一种血清抗体检测精度能力验证方法、试剂盒及系统与流程

本发明涉及能力验证技术领域，具体地说，是一种血清抗体检测精度能力验证方法、试剂盒及系统。

背景技术：

抗体(antibody)存在于人和动物血液、组织液及外分泌液中，能够特异性的与抗原结合的结构，特点是其多肽链折叠形成几个由链内二硫键连接成的环状球形结构称为功能区。抗体由重链(heavychain,hchain)和轻链(lightchain,lchain)两部分组成。重链有四个功能区，其中一个功能区在可变区又称vh，其余的在恒定区包括ch1，ch2，ch3。轻链有两个功能区即可变区的vl和恒定区的cl。其中vh和vl由于具有较高抗原结合位点成为抗体分子结合抗原的所在部位。ch1为遗传标志的所在；ch2为抗体分子的补体结合位点，与补体的活化有关；ch3与抗体的亲细胞性有关，是抗体同一些免疫细胞的fc受体的结合部。抗体与抗原的特异性结合有利于抗体的抗菌、抗病毒、中和毒素以及调理、凝集和沉淀抗原、激活补体、在疫病爆发时用于紧急治疗作用，对血清中各类抗体的检测，对疾病的预防与检查具有重要意义，而检测结果是否准确则依赖于实验室的检测能力。

实验室能力验证活动是评价参试实验室测试能力的重要手段之一，而组织者提供给各参试实验室的测试样品则是保证能力验证计划顺利实施的前提条件，能力验证样品不同于一般的实验室测试样品，它必须具备均匀性和稳定性特征，同时还应满足统计评价的要求。现有类似的能力验证样品，为行业、组织或实验室发放的“室间质控品”，质检质控品是由一个或几个人血液样本组成，可以包括正常的抗筛阴性样本或抗筛阳性样本。通过发放这些样本给参与实验室，并回收实验室的检测结果加以分析，获得该实验室对血型抗体检测能力的评估。这类室间质控品的不足之处，在于无法准确评估参与实验室的抗体检测能力。

相对反应强度的判断是免疫血液学检测能力的重要体现，特别是在使用谱细胞进行抗体鉴定时，正确判断各个谱细胞之间的相对反应强度，是正确判定抗体特异性的关键之一。为了准确评估这方面的能力，较为理想的方法是制备出一组定比稀释的、从强到弱的抗体能力验证品，以考察从强凝集到弱凝集整个序列中，实验室检测的精度及其对细微凝集差异的辨别能力，但是目前该类能力验证样品目前还未见报道。

技术实现要素：

本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种血清抗体检测精度能力验证方法。

本发明的第二个目的是，提供一种血清抗体检测精度能力验证试剂盒。

本发明的第三个目的是，提供一种血型抗体效价检测能力验证系统。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种血清抗体检测精度能力验证样方法，包括以下步骤：

a、评估者制备好抗体血清样本及说明书；所述抗体血清样本为一组5～20管效价在相对弱阳性和强阳性之间的不同浓度的抗体血清，且其浓度差值为评估者已知；所述说明书记载了血清抗体检测精度能力验证样的方法；

b、评估者将抗体血清样本顺序按预定规则打乱，并分装成小包装与说明书一同交付给受试者；

c、受试者检测抗体血清的效价，将其按从强到弱的梯度排序，将使用的材料、方法和结果交付给评估者；

d、评估者根据受试者交付的材料、方法和结果，将受试者检测抗体血清效价时所使用的试剂的种类和/或方法的类型纳入评估因素，结合所述抗体样本的标准效价，综合判断、评估受试者的血清抗体检测精度能力。

作为一个优选实施方案，所述抗体血清样本由高效价抗体定比稀释，定比系数为0.5～0.95，即抗体浓度从高至低逐次减少50％～5％，稀释剂为盐水或pbs或ab血清。

作为一个优选实施方案，步骤c所述的材料包含试剂的购买厂商。

作为另一优选实施方案，步骤d之后还包括步骤：评估者将同一受试者多次的血清抗体检测精度能力进行比较；或还包括步骤：评估者将不同受试者的血清抗体检测精度能力进行比较。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种血清抗体检测精度能力验证试剂盒，包含：

