一种同时检测几种植物油中α-生育酚和角鲨烯的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药用辅料与食品领域，具体地说，涉及一种同时检测植物油中a-生 育酷和角蠻帰两种成分的含量测定方法，植物油包括大豆油、特级初棒橄揽油、茶油、葵花 巧油。
【背景技术】
[0002] 大豆油、茶油、橄揽油W及葵花巧油，均含有大量的不饱和脂肪酸、微量元素、维生 素、角蠻帰、黄丽类物质和多酷化合物，营养丰富，具有多种医疗保健功效，大豆油和橄揽油 已应用于脂肪乳制剂。该四种功能性植物油中大量的不饱和脂肪酸，有学者已做过大量的 研究，进行脂肪酸的定性和定量的检测，而生育酷和角蠻帰的含量测定，虽有文献报道，但 是，一般是采用气相色谱法及GC-MS内标法分别单独测定或者同时测定两种成分的 含量。而本专利发明并建立了简便、快速、准确可靠的一种HPLC法，同时检测几种植物油中 a-生育酷和角蠻帰两种成分的含量测定方法，实用性强，对植物油中活性成分的研究、筛 选可W提供数据支持和参考。
[0003] 参考文献；[1]耿树香，宁德鲁，张艳丽，陈海云，李勇杰.不同品种及成熟度橄 揽油中角蠻帰的检测分析[J](英文）.Agri州hural Science&Technology 20131482? 1485. [2]张东生，薛雅琳，金青哲，王兴国，张东，钟诚.油茶巧油中角蠻帰含量的测定[J] 中国油脂.2013年年第卷第期.85-88. [3]毛多斌，贾春晓，孙晓丽，杨公明.几种功能性植 物油中角蠻帰和维生素E分析[J].中国粮油学报.2007年3月第22卷第2期.79-82.
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种含量测定方法同时检测四种植物油（大豆油、特级初棒橄揽油、 茶油、葵花巧油）中a-生育酷和角蠻帰的含量，该方法采用高效液相色谱分离技术，供试 品无需进行皂化处理，直接用溶剂溶解后在同一种色谱条件下同时测定a -生育酷和角蠻 帰两种成分的含量，为该几种植物油成分的分析研究提供参考数据，是一种更简便、快速、 准确的质量分析方法，实用性强，也说明了该含量测定方法的科学性、先进性及测定结果的 准确可靠性。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 一种同时检测几种植物油中a-生育酷和角蠻帰的含量测定方法，包括如下步 骤：
[0007] (1)供试品溶液的制备：
[000引取供试品（大豆油、茶油、特级初棒橄揽油、葵花巧油）各1. 5g，精密称定，置25ml 量瓶中，分别加甲醇-异丙醇-正已焼（体积比15:65:20)溶解并稀释至刻度，摇匀，即为 供试品溶液；
[0009] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量测定：
[0010] 高效液相色谱实验条件如下：色谱柱为Ci8色谱柱；流动相系统；W甲醇-己膳 (70:30)为流动相A，W甲醇-异丙醇-正已焼（体积比15:65:20)为流动相B;洗脱梯度： 0-25min ： 100 % A ；25-27min ：!00% -30% A ；27-37min ：30% A ；37-39min ：30% -100% A ； 39-50min ;100% A ;洗脱时间；50min ;二极管阵列检测器检测波长；210皿和285皿；流速： 1. 2ml ?1. 6ml/min ;柱温；32°C?38°C ;样品进样量；20 y 1 ;
[0011] 对照品溶液的制备；取a-生育酷对照品，制成每1ml分别含3 yg、6yg、12 yg、 30 y g、60 y g的对照品溶液；
[0012] 取角蠻帰对照品，制成每1ml分别含60y g、120y g、240y g、360y g、600y g的对 照品溶液；
[0013] 高效液相色谱测定法；不同浓度的对照品溶液分别W 20 y 1进样，测得210nm波长 下角蠻帰的峰面积和285nm波长下a -生育酷的峰面积，；W所得各标准对照品峰面积为纵 坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算a -生育酷和角蠻帰的 线性回归方程；然后对四种植物油的供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到210nm波长 下角蠻帰的峰面积和285nm波长下a -生育酷的峰面积，根据各自的标准曲线计算供试品 中a-生育酷和角蠻帰的含量，并结合供试品的质量，经计算得到a-生育酷的含量和角蠻 帰的含量，结果见表6。
[0014] 在上述含量测定方法中，所述步骤（2)的色谱条件中流动相系统；W甲醇-己膳 (70 ;30)为流动相A，W甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20)为流动相B ;洗脱梯度；0-25min : 100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min : 100% A ;洗脱时间；50min ;二极管阵列检测器检测波长；210皿和285皿；样品进样量： 20U 1 ；
[0015] 在上述含量测定方法中所述步骤（2)的色谱条件中流速为1. 4ml/min。
[0016] 在上述含量测定方法中所述步骤（2)的色谱条件中所用的色谱柱为；Agilent 肥-Ci8 (4. 6mmX 250mm，5 y m)。
[0017] 在上述含量测定方法中，所述步骤（2)的色谱条件中色谱柱温为35°C。
[0018] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果；本发明利用一种高效液相色谱条件 同时对四种植物油中a -生育酷和角蠻帰的含量进行了测定，供试品溶液无需进行皂化处 理，直接溶解后经高效液相色谱分离测定，产品的甘油H醋成分能洗脱流出，不残留于色谱 柱中，故该检测方法能准确的测定植物油中a-生育酷和角蠻帰两种成分的含量，既可对 植物油该两种活性成分进行分析研究，也可为原料质量标准的制订提供参考，方法简单，可 操作性强，重现性好，准确度高，是检测植物油中a -生育酷和角蠻帰含量的有效方法。
【附图说明】
[0019] 图1为实施例6的210皿下的HPLC色谱图；
