一种枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的快速双信息薄层鉴别方法与流程

本发明涉及一种枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的快速双信息薄层鉴别方法。属于中药的薄层鉴别领域。即，采用薄层色谱鉴别，在同一块薄层板上，4种不同的检视条件下，检视到枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的双信息斑点。

背景技术：

所谓的快速双信息薄层鉴别方法，顾名思义就是薄层鉴别简便、快捷、高效，供试品溶液和对照药材溶液，不需要反复提纯处理，无蒸发、浓缩等污染环境的操作程序，用适宜的溶剂超声后，多不需滤过，上清液点样、展开、检视、即可，很快就能得到薄层结果。所谓的双信息系指一块薄层板，展开1次，可获得不同检视条件下的两种信息斑点。与常规的薄层鉴别相比，提高了被检测物的质量可控性，有利于市场质量监督，确保人民用药的安全与有效。

枳椇子为鼠李科植物枳椇hoveniadulcisthunb.的干燥成熟种子。具有止咳除烦，清湿热，解酒毒之功效。用于酒精肿毒，烦渴呕逆，两便不利等症。其主要成分有皂苷、糖苷、生物碱、黄酮类、山奈酚、洋芹素，脂肪酸等。曾收载在1992年版卫生部药品标准中药材第一册^【1】，标准比较简单，仅收载的常规检查和显微鉴别，无薄层鉴别和定量测定指标。虽然有报薄层鉴别的文献^【2】，但方法比较繁琐、费时，具体操作是：取枳椇子药材粉末0.5g，以75％的乙醇为溶剂，索氏提取3.5小时，提取液过滤，减压回收乙醇至无醇味，热水分散，放冷，石油醚(60～90℃)脱脂3次，水液浓缩、80℃干燥成干浸膏，粉碎成细粉，加乙酸乙酯10ml，回流提取2次，每次15分钟，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml,使溶解，作为供试品溶液。另取槲皮素对照品，加乙醇制成每1ml含0.33mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，先以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶0.8)为展开剂，饱和10分钟，展至约4cm，取出，晾干；再以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5.5∶2∶0.3)为展开剂，展至约10cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，待乙醇挥干后，置紫外光灯365nm下，检视荧光斑点。该薄层鉴别总花费时间约8～10小时，有机溶剂数百毫升(因为有部分操作没有数字，只能是估算)，还要展开两次，成本高、效率低、严重污染环境，其检测速度无法与现代化机械化生产匹配。还未查阅到其他方法报道。

为快速多信息控制枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉质量，并为其制备工艺提供科学依据，本着简便、快捷、低成本、高效率、多信息的宗旨，对枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉进行了专题薄层鉴别研究。获得了一种简便、快捷、无环境污染的枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的快速双信息薄层鉴别方法。下面就枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的制备工艺描述如下：

枳椇子药材系指将采集的枳椇子，净选、除去杂质，干燥，即得。

枳椇子颗粒系指将枳椇子药材，稍加破碎，松松地装袋，用水煎煮2次，每次1～2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩到适宜的相对密度，喷雾干燥，将干燥粉，加适量糊精，混合均匀，制成颗粒，即得。

枳椇子标煎液干粉系指将枳椇子药材，稍加破碎，松松地装袋，用水煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，常温浓缩到适宜相对密度，置60℃烘箱内，烘干，粉碎，即得。

技术实现要素：

创建了一种枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的快速双信息薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法得到供试品与药材溶液，分别点于同一块薄层板上，展开后，在4种检视条件下，检视到枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的荧光斑点、无荧光斑点和橙红色斑点，荧光斑点和增荧光的斑点是同一种化合物，无荧光斑点和橙红色斑点是同一种化合物。而且增荧光和显色后，灵敏度显著增强，更利于在复方制剂中的检测和判断。两种化合物斑点交错，互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补。还未见相同报道。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

取枳椇子颗粒和标煎液干粉各0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理10分钟，上清液作为供试品溶液。另取枳椇子药材粉2g，加水50ml，小火煎煮30分钟，棉花滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml，使溶解，作为药材溶液。吸取颗粒供试品溶液5μl、标煎液干粉溶液4μl、药材溶液8～10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶8∶0.1)为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与枳椇子药材色谱相应的位置上，显相同的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与枳椇子药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至黄色斑点呈现，置紫外光灯365nm检视，供试品色谱中，在与枳椇子药材色谱相应的位置上，显相同的亮黄绿色荧光主斑点；再喷以体积比1∶7的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合液，105℃加热至红色斑点呈现，暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色主斑点。

本发明的原理如下：

依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用适宜的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着选用的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然有重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的颜色斑点，获得双信息的薄层色谱图。