抗体血清样本：所述抗体血清样本为一组5～20管效价在相对弱阳性和强阳性之间的不同浓度的抗体血清，且其浓度差值为评估者已知；

说明书：所述说明书记载了血清抗体检测精度能力验证样的方法。

作为一个优选实施方案，所述抗体血清样本由高效价抗体定比稀释，定比系数为0.5～0.95，稀释剂为盐水或pbs或ab血清。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种血清抗体检测精度能力验证系统，包括：

如上所述的血清抗体检测精度能力验证试剂盒；

评估端和受试端：所述的评估端对受试端的血清抗体检测精度能力进行验证；以及

验证平台；所述的验证平台包括：

试剂盒发放记录模块：用于记录评估端向受试端交付血清抗体检测精度能力验证试剂盒的状态；

检测结果记录模块：用于上传和储存受试者检测抗体血清样本的效价的材料、方法和结果；

检测结果分析模块：用于评估端根据检测结果记录模块的材料、方法和结果，将受试者检测抗体样本效价时所使用的试剂的种类和/或方法的类型纳入评估因素，结合所述抗体样本的标准效价，评估受试者的血清抗体检测精度能力；

检测结果反馈模块：用于评估端将血清抗体检测精度能力的结果反馈给受试者。

作为一个优选实施方案，所述的血清抗体检测精度能力验证系统还包括统计比较模块，用于比较同一受试者多次的血清抗体检测精度能力，或不同受试者的血清抗体检测精度能力。

对于多家参与能力验证的实验室而言，本发明的能力验证样本也分为许多组，每一组的抗体序列打乱规则不同，而参与实验室在提交答案前并不知道自己检测的样品是哪一组，因此避免了不同实验室之间比对答案的情况发生，为验证专业实验室在血清抗体检测精度能力方面是否符合质量体系要求提供了一种更加有效的评估工具，适于在质量体系的建设中广泛推广应用。

本发明的血清抗体检测精度能力验证方法，可用于验证或评估免疫血液学实验室(从事红细胞血型检测的实验室)或专业技术人员对血清中抗体强弱的判断能力，也可以为验证专业实验室在血型抗体检测能力方面，是否符合质量体系要求，提供评估工具。

本发明的血清抗体检测精度能力验证方法，可根据具体需要将抗体血清样本设置为不同定比系数，实现对不同精度检测能力验证的目的，可以有效评估实验室对弱、中、强抗体的检测能力，对于复杂抗体特异性的鉴定，有着关键性意义。

附图说明

图1是本发明的血清抗体检测精度能力验证方法的流程图。

图2是参试单位扣分值分布情况图，其中，横坐标为扣分值，纵坐标为该扣分值的单位数。

图3是不同类型实验室扣分值分布(％)，其中，横坐标为扣分值，纵坐标为各类实验室百分比。

图4是检测精度评估各类实验室扣分的均值及分布范围，其中，横坐标为实验室类型、数量及平均扣分值，纵坐标为分值(所有扣分值大于29分的情况均按20分计算)，途中横线为平均数，竖线表示数值分布范围；注：各类实验室扣分值的中位数均为4分。

图5是基于不同厂商试剂的扣分值分布，其中，横坐标为扣分值，纵坐标为各方法检出的百分比；注：图例里所有试剂的应用实验室均大于5家。

图6是本发明的血清抗体检测精度能力验证系统的结构示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围；此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1血清抗体检测精度能力验证方法

参见图1，图1是本发明的血清抗体检测精度能力验证的方法的流程图，包括以下步骤：

a、评估者制备好抗体血清样本及说明书；所述抗体血清样本为一组5～20管效价在相对弱阳性和强阳性之间的不同浓度的抗体血清，且其浓度差值为评估者已知；所述说明书记载了血清抗体检测精度能力验证样的方法。

b、评估者将抗体血清样本顺序按预定规则打乱，并分装成小包装与说明书一同交付给受试者。

c、受试者检测抗体血清的效价，将其按从强到弱的梯度排序，将使用的材料、方法和结果交付给评估者。

d、评估者根据受试者交付的材料、方法和结果，将受试者检测抗体血清效价时所使用的试剂的种类和/或方法的类型纳入评估因素，结合所述抗体样本的标准效价，综合判断、评估受试者的血清抗体检测精度能力。

