本发明涉及磷脂酶的生产制备领域，具体地，涉及磷脂酶d的制备方法。
背景技术：
磷脂酶d作为磷脂酰丝氨酸的制备原料，在生产中的应用极为广泛。而众所周知，大麦芽往往是在酿酒等生产中大量需要的原料，而作为生产大麦芽必然会产生的大麦根，则往往基本没有什么情况是需要大量使用到的，因此，往往大麦根则会被作为生产垃圾予以处理。但是大麦根中含有大量的磷脂酶d。
因此，提供一种能采用大麦根为原料，制得磷脂酶d，大大降低生产成本的磷脂酶d的制备方法是本发明亟需解决的问题。
技术实现要素：
针对上述现有技术，本发明的目的在于克服现有技术中大麦根，则往往基本没有什么情况是需要大量使用到的，因此，往往大麦根则会被作为生产垃圾予以处理，从而导致大麦根得不到有效利用的问题，进而提供一种能采用大麦根为原料，制得磷脂酶d，大大降低生产成本的磷脂酶d的制备方法。
为了实现上述目的，本发明提供了一种磷脂酶d的制备方法，其中，所述制备方法包括：
1)将大麦根加水浸提，制得浸提物m1；
2)将浸提物m1经至少一次离心后，取上清液m2；
3)向上清液m2中加入硫酸铵溶液混合盐析后，经离心，取下层沉淀，制得磷脂酶d。
通过上述技术方案，本发明先将大麦根加水浸提，而后将浸提后的产物经过至少一次离心，去离心后的上清液，而后向上清液中加入硫酸铵溶液进行盐析，使得进一步将大麦根中的磷脂酶d进行提取，而后再次经过离心，取离心后的沉淀，即得到含有磷脂酶d的产物。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供了一种磷脂酶d的制备方法，其中，所述制备方法包括：
1)将大麦根加水浸提，制得浸提物m1；
2)将浸提物m1经至少一次离心后，取上清液m2；
3)向上清液m2中加入硫酸铵溶液混合盐析后，经离心，取下层沉淀，制得磷脂酶d。
本发明先将大麦根加水浸提，而后将浸提后的产物经过至少一次离心，去离心后的上清液，而后向上清液中加入硫酸铵溶液进行盐析，使得进一步将大麦根中的磷脂酶d进行提取，而后再次经过离心，取离心后的沉淀，即得到含有磷脂酶d的产物。
这里各物质的用量可以根据实际需要进行选择，当然，在本发明的一种优选的实施方式中，为了使制得的酶的酶活更高，相对于10重量份的所述大麦根，步骤1)中所述水的用量为100-300重量份，所述所述硫酸铵溶液的用量为50-200重量份。
当然，为了使浸提效果更好，能更为有效地将大麦根中的磷脂酶d提取出，一种更为优选的实施方式中，步骤1)中所述大麦根可以进一步选择为大麦根粉末。
当然，这里的浸提可以按照本领域常规方式进行操作，浸提条件可以不作限定，在本发明的一种更为优选的实施方式中，为了进一步提高浸提效果，进一步增加酶活，步骤1)中浸提时间为15-30h，浸提温度为30-40℃。
进一步优选的实施方式中，步骤2)中可以选择为至少包括第一次离心和第二次离心；且，第一次离心的离心速率为1500-3000r/min，离心时间为5-20min；第二次离心的离心速率为3000-5000r/min，离心时间为3-10min。
进一步优选的实施方式中，步骤3)中硫酸铵的浓度可以选择为20-35重量％。这里是指相对于100重量份的硫酸铵溶液，硫酸铵的含量为20-35重量份。
当然，更为优选的实施方式中，步骤3)中盐析时间可以进一步选择为3-6h。
步骤3)中离心过程可以按照常规方式进行操作，例如，一种优选的实施方式中，为了提高酶活，步骤3)中离心过程的离心速率为3000-6000r/min，离心时间为8-15min。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，所述大麦根粉末、所述硫酸铵为常规市售品。
实施例1
1)将10重量份的大麦根粉末加100重量份的水于30℃的条件下浸提15h，制得浸提物m1；
2)将浸提物m1以1500r/min的速率离心5min后，再以3000r/min的速率离心3min，取上清液m2；
3)向上清液m2中加入50重量份的硫酸铵溶液(浓度为30重量％)混合盐析3h后，经3000r/min的速率离心8min，取下层沉淀，制得含磷脂酶d的酶液a1。(酶活为97.2u/g)
实施例2
1)将10重量份的大麦根粉末加300重量份的水于40℃的条件下浸提30h，制得浸提物m1；
2)将浸提物m1以3000r/min的速率离心20min后，再以5000r/min的速率离心10min，取上清液m2；
3)向上清液m2中加入200重量份的硫酸铵溶液(浓度为30重量％)混合盐析6h后，经6000r/min的速率离心15min，取下层沉淀，制得含磷脂酶d的酶液a2。(酶活为93.5u/g)
实施例3
1)将10重量份的大麦根粉末加200重量份的水于35℃的条件下浸提20h，制得浸提物m1；
2)将浸提物m1以2200r/min的速率离心10min后，再以4000r/min的速率离心7min，取上清液m2；
3)向上清液m2中加入120重量份的硫酸铵溶液(浓度为30重量％)混合盐析5h后，经4500r/min的速率离心12min，取下层沉淀，制得含磷脂酶d的酶液a3。(酶活为96.3u/g)
实施例4
按照实施例1的制备方法进行制备，不同的是，所述水的用量为50重量份，制得含磷脂酶d的酶液a4。(酶活为63.5u/g)
实施例5
按照实施例1的制备方法进行制备，不同的是，所述水的用量为500重量份，制得含磷脂酶d的酶液a5。(酶活为63.2u/g)
实施例6
按照实施例2的制备方法进行制备，不同的是，所述硫酸铵溶液的用量为20重量份，制得含磷脂酶d的酶液a6。(酶活为49.8u/g)
实施例7
按照实施例2的制备方法进行制备，不同的是，步骤2)中仅经过第一次离心，制得含磷脂酶d的酶液a7。(酶活为56.5u/g)
实施例8
按照实施例3的制备方法进行制备，不同的是，硫酸铵的浓度为10重量％，制得含磷脂酶d的酶液a8。(酶活为51.9u/g)
对比例1
按照实施例3的制备方法进行制备，不同的是，步骤3)中不加入硫酸铵溶液混合盐析，制得含磷脂酶d的酶液d1。(酶活为15.3u/g)
对比例2
按照实施例3的制备方法进行制备，不同的是，不经过步骤2)，制得含磷脂酶d的酶液d2。(酶活为23.6u/g)
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。