蠻帰的含量测定方法如下：取a -生育酷对照品，制成每1ml分别 含 3 y g、6 y g、12 y g、30 y g、60 y g 的对照品溶液；
[0045] 取角蠻帰对照品，制成每1ml分别含60 y g、120 y g、240 y g、360 y g、600 y g的对 照品溶液；
[0046] 高效液相色谱测定法；不同浓度的对照品溶液分别W 20 y 1进样，测得210nm波长 下角蠻帰的峰面积和285nm波长下a -生育酷的峰面积，；W所得各标准对照品峰面积为纵 坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算a -生育酷和角蠻帰的 线性回归方程；然后对供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到210nm波长下角蠻帰的峰 面积和285nm波长下a-生育酷的峰面积，根据各自的标准曲线计算供试品中a-生育酷 和角蠻帰的含量，并结合供试品的质量，经计算得到a -生育酷的含量为0. 015%，角蠻帰 的含量为0.38%。
[0047] 实施例4
[0048] (1)供试品溶液的制备
[0049] 取供试品（特级初棒橄揽油）1.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇-异丙醇-正 已焼（15:65:20)溶解并稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液；
[0050] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量测定
[0051] 高效液相色谱实验条件如下；Ci8色谱柱（Agilent肥-Cig4. 6mmX 250mm，5 y m) ; W 甲醇-己膳（70:30)为流动相A, W甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20)为流动相B;洗脱梯 度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脱时间；50min ;二极管阵列检测器检测波长；210nm和285nm ;流 速；1. 6ml/min ;柱温；35°C ;样品进样量；20y 1 ;
[0052] a -生育酷和角蠻帰的含量测定方法如下：取a -生育酷对照品，制成每1ml分别 含 3 y g、6 y g、12 y g、30 y g、60 y g 的对照品溶液；
[0053] 取角蠻帰对照品，制成每1ml分别含60y g、120y g、240y g、360y g、600y g的对 照品溶液；
[0054] 高效液相色谱测定法；不同浓度的对照品溶液分别W 20 y 1进样，测得210nm波长 下角蠻帰的峰面积和285nm波长下a -生育酷的峰面积，；W所得各标准对照品峰面积为纵 坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算a -生育酷和角蠻帰的 线性回归方程；然后对供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到210nm波长下角蠻帰的峰 面积和285nm波长下a-生育酷的峰面积，根据各自的标准曲线计算供试品中a-生育酷 和角蠻帰的含量，并结合供试品的质量，经计算得到a -生育酷的含量为0. 015%，角蠻帰 的含量为0.30%。
[00对 实施例5
[0056] (1)供试品溶液的制备
[0057] 取供试品（特级初棒橄揽油）1.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇-异丙醇-正 已焼（15:65:20)溶解并稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液；
[005引 （2) a -生育酷和角蠻帰的含量测定
[0059] 高效液相色谱实验条件如下；Cl泡谱柱（Waters C is4. 6mmX250mm，5 y m) ; W甲 醇-己膳（70:30)为流动相A, W甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20)为流动相B;洗脱梯 度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min ;30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脱时间；50min ;二极管阵列检测器检测波长；210nm和285nm ;流 速；1. 4ml/min ;柱温；35°C ;样品进样量；20iil ;
[0060] a -生育酷和角蠻帰的含量测定方法如下：取a -生育酷对照品，制成每1ml分别 含 3 y g、6 y g、12 y g、30 y g、60 y g 的对照品溶液；
[0061] 取角蠻帰对照品，制成每1ml分别含60y g、120y g、240y g、360y g、600y g的对 照品溶液；
[0062] 高效液相色谱测定法；不同浓度的对照品溶液分别W 20 y 1进样，测得210nm波长 下角蠻帰的峰面积和285nm波长下a -生育酷的峰面积，；W所得各标准对照品峰面积为纵 坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算a -生育酷和角蠻帰的 线性回归方程；然后对供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到210nm波长下角蠻帰的峰 面积和285nm波长下a-生育酷的峰面积，根据各自的标准曲线计算供试品中a-生育酷 和角蠻帰的含量，并结合供试品的质量，经计算得到a -生育酷的含量为0. 016%，角蠻帰 的含量为0. 34%。
[0063] 实施例6
[0064] (1)供试品溶液的制备：
[006引取供试品1.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20) 溶解并稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液；
[0066] (2) a -生育酷和角蠻帰的含量测定：