本发明的创新点及有益效果如下：

1.创建了一种枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的快速双信息薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法得到供试品与药材溶液，分别点于同一块薄层板上，展开后，在4种检视条件下，检视到枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉的荧光斑点、无荧光斑点和这橙红色斑点，荧光斑点和增荧光的斑点是同一种化合物，无荧光斑点和橙红色斑点是同一种化合物。而且增荧光和显色后，灵敏度显著增强，更利于在复方制剂中的检测和判断。两种化合物斑点交错，互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补，还未见相同报道。与常规的薄层鉴别相比，不但提高了被鉴别物的质量可控性，有利于质量监督，而且方法简便、快捷，高效率、成本低、无环境污染。

2.以体积比3∶8∶0.1的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉后，置紫外光灯365nm下检视，药材和供试品都检视到1个比较暗淡的荧光斑点(图1)；置紫外光灯254nm下检视，药材和供试品都检视到1个棕褐色斑点(图2)；对比图1和图2斑点的形状和大小，荧光斑点和棕褐色斑点有重叠，但不是同一化合物，而且棕褐色斑点不是单一斑点。喷雾10％硫酸乙醇溶液增荧光后，再置紫外光灯365nm下检视，药材和供试品的暗淡荧光斑点变成了亮黄绿色荧光斑点(图3)，荧光强度大幅度增强，灵敏度提升；仅硫酸显色后，薄层板上无清晰的颜色斑点，所以又喷以5％香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶7)的混合液，105℃加热，药材和供试品才能呈现出鲜亮的橙红色斑点(图4)，因颗粒和标煎液干粉，煎煮时间长，红色斑点数比药材多。对比图1、图2、图3、图4的斑点形状和大小，说明荧光斑点和增荧光的斑点是同一种化合物，无荧光斑点和橙红色斑点是同一种化合物。同时对比了用甲醇超声的药材，未检视到双信息斑点，以此揭示了本鉴别检视的双信息斑点，都是提取过程中分解的产物，而且是主产物。是否是发挥治疗作用的主成分，有待进一步的深入研究。该鉴别特征点为首次报道。

3.药材需要水煎煮、蒸干、甲醇定容后，才能获得与供试品一致的薄层主斑点，本颗粒和标煎液干粉则只用甲醇超声，上清液点样即可。尽管药材前处理加了一步水煎煮，花费时间有所增加，比直接超声多了40分钟，但不涉及有害试剂的蒸发与挥散，无环境污染。还称得上是简便、快捷的鉴别方法，药材、颗粒及标煎液干粉的检测，总花费2小时，提取有机溶剂5ml、展开剂12ml，即可对样品质量做出双指标评价，具有较高的实用价值。

4.本鉴别的创新之处还在于：采用了二次显色法，即，第一次喷雾10％硫酸乙醇溶液，增强了原暗淡荧光斑点的荧光；第二次喷雾香草醛硫酸乙醇溶液后，使原本分离不好的棕褐色斑点呈现出单一的红色斑点，提升了分离度和斑点的灵敏度。

5.被检测的信息斑点，增荧光和显色后，扩大了适用范围，提升了枳椇子在复方制剂中的检测灵敏度与斑点的专属性。

附图说明

图1为枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉在紫外光灯365nm下检视的薄层tlc图。

图2为枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉在紫外光灯254nm下检视的薄层tlc图。

图3为枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉用10％硫酸乙醇溶液增荧光后，在紫外光灯365nm下检视的薄层tlc图。

图4为枳椇子药材、颗粒及标煎液干粉用香草醛硫酸乙醇溶液显色后，在暗室内透过灯光下检视的薄层tlc图。

图1、2、3、4为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.2.3.为枳椇子药材；4.为枳椇子标煎液干粉；5.6.为枳椇子颗粒。

本发明具体实施方式如下：

取枳椇子颗粒和标煎液干粉各0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理10分钟，上清液作为供试品溶液。另取枳椇子药材粉2g，加水50ml，小火煎煮30分钟，棉花滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1ml，使溶解，作为药材溶液。吸取颗粒供试品溶液5μl、标煎液干粉溶液4μl、药材溶液8～10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶8∶0.1)为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与枳椇子药材色谱相应的位置上，显相同的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与枳椇子药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至黄色斑点呈现，置紫外光灯365nm检视，供试品色谱中，在与枳椇子药材色谱相应的位置上，显相同的亮黄绿色荧光主斑点；再喷以体积比1∶7的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合液，105℃加热至红色斑点呈现，暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与药材色谱相应的位置上，显相同的橙红色主斑点。

参考文献

【1】卫生部药品标准中药材第一册(1992年版)。

【2】张洪，曾嵘.枳椇子的质量控制[j].国医院药学杂志，2006年26(5)：538-540。