1.一种提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)标准品溶液的配制:取标准品,溶解,制得标准品溶液;
(2)供试品溶液的配制:取新鲜叶片,研磨提取色素,制得供试品溶液;
(3)分别吸取标准品溶液、供试品溶液注入高效液相色谱仪,其色谱条件如下:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;检测波长:300~600nm;流动相:以甲醇-乙腈-四氢呋喃混合溶液为流动相A,以甲醇-乙酸乙酯混合溶液为流动相B;
其流动相所采用的线性梯度洗脱程序如下:
0~9min,流动相A相所占的体积比为100%,流动相B相所占的体积比为0%;
9~12min,流动相A相所占的体积比为100%→0%,流动相B相所占的体积比为0%→100%;
12~30min流动相A相所占的体积比为0%,流动相B相所占的体积比为100%;
30~40min流动相A相所占的体积比为100%,流动相B相所占的体积比为0%。
2.根据权利要求1所述的提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,步骤(1)中所述标准品包括:新黄质、紫黄质、叶黄素、玉米黄质、叶绿素a、叶绿素b。
3.根据权利要求1-2任一项所述的提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,步骤(1)中溶解采用的溶剂为乙醇。
4.根据权利要求1-3任一项所述的提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,步骤(2)中提取色素是加入丙酮研磨提取。
5.根据权利要求1所述的提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,步骤(2)中所述提取方法如下:取新鲜叶片置于4℃预冷的80%丙酮中,快速充分研磨,离心(4℃,18000g×10min),取上清,即得供试品溶液。
6.根据权利要求1所述的提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,步骤(3)中所用色谱柱为GRACE-C18色谱柱,规格为4.6mm×250mm,5μm。
7.根据权利要求1所述的提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,步骤(3)中所述检测波长为445nm。
8.根据权利要求1所述的提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,步骤(3)中所述色谱条件还包括:流速为0.8~1.2ml/min,柱温为25~40℃,进样量为5~20μL。
9.根据权利要求8所述的提取分离植物叶绿体色素的高效液相方法,其特征在于,所述色谱条件中流速为1.0ml/min,所述柱温为30℃,进样量为10μL。