本发明涉及vav3蛋白检测技术领域，具体涉及一种用于检测vav3蛋白的试剂盒及其应用。
背景技术：
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率、死亡率均占恶性肿瘤的第2位，严重威胁中国人民的健康。由于胃癌很难早期诊断，就诊患者多处于进展期，目前中国胃癌患者总的5年生存率仅有30％左右。因此，如能准确预测胃癌患者的预后对判断患者病情、改善患者综合治疗效果有重要的临床价值，但目前尚无标志物能准确预测患者的预后。
技术实现要素：
针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种一种用于检测vav3蛋白的试剂盒及其应用，该试剂盒能够准确检测胃癌组织中vav3蛋白，并能够准确预测患者的预后。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明第一方面提供一种用于检测vav3蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括vav3蛋白抗体、封闭液、抗小鼠生物素化二抗、hrp标记的链亲和素和dab显色液。
本发明上述试剂盒能够基于免疫组织化学法实现对患者肿瘤组织中vav3蛋白的检测，通过对固定在基底上的vav3抗体和抗原进行结合、显色确定肿瘤组织中是否含有vav3蛋白，并可以根据表达情况准确判断患者预后。
优选地，所述封闭液为10％的山羊血清。
本发明第二方面提供一种上述试剂盒在胃癌预后中的应用。
本发明通过检测患者肿瘤组织中vav3蛋白的有无，能够准确预测患者的预后情况。
本发明第三方面提供一种胃癌患者的预后方法，所述预后方法包括如下步骤：
(a)获取胃癌患者肿瘤组织并进行石蜡切片、脱蜡、水化、抗原修复，得到组织切片；
(b)将组织切片置于3％h2o2-甲醇液中浸泡、清洗；
(c)在清洗后的组织切片上滴加封闭液并进行孵育；
(d)去除组织切片表面液体，并滴加vav3蛋白抗体进行孵育、清洗；
(e)在清洗后的组织切片上滴加抗小鼠生物素化二抗进行孵育、清洗；
(f)将dab显色液滴加置清洗后的组织切片上进行显色、冲洗、复染、盐酸酒精分化、脱水、透明、封片、镜检；
(g)根据镜检结果对胃癌患者进行预后。
优选地，所述根据镜检结果对胃癌患者进行预后包括：镜检结果若为阳性，则该胃癌患者存活寿命＜5年；若为阴性，则该胃癌患者寿命≥5年。
优选地，所述步骤(a)中还包括：采用pbs溶液浸泡组织切片10min。
优选地，所述步骤(b)中，浸泡时间为8～12min，清洗为采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min。
通过浸泡能够消除内源性过氧化氢酶的作用，提高检测的准确性。
优选地，所述步骤(c)中，封闭液滴加至能够覆盖组织切片，孵育时间为8～12min。
优选地，所述步骤(d)中，孵育时间为30～60min，清洗为采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min。
优选地，所述步骤(e)中，孵育时间为8～12min；清洗为采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；所述步骤(f)中，显色时间为2～5min。
本发明中对dab显色液不作严格限制，dab显色液可以通过自己配制得到，也可以通过购买现有产品，例如，dab显色液可以为即用型，购买于北京梅科万德生物科技有限公司。
本发明的有益效果体现在：
本发明试剂盒能够基于免疫组织化学法实现对患者肿瘤组织中vav3蛋白的检测，通过对固定在基底上的vav3抗体和抗原进行结合、显色确定肿瘤组织中是否含有vav3蛋白，并可以根据表达情况准确判断患者预后。
具体实施方式
下面对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
以下各实施例采用的原料如下：
vav3蛋白抗体：货号为#2398s；购买于cst。
抗小鼠生物素化二抗：货号为shb131，购买于solarbio。
山羊血清：货号为005-000-121，购买于艾美捷科技有限公司。
hrp标记的链亲和素：货号wiese068，购买于solarbio。
dab显色液：编号1004；购买于北京梅科万德生物科技有限公司。
实施例1
本实施例为一种用于检测vav3蛋白的试剂盒，该试剂盒包括vav3蛋白抗体、封闭液、抗小鼠生物素化二抗、hrp标记的链亲和素和dab显色液；
封闭液为10％的山羊血清。
