本发明涉及转基因食品检测技术领域，具体为转基因油菜标准样品及其建立方法。
背景技术
近年来，转基因作物培育技术取得突破进展，陆续推出了一批新品种，在改善农作物品质、提高产量等方面发挥了巨大作用。然而，人们对转基因食品的安全性问题存在着很多的争论。转基因作物的生态风险、可能带来的环境问题、作为食品对人体健康影响的问题、产品加贴标签问题、运输问题、国际贸易问题、知识产权问题等已引起世界广泛性的关注。转基因产品的安全性问题已由学术观点分歧，发展到知识产权、环境问题、经济问题甚至政治问题。欧盟和一些国家相继出台了转基因产品管理法规，我国于2002年3月开始实施《农业转基因生物安全管理条例》及其三个配套管理办法。2001年，欧盟要求对转基因食品进行标识管理，并提出对非转基因食品只要不是有意污染，允许含有1％的转基因产品(阈值)，而不用标识。日本、韩国、澳大利亚等不同国家限量阈值不同，从1％-5％不等。
转基因食品的检测是这些旨在保护生物和生态安全、维护消费者权益、促进贸易和经济健康发展的法规和政策的基本依据，其标准化将为制订、实施和改进这些法规和政策提供有力保证。国内外转基因食品的检测研究刚刚起步，许多问题都有待解决，标准样品则是该领域尚未解决的重要问题。开展转基因成分检验标准样品的研制在保证测试结果的可比性和溯源性、保障食品安全、解决贸易争端，促进经济发展等方面均具有重要的意义。更为严峻的问题是目前国外仅有转基因大豆粉、转基因玉米粉mon810等少数几个品种的标准物质，价格非常昂贵，手续繁多，周转时间长，不能适时地满足检验检疫工作的需要；日本正在加紧研制转基因产品检测的分子dna参考标准物质，用于转基因产品的定量检测；2005年，我们率先在国内研制成功了转基因大豆粉国家二级标准物质，填补了我国在转基因成分检测标准样品方面的空白，但转基因油菜籽等标准样品仍是空白。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供转基因油菜标准样品及其建立方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：转基因油菜标准样品及其建立方法，通过以下方法制备：
(1)、取湘油15油菜籽放在研钵中，于通风橱内加入乙醚和聚乙烯粉末并用研棒搅拌、研磨，待乙醚蒸发后，将其过100目标准筛，收集粉末备用；
(2)、向步骤(1)所获得的粉末中加入等质量的水，搅拌均匀后，静置1h，弃上清，将沉淀物制备成冻干粉；
(3)、以转基因油菜为原料，按照步骤(1)和(2)所述方法制备冻干粉；
(4)、以非转基因油菜籽为原料，按照步骤(1)和(2)所述方法制备冻干粉；
(5)、将步骤(3)制备的冻干粉与步骤(4)制备的冻干粉按2.5：100的重量比例混合后，向混合粉末中加入等质量的水，搅拌均匀后，静置1h，弃上清，将沉淀物制备成冻干粉并分装,用电子螺旋测微器测量厚度(精确到0.01mm)后,放置密封袋封好，密封袋贴标签注明品系名称和厚度，至此，标准样品制作完毕，0-4℃贮存；
(6)、将步骤(5)制备的冻干粉用于对油菜转基因成分的检测：标准样品的太赫兹时域光谱数据的获取；标样用于建立各品系油菜(包括转基因和非转基因的)的太赫兹标准光谱库；标准样品用于对油菜转基因成分的检测；制作标准样品的标准物质原材料来源于各油菜品系的标准物质，标准物质从国家粮食局科学研究院购买，并具有标准物质证书。
(7)、标准样品需在半小时内测试完毕，以避免标准样品在空气中发生的理化变化；标准样品原材料在使用前保持水分含量在12％-15％左右，若水分过高，会影响标准样品对太赫兹辐射的吸收，因此需要使用烘干机进行烘干后再进行制样；12％-15％的水分参数确定来源于粮食安全储藏相关国家标准。
(8)、油菜转基因成分的定性分析。
进一步的，上述步骤(2)-(5)中任一步骤所述的冻干粉，其制备方法为：
s1、样品预冻：先把样品在-80℃冷冻2h；
s2、冷冻过程：关好冰冻干燥机的干燥室门，开始干燥室制冷；干燥室温度降至-35℃时，开始冷却阱制冷；冷却阱制冷温度降至-40℃时，将步骤s1处理的样品迅速放入干燥室内，关好干燥室门；启动真空泵开始抽真空；当真空度降至0.5torr时，结束冷冻过程；
s3、样品干燥：干燥室的温度设置为15℃,当真空度降至0.1torr时，样品已干燥好；
s4、关闭真空泵，使干燥室与外界大气相通，待内外气压平衡后，打开干燥室门，取出样品，迅速旋紧瓶盖。
