一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢物组合及其筛选方法与流程

文档序号:20913580发布日期:2020-05-29 13:14阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物,其特征是,由葡萄糖醛酸、神经节苷脂、苦蘵甾醇和苯硫酚4种代谢物中的一种或一种以上组成。

2.一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物的筛选方法,其特征是,该方法用于筛选权利要求1所述的代谢组合物,包括以下步骤:

(1)在进行肾移植手术前,收集受体血液样品,进行预处理;

(2)应用超高效液相色谱系统uhplc对预处理后的样品进行分离;

(3)对经步骤(2)分离后的样品进行质谱分析;

(4)对步骤(3)得到的原始数据进行处理,每个样品生成包含核质比、保留时间、峰面积三维信息的csv数据;

(5)从数据库中搜索,根据匹配因子推测识别代谢物,得到可识别的代谢物;

(6)选择每个样品中均测到的代谢物做进一步分析,先进行归一化处理,再进行单因素统计分析,根据studentt检验p值<0.05为筛选标准,进行筛选;

(7)应用simca软件和metaboanalyst网站进行多维统计分析,构建统计分析模型,多维统计学分析包括主成分分析pca和正交偏最小二乘判别分析opls-da;

(8)根据opls-da模型得到变量权重值vip,以vip>1.5为标准筛选,得到初筛代谢物;

(9)采用hmdb数据库对初筛代谢物进行检索比对,得到用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物。

3.根据权利要求2所述的一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物的筛选方法,其特征是,步骤(1)具体为:在进行肾移植术前取受体全血3~5ml,置于不加抗凝剂的ep管中,0~5℃下6000~12000rpm离心5~12min,取上清液,经液氮速冻后,置于-85~-75℃保存待用;

预处理方法:样品于4℃环境下解冻后,与预冷甲醇按照1:3体积比混合均匀,静置30s,振荡30s,13500rpm离心20min,取上清,作为分析样品。

4.根据权利要求2所述的一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物的筛选方法,其特征是,步骤(2)中采用hilic色谱柱,柱温45℃,进样量5μl,流动相组成:流动相a为0.1%甲酸/水(v/v),流动相b为0.1%甲酸/甲醇(v/v);整个分析过程中将样品置于10℃自动进样器中。

5.根据权利要求2所述的一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物的筛选方法,其特征是,步骤(3)中分别采用电喷雾电离esi正离子和负离子模式进行检测。

6.根据权利要求2所述的一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物的筛选方法,其特征是,步骤(5)中,设定匹配因子在80%之上的化合物为可识别。


技术总结
本发明公开了一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物,由葡萄糖醛酸、神经节苷脂、苦蘵甾醇和苯硫酚4种代谢物中的一种或一种以上组成。本发明还公开了一种用于心脏死亡后捐献受体术前预警移植肾延迟复功的代谢组合物的筛选方法,本发明筛选的得到的代谢组合物中,葡萄糖醛酸、神经节苷脂的结合指示率为0.885,苦蘵甾醇和苯硫酚的结合指示率为0.953。

技术研发人员:沈佳;邓皓;黄洪锋;陈江华;王仁定
受保护的技术使用者:浙江大学
技术研发日:2020.01.13
技术公布日:2020.05.29
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