生膜(批号20170517)；

色谱柱：db-624，规格为30m×0.530mm×3.0μm；

柱温：程序升温，起始温度95℃，保持4min，然后以30℃/min的升温速率升温至175℃后保持4min；

进样口温度：195℃；

检测器温度：240℃；

载气：氮气，流速为2.0ml/min；

分流比：5:1；

顶空平衡温度：95℃，平衡时间20min；

进样方式：顶空进样方式，进样量1ml；

②溶液的配制

对照品贮备液的制备：精密称取乙醇0.98g、丙酮0.98g、乙酸乙酯0.98g，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，作为乙醇、丙酮和乙酸乙酯对照品贮备液；取二氯甲烷1.18g、二氧六环0.74g，精密称定，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，取10ml于100ml量瓶中，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中作为二氯甲烷和二氧六环对照品贮备液；

混合对照品贮备液的制备：

精密称取乙醇0.98g、丙酮0.98g、乙酸乙酯0.98g置于100ml的第一容量瓶中，备用，然后再精密称取二氯甲烷1.18和二氧六环0.74g置于100ml的第二容量瓶中，加入二甲基亚砜溶解并定容，取该溶液10ml置于第一容量瓶中，向第一容量瓶中添加二甲基亚砜溶解乙醇、丙酮和乙酸乙酯，定容后得到混合对照品贮备液；

③系统适用性试验

取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液和混合对照品贮备液各10ml分别置于100ml容量瓶中，用二甲基亚砜稀释并定容，各取5ml置于顶空瓶中，密封，顶空条件下平衡进样，记录图谱；

④精密度试验

精密量取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液对照品贮备液5ml，置于50ml容量瓶中用二甲基亚砜溶解并定容，取5ml于顶空瓶中，密封，顶空条件下平衡进样，连续进样6次，顶空进样，记录各个对照品的相对标准偏差rsd；

⑤线性试验

按体积梯度分别精密量取乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和二氧六环的对照品贮备液，分别置于同体积容量瓶中，加二甲基亚砜溶解并定容，制备一系列的线性试验溶液，然后分别取5ml置于顶空瓶中密封，顶空条件下平衡进样，然后以乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和二氧六环的线性试验溶液的峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，建立线性回归曲线；

⑥回收率试验

按体积梯度分别精密量取混合对照品贮备液3份，分别置于同体积容量瓶中，用二甲基亚砜溶解并定容，精密量取上述各溶液5ml，置于装有0.98g待测样品的10ml顶空瓶中，密封，80℃水浴加热至待测样品完全溶解，冷却至室温，得到3个浓度的加样溶液，每个浓度平行制备3份，在顶空条件下平衡进样，计算各组分回收率；

⑦检测限和定量限试验

依次分别用二甲基亚砜稀释乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环的对照品贮备液，逐级稀释，以信噪比s/n≥3计算检测限，以信噪比s/n≥10计算定量限；

⑧样品检测

精密称取聚乳酸类引导膜0.98g，置于顶空瓶中，加入二甲基亚砜5ml密封后，80℃水浴加热至聚乳酸类引导膜完全溶解，冷却至室温作为待测品溶液，顶空条件下平衡进样，记录色谱图；

精密吸取混合对照品贮备液1ml，置于10ml容量瓶中，用二甲基亚砜溶解定容，作为混合对照品溶液，取5ml混合对照品溶液置于顶空瓶中，密封顶空条件下平衡进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算聚乳酸类引导膜中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环的含量分别为0.023％，0.0029％，0.00066％，0.00025％和0.0052％。

实施例3

一种检测生物可吸收聚酯膜中多种残留有机溶剂的方法，采用顶空气相色谱法，同时检测生物可吸收聚酯膜中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六环五种有机溶剂，所述生物可吸收聚酯膜为聚乳酸类引导膜；具体包括以下步骤：

①选定色谱条件：

agilent6890n气相色谱仪(fid检测器)，agilent7697a顶空进样器；

色谱柱：db-624，规格为30m×0.530mm×3.0μm；

柱温：程序升温，起始温度105℃，保持7min，然后以30℃/min的升温速率升温至185℃后保持7min；

进样口温度：210℃；

检测器温度：260℃；

载气：氮气，流速为4.0ml/min；

分流比：15:1；

顶空平衡温度：110℃，平衡时间40min；

进样方式：顶空进样方式，进样量1ml。

②溶液的配制

对照品贮备液的制备：精密称取乙醇1.02g、丙酮1.02g、乙酸乙酯1.02g，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，作为乙醇、丙酮和乙酸乙酯对照品贮备液；取二氯甲烷1.22g、二氧六环0.78g，精密称定，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中，取10ml于100ml量瓶中，分别加二甲基亚砜溶解并定容于100ml量瓶中作为二氯甲烷和二氧六环对照品贮备液；

混合对照品贮备液的制备：

精密称取乙醇1.02g、丙酮1.02g、乙酸乙酯1.02g置于100ml的第一容量瓶中，备用，然后再精密称取二氯甲烷1.22g和二氧六环0.78g置于100ml的第二容量瓶中，加入二甲基亚砜溶解并定容，取该溶液10ml置于第一容量瓶中，向第一容量瓶中添加二甲基亚砜溶解乙醇、丙酮和乙酸乙酯，定容后得到混合对照品贮备液。

其他操作同实施例2。

按外标法以峰面积计算聚乳酸类引导膜(批号20170719)中乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环的含量分别为0.031％，0.0019％，0.00075％，0.00011％和0.0059％。