进一步的，步骤(5)中标准样品的太赫兹时域光谱数据的获取中：将标准样品放置于太赫兹时域光谱仪中，采用透射方式获取标准样品的太赫兹时域光谱数据；检测的环境条件设置为：环境温度：20℃，环境湿度：≤10％；每种油菜品系制作3个标样，每个标准样品测量3次，总共对每种油菜品系测得9组时域光谱数据，取0.2t-1.2t波段作为有效数据进行平均，得到该标样9次平均的时域光谱数据，再利用光谱仪本身的随机软件，获取该标准样品的吸收谱数据和波形，存储到数据库中；对各品系标样重复上述检测过程，建立油菜各品系太赫兹吸收光谱标准数据库。
进一步的，步骤(8)中所述的油菜转基因成分的定性分析中：
a、以0.01t为频率间隔，取0.2t-1.2t太赫兹波段吸收谱的100个数据点；对于样品数据，记为xi(i＝1,2,…,100)；对于标准光谱库中的标样数据，记为yi(i＝1,2,…,100)；
b、按以下公式计算样品数据与对应光谱库标样数据的相关系数；
<mrow><mi>r</mi><mo>＝</mo><mfrac><mrow><munderover><mi>&sigma；</mi><mrow><mi>i</mi><mo>＝</mo><mn>1</mn></mrow><mi>n</mi></munderover><mrow><mo>(</mo><mi>x</mi><mi>i</mi><mo>-</mo><mover><mi>x</mi><mo>&overbar；</mo></mover><mo>)</mo></mrow><mrow><mo>(</mo><mi>y</mi><mi>i</mi><mo>-</mo><mover><mi>y</mi><mo>&overbar；</mo></mover><mo>)</mo></mrow></mrow><mrow><msqrt><mrow><munderover><mi>&sigma；</mi><mrow><mi>i</mi><mo>＝</mo><mn>1</mn></mrow><mi>n</mi></munderover><msup><mrow><mo>(</mo><mi>x</mi><mi>i</mi><mo>-</mo><mover><mi>x</mi><mo>&overbar；</mo></mover><mo>)</mo></mrow><mn>2</mn></msup></mrow></msqrt><msqrt><mrow><munderover><mi>&sigma；</mi><mrow><mi>i</mi><mo>＝</mo><mn>1</mn></mrow><mi>n</mi></munderover><msup><mrow><mo>(</mo><mi>y</mi><mi>i</mi><mo>-</mo><mover><mi>y</mi><mo>&overbar；</mo></mover><mo>)</mo></mrow><mn>2</mn></msup></mrow></msqrt></mrow></mfrac></mrow>
上式中，n＝100,为标准样品数据平均值，为相应光谱库中标样数据平均值，r是计算得到的相关系数；
对标准光谱库中的每一个标样计算相关系统r1,r2,…,rn,…；
从r1,r2,…,rn,…中选取最大的r值，并把对应的标样作为玉米转基因成分的鉴定结果。
进一步的，包括转基因油菜检测基因和阳性标准对照品：
阳性标准对照品：所述的转基因油菜标准样品，最小取样量为100mg；
转基因油菜检测基因，包括：
rt73基因的检测引物和探针序列：
正向引物seqidno：1
反向引物seqidno：2
探针seqidno：3
fata基因的检测引物和探针序列：
正向引物seqidno：4
反向引物seqidno：5
探针seqidno：6。
与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：
1)、本发明采用太赫兹光谱检测方法，通过分析油菜样品的太赫兹光谱信号检测其转基因成分是否阳性，具有样本制备简单、检测速度快、精度高、智能化程度高、对检测人员要求水平低等优点，可有效解决传统生化检测方法存在的检测速度慢、检测过程复杂的问题。
2)、本项标准样品的制备完成及其制备方法的建立，对解决转基因油菜检测分子标准样品的制备技术和稳定性保证技术，开展我国转基因产品检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义及应用价值，转基因产品的测定，也可用于质量控制和评定转基因产品分析方法的准确度。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：
转基因油菜标准样品及其建立方法，通过以下方法制备：
(1)、取湘油15油菜籽放在研钵中，于通风橱内加入乙醚和聚乙烯粉末并用研棒搅拌、研磨，待乙醚蒸发后，将其过100目标准筛，收集粉末备用；