[0020] 1角蠻帰对照品；2 a -生育酷对照品；3溶剂；4橄揽油；5葵花巧油；6大豆油；7 茶油。
[0021] 图2为实施例6的285皿下的HPLC色谱图。
[0022] 1溶剂；2 a -生育酷对照品；3橄揽油；4葵花巧油；5茶油；6大豆油。
【具体实施方式】
[0023] 实施例1
[0024] (1)供试品溶液的制备
[00巧]取供试品（特级初棒橄揽油）1.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇-异丙醇-正 已焼（15:65:20)溶解并稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液；
[0026] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量测定
[0027] 高效液相色谱实验条件如下；Ci8色谱柱（Agilent肥-Cig4. 6mmX 250mm，5 y m) ; W 甲醇-己膳（70:30)为流动相A, W甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20)为流动相B;洗脱梯 度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脱时间；50min ;二极管阵列检测器检测波长；210nm和285nm ;流 速；1. 4ml/min ;柱温；32°C ;样品进样量；20iil ;
[0028] a -生育酷和角蠻帰的含量测定方法如下：取a -生育酷对照品，制成每1ml分别 含 3 y g、6 y g、12 y g、30 y g、60 y g 的对照品溶液；
[0029] 取角蠻帰对照品，制成每1ml分别含60y g、120y g、240y g、360y g、600y g的对 照品溶液；
[0030] 高效液相色谱测定法；不同浓度的对照品溶液分别W 20 y 1进样，测得210nm波长 下角蠻帰的峰面积和285nm波长下a -生育酷的峰面积，；W所得各标准对照品峰面积为纵 坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算a -生育酷和角蠻帰的 线性回归方程；然后对供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到210nm波长下角蠻帰的峰 面积和285nm波长下a-生育酷的峰面积，根据各自的标准曲线计算供试品中a-生育酷 和角蠻帰的含量，并结合供试品的质量，经计算得到a -生育酷的含量为0. 016%，角蠻帰 的含量为0. 32%。
[00引]实施例2
[0032] (1)供试品溶液的制备
[0033] 取供试品（特级初棒橄揽油）1. 5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇-异丙醇-正 已焼（15:65:20)溶解并稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液；
[0034] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量测定
[003引 高效液相色谱实验条件如下；Ci8色谱柱（Agilent肥-Cis4. 6mmX 250mm，Sum) 甲醇-己膳（70:30)为流动相A, W甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20)为流动相B;洗脱梯 度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脱时间；50min ;二极管阵列检测器检测波长；210nm和285nm ;流 速；1. 4ml/min ;柱温；38°C ;样品进样量；20iil ;
[0036] a -生育酷和角蠻帰的含量测定方法如下：取a -生育酷对照品，制成每1ml分别 含 3 y g、6 y g、12 y g、30 y g、60 y g 的对照品溶液；
[0037] 取角蠻帰对照品，制成每1ml分别含60 y g、120 y g、240 y g、360 y g、600 y g的对 照品溶液；
[003引高效液相色谱测定法；不同浓度的对照品溶液分别W 20 y 1进样，测得210nm波长 下角蠻帰的峰面积和285nm波长下a -生育酷的峰面积，；W所得各标准对照品峰面积为纵 坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算a -生育酷和角蠻帰的 线性回归方程；然后对供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到210nm波长下角蠻帰的峰 面积和285nm波长下a-生育酷的峰面积，根据各自的标准曲线计算供试品中a-生育酷 和角蠻帰的含量，并结合供试品的质量，经计算得到a -生育酷的含量为0. 015%，角蠻帰 的含量为0. 35%。
[00測 实施例3
[0040] (1)供试品溶液的制备
[0041] 取供试品（特级初棒橄揽油）1.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇-异丙醇-正 已焼（15:65:20)溶解并稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液；
[0042] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量测定
[004引 高效液相色谱实验条件如下；Ci8色谱柱（Agilent肥-Cis4. 6mmX 250mm，Sum) 甲醇-己膳（70:30)为流动相A, W甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20)为流动相B;洗脱梯 度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脱时间；50min ;二极管阵列检测器检测波长；210nm和285nm ;流 速；1. 2ml/min ;柱温；35°C ;样品进样量；20iil ;
[0044] a -生育酷和角