其中，所述抗体血清样本由高效价抗体定比稀释，定比系数为0.5～0.95，稀释剂为盐水或pbs或ab血清。所述受试者可以是单位或个人；双方交付的方式可以是邮寄、快递、当面交付等；在对受试者的血清抗体检测精度能力综合评估后，还可以对不同受试者的血清抗体检测精度能力进行比较，或对同一受试者多次的血清抗体检测精度能力进行比较。

实施例2血清抗体检测精度应用实例

将效价为128的抗体，以ab血清作为稀释液，按1.5倍的稀释度连续稀释12管抗体，从第1管至第12管的抗体效价依次为85、57、38、25、17、11、7.5、5.0、3.3、2.2、1.5、0.98；

将定比稀释的抗体血清顺序按预定规则打乱，并分装成小包装分发到应用实验室，要求实验室在打乱顺序的一组抗体血清样品中，通过实验分辨出抗体浓度从强到弱的梯度，将答案与打乱前抗体从强到弱的顺序比较，判断是否一致，或有多大的区别；

对于多家参与能力验证的实验室而言，本能力验证品也分为许多组，每一组的抗体序列打乱规则不同，而参与实验室在提交答案前并不知道自己检测的样品是哪一组，因此避免了不同实验室之间比对答案的情况发生。

本次能力验证共回收143份答卷，其中来自血液中心11份；来自中心血站或综合三甲医院112份；来自三甲专科及非三甲医院20份。

检测精度评估实验(排序)主要评估对检测结果强度差异的辨别能力。最后的得分为答卷中排列顺序与抗体稀释顺序的差异值。如果答卷中排序完全正确，则分值为“0”；答卷中排序与抗体稀释顺序每相差1位，则分值增加1，例如1～12排序中，第5管与第7管顺序颠倒，其它均正确，则最终得分为4。

本次检测精度能力评估，从结果分析，大部分实验室扣分数在10分之内，少部分错误大于10分，对于超过20分的实验室，可能未能了解和掌握精度检测的目的或方法(图2-4)。结果显示，各个参试单位的差异性明显。除去分值两端的“0分”和“>20分”的数据后，其余数据基本呈正态分布。不同类型参试实验室之间的差异并不明显，但同一类型不同实验室之间的差异很大。不同厂商试剂对精度检测影响不大(图5)。

实施例3血清抗体检测精度能力验证试剂盒

一种血清抗体检测精度能力验证试剂盒，包含：

抗体血清样本：所述抗体血清样本为高效价抗体定比稀释为一组5～20管效价在相对弱阳性和强阳性之间的不同浓度的抗体血清，定比系数为0.5～0.95，且每组抗体浓度差值为评估者已知；

说明书：所述说明书记载了血清抗体检测精度能力验证样的方法。

实施例4血清抗体检测精度能力验证系统

参见图6，图6是本发明的血清抗体检测精度能力验证系统的结构示意图，

所述血清抗体检测精度能力验证系统包括：

血清抗体检测精度能力验证试剂盒：所述的血清抗体检测精度能力验证试剂盒如实施例3所述；

评估端和受试端：所述的评估端对受试端的血清抗体检测精度能力进行验证；以及

验证平台；所述的验证平台包括：

试剂盒发放记录模块：用于记录评估端向受试端交付血清抗体检测精度能力验证试剂盒的状态，如“已交付”、“未交付”，还可记录交付日期、交付方式、发放次数等；

检测结果记录模块：用于上传和储存受试者检测抗体血清样本的效价的材料、方法和结果；

检测结果分析模块：用于评估端根据检测结果记录模块的材料、方法和结果，将受试者检测抗体样本效价时所使用的试剂的种类和/或方法的类型纳入评估因素，结合所述抗体样本的标准效价，评估受试者的血清抗体检测精度能力；

检测结果反馈模块：用于评估端将血清抗体检测精度能力的结果反馈给受试者，还可记录和传送评估端给予受试端的指导建议。

所述的所述血清抗体检测精度能力验证系统还可以包括统计比较模块，用于比较同一受试者多次的血清抗体检测精度能力，或不同受试者的血清抗体检测精度能力。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。