(2)、向步骤(1)所获得的粉末中加入等质量的水，搅拌均匀后，静置1h，弃上清，将沉淀物制备成冻干粉；
(3)、以转基因油菜为原料，按照步骤(1)和(2)所述方法制备冻干粉；
(4)、以非转基因油菜籽为原料，按照步骤(1)和(2)所述方法制备冻干粉；
(5)、将步骤(3)制备的冻干粉与步骤(4)制备的冻干粉按2.5：100的重量比例混合后，向混合粉末中加入等质量的水，搅拌均匀后，静置1h，弃上清，将沉淀物制备成冻干粉并分装,用电子螺旋测微器测量厚度(精确到0.01mm)后,放置密封袋封好，密封袋贴标签注明品系名称和厚度，至此，标准样品制作完毕，0-4℃贮存；
(6)、将步骤(5)制备的冻干粉用于对油菜转基因成分的检测：标准样品的太赫兹时域光谱数据的获取；标样用于建立各品系油菜(包括转基因和非转基因的)的太赫兹标准光谱库；标准样品用于对油菜转基因成分的检测；制作标准样品的标准物质原材料来源于各油菜品系的标准物质，标准物质从国家粮食局科学研究院购买，并具有标准物质证书。
(7)标准样品需在半小时内测试完毕，以避免标准样品在空气中发生的理化变化；标准样品原材料在使用前保持水分含量在12％-15％左右，若水分过高，会影响标准样品对太赫兹辐射的吸收，因此需要使用烘干机进行烘干后再进行制样；12％-15％的水分参数确定来源于粮食安全储藏相关国家标准。
(8)、油菜转基因成分的定性分析。
本实施例中，上述步骤(2)-(5)中任一步骤所述的冻干粉，其制备方法为：
s1、样品预冻：先把样品在-80℃冷冻2h；
s2、冷冻过程：关好冰冻干燥机的干燥室门，开始干燥室制冷；干燥室温度降至-35℃时，开始冷却阱制冷；冷却阱制冷温度降至-40℃时，将步骤s1处理的样品迅速放入干燥室内，关好干燥室门；启动真空泵开始抽真空；当真空度降至0.5torr时，结束冷冻过程；
s3、样品干燥：干燥室的温度设置为15℃,当真空度降至0.1torr时，样品已干燥好；
s4、关闭真空泵，使干燥室与外界大气相通，待内外气压平衡后，打开干燥室门，取出样品，迅速旋紧瓶盖。
本实施例中，步骤(5)中标准样品的太赫兹时域光谱数据的获取中：将标准样品放置于太赫兹时域光谱仪中，采用透射方式获取标准样品的太赫兹时域光谱数据；检测的环境条件设置为：环境温度：20℃，环境湿度：≤10％；每种油菜品系制作3个标样，每个标准样品测量3次，总共对每种油菜品系测得9组时域光谱数据，取0.2t-1.2t波段作为有效数据进行平均，得到该标样9次平均的时域光谱数据，再利用光谱仪本身的随机软件，获取该标准样品的吸收谱数据和波形，存储到数据库中；对各品系标样重复上述检测过程，建立油菜各品系太赫兹吸收光谱标准数据库。
本实施例中，步骤(8)中所述的油菜转基因成分的定性分析中：
a、以0.01t为频率间隔，取0.2t-1.2t太赫兹波段吸收谱的100个数据点；对于样品数据，记为xi(i＝1,2,…,100)；对于标准光谱库中的标样数据，记为yi(i＝1,2,…,100)；
b、按以下公式计算样品数据与对应光谱库标样数据的相关系数；
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上式中，n＝100,为标准样品数据平均值，为相应光谱库中标样数据平均值，r是计算得到的相关系数；
对标准光谱库中的每一个标样计算相关系统r1,r2,…,rn,…；
从r1,r2,…,rn,…中选取最大的r值，并把对应的标样作为玉米转基因成分的鉴定结果。
本实施例中，包括转基因油菜检测基因和阳性标准对照品：
阳性标准对照品：所述的转基因油菜标准样品，最小取样量为100mg；
转基因油菜检测基因，包括：
rt73基因的检测引物和探针序列：
正向引物seqidno：1
反向引物seqidno：2
探针seqidno：3
fata基因的检测引物和探针序列：
正向引物seqidno：4
反向引物seqidno：5
探针seqidno：6。
本发明采用太赫兹光谱检测方法，通过分析油菜样品的太赫兹光谱信号检测其转基因成分是否阳性，具有样本制备简单、检测速度快、精度高、智能化程度高、对检测人员要求水平低等优点，可有效解决传统生化检测方法存在的检测速度慢、检测过程复杂的问题。本项标准样品的制备完成及其制备方法的建立，对解决转基因油菜检测分子标准样品的制备技术和稳定性保证技术，开展我国转基因产品检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义及应用价值，转基因产品的测定，也可用于质量控制和评定转基因产品分析方法的准确度。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。