上述试剂盒能够基于免疫组织化学法实现对患者肿瘤组织中vav3蛋白的检测，通过对固定在基底上的vav3抗体和抗原进行结合、显色确定肿瘤组织中是否含有vav3蛋白，并可以根据表达情况准确判断患者预后。
实施例2
本实施例为一种胃癌患者的预后方法，所述预后方法包括如下步骤：
(a)获取胃癌患者肿瘤组织并进行石蜡切片、脱蜡、水化、抗原修复，得到组织切片，并采用pbs溶液浸泡组织切片10min；
(b)将组织切片置于3％h2o2-甲醇液中浸泡8min，通过浸泡能够消除内源性过氧化氢酶的作用，提高检测的准确性，随后采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(c)在清洗后的组织切片上滴加封闭液至能够覆盖组织切片并进行孵育8min；
(d)去除组织切片表面液体，并滴加vav3蛋白抗体进行孵育60min，随后采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(e)在清洗后的组织切片上滴加抗小鼠生物素化二抗进行孵育12min，采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(f)将dab显色液滴加置清洗后的组织切片上进行显色5min、冲洗、复染、盐酸酒精分化、脱水、透明、封片、镜检；
(g)镜检结果若为阳性，则该胃癌患者存活寿命＜5年；若为阴性，则该胃癌患者寿命≥5年。
实施例3
本实施例为一种胃癌患者的预后方法，所述预后方法包括如下步骤：
(a)获取胃癌患者肿瘤组织并进行石蜡切片、脱蜡、水化、抗原修复，得到组织切片，并采用pbs溶液浸泡组织切片10min；
(b)将组织切片置于3％h2o2-甲醇液中浸泡12min，通过浸泡能够消除内源性过氧化氢酶的作用，提高检测的准确性，随后采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(c)在清洗后的组织切片上滴加封闭液至能够覆盖组织切片并进行孵育12min；
(d)去除组织切片表面液体，并滴加vav3蛋白抗体进行孵育30min，随后采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(e)在清洗后的组织切片上滴加抗小鼠生物素化二抗进行孵育8min，采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(f)将dab显色液滴加置清洗后的组织切片上进行显色2min、冲洗、复染、盐酸酒精分化、脱水、透明、封片、镜检；
(g)镜检结果若为阳性，则该胃癌患者存活寿命＜5年；若为阴性，则该胃癌患者寿命≥5年。
实施例4
本实施例为一种胃癌患者的预后方法，所述预后方法包括如下步骤：
(a)获取胃癌患者肿瘤组织并进行石蜡切片、脱蜡、水化、抗原修复，得到组织切片，并采用pbs溶液浸泡组织切片10min；
(b)将组织切片置于3％h2o2-甲醇液中浸泡10min，通过浸泡能够消除内源性过氧化氢酶的作用，提高检测的准确性，随后采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(c)在清洗后的组织切片上滴加封闭液至能够覆盖组织切片并进行孵育10min；
(d)去除组织切片表面液体，并滴加vav3蛋白抗体进行孵育50min，随后采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(e)在清洗后的组织切片上滴加抗小鼠生物素化二抗进行孵育10min，采用pbs进行清洗3次，每次清洗时间为2min；
(f)将dab显色液滴加置清洗后的组织切片上进行显色4min、冲洗、复染、盐酸酒精分化、脱水、透明、封片、镜检；
(g)镜检结果若为阳性，则该胃癌患者存活寿命＜5年；若为阴性，则该胃癌患者寿命≥5年。
自2011年3月采用上述方法对胃癌患者进行预后，至今总计预后患者130人，在2011年3月至2015年4月期间预后患者数为46人，上述患者采用本发明实施例4的预后方法进行预测，在46人中有34人检测为阳性，12人为阴性，随后跟进患者情况并进行统计，其中，检测为阳性的34人中自采用本发明实施例4的预后方法进行预后时起，存活5年以上仅仅有2人；而检测为阴性的12人中自采用本发明实施例4的预后方法进行预测时起，存活5年以上患者为11人；可见，采用本发明实施例4的预后方法能够准确预测胃癌患者的预后，其准确率可达93.5％。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。