[0067] 高效液相色谱实验条件如下；Ci8色谱柱（Agilent肥-Cis4. 6mmX250mm，5]im);流 动相系统；W甲醇-己膳（70 ;30)为流动相A，W甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20)为流动 相 B ;洗脱梯度；0-25min ;100% A ;25-27min ;100% -30% A ;27-37min ;30% A ;37-39min : 30% -100% A ;39-50min ;100% A ;洗脱时间；50min ;二极管阵列检测器检测波长；210nm 和285nm ;流速；1. 4ml/min ;柱温；35°C ;样品进样量；20iil ;
[006引对照品溶液的制备；取a -生育酷对照品，制成每1ml分别含3 y g、6 y g、12 y g、 30 y g、60 y g的对照品溶液；
[0069] 取角蠻帰对照品，制成每1ml分别含60y g、120y g、240y g、360y g、600y g的对 照品溶液；
[0070] 1专属性
[0071] 分别取溶剂甲醇-异丙醇-正已焼（15:65:20)、样品溶液、a-生育酷对照品溶 液、角蠻帰对照品溶液各20 y L按实施案例6色谱实验条件进样，记录色谱图。结果：空白 溶剂对测定无干扰，色谱图见图l(210nm下HPLC图）和图2(285nm下HPLC图）；峰纯度分 析结果中，样品溶液的a -生育酷峰纯度匹配值为994,角蠻帰峰纯度匹配值为990,匹配值 均大于980,可确认两组分均为单一组分，专属性好。
[007引 2检测限与定量限
[007引分别取a -生育酷对照品、角蠻帰对照品制成信噪比为10 ;1的溶液，作为定量限 对照液，制成信噪比为3 ; 1的溶液，作为检测限对照液，按实施案例6色谱实验条件进样，记 录色谱图。计算出a-生育酷的定量限为0.09yg，检测限为0.02yg;角蠻帰的定量限为 0. 0025 y g，检测限为 0. 0008 y g。
[0074] 3线性关系考察：
[007引精密量取a -生育酷对照品溶液各20 y 1，注入液相色谱化记录色谱图，W峰面 积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果见表1，从结果可知，标准曲线相关系数R2 =0. 9999,采用的方法在0. 00307mg/ml?0. 06135mg/ml范围内线性良好。
[0076] 表1 a -生育酷线性试验结果
[0077]
【主权项】
1. 一种植物油中α -生育酚和角鲨烯的含量测定方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 供试品溶液的制备： 取供试品I. 5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇-异丙醇-正已烷（体积比 15:65:20)溶解并稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液； (2) α -生育酚和角鲨烯的含量测定： 高效液相色谱法测定色谱条件如下=C18色谱柱；流动相系统：以甲醇-乙腈（70 :30)为 流动相Α，以甲醇-异丙醇-正已烷（体积比15:65:20)为流动相B ;洗脱梯度：0-25 min: 100% A ;25-27 min :100%-30% A ;27-37 min :30% A ;37-39 min :30%-100% A ;39-50 min : 100% A ;洗脱时间：50 min ;二极管阵列检测器检测波长：210 nm和285nm ;流速：1. 2ml? L 6 ml/min;柱温：32°C?38°C ;样品进样量：20 μ 1 ; 对照品溶液的制备：取ct-生育酚对照品，制成每I ml分别含3yg、6yg、12yg、 30 μ g、60 μ g的对照品溶液； 取角鲨烯对照品，制成每I ml分别含60μ g、120y g、240y g、360y g、600y g的对照 品溶液； 高效液相色谱测定法：不同浓度的对照品溶液分别以20 μ 1进样，测得210nm波长下 角鲨烯的峰面积和285nm波长下α -生育酚的峰面积，；以所得各标准对照品峰面积为纵坐 标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算α -生育酚和角鲨烯的线 性回归方程；然后对四种植物油的供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到210nm波长下 角鲨烯的峰面积和285nm波长下α -生育酚的峰面积，根据各自的标准曲线计算供试品中 α -生育酚和角鲨烯的含量，并结合供试品的质量，经计算得到α -生育酚的含量和角鲨烯 的含量。
2. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述步骤（2)的色谱条件中流速 为 L 4 ml/min〇
3. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述步骤（2)的色谱条件中色谱 柱温为35°C。
4. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述四种植物油为大豆油、特级 初榨橄榄油、茶油和葵花籽油。
5. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述步骤（2)的色谱条件中所用 的色谱柱为：AgilengtHC-C18 (4. 6mmX 250mm，5 μ m)。
【专利摘要】本发明公开了一种同时检测几种植物油中α-生育酚和角鲨烯的含量测定方法，包括（1）供试品溶液的制备无需进行皂化处理，直接溶解后测定（2）α-生育酚和角鲨烯两种成分含量测定：利用高效液相色谱技术及二极管阵列检测器的双波长同时测定α-生育酚和角鲨烯的含量，分别对四种植物油的供试品溶液进行高效液相色谱分离并测定，分别得到285nm波长下α-生育酚的峰面积和210nm波长下角鲨烯的峰面积，根据标准曲线计算供试品中α-生育酚和角鲨烯的含量，并结合供试品的质量，经计算得到四种植物油中α-生育酚和角鲨烯的含量。该方法简单，可操作性强，重现性好，准确度高。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104569262
【申请号】CN201410849815
【发明人】王小妹, 梁成聪, 蔡鸿飞, 许文东, 宋晓燕, 谭巧君, 杨阳, 梁北梅
【申请人】广州白云山汉方现代药业有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月30日