一种溪黄草水溶性总黄酮及其指纹图谱检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取物及其质量控制方法，具体涉及溪黄草药材水溶性总黄酮的 制备及其指纹图谱检测方法的建立。
【背景技术】
[0002] 溪黄草原植物为唇形科香茶菜属植物线纹香茶菜Isodon lophanthoides(Buch.-Ham. ex D. Don)H. Hara.的干燥地上部分。主产于长江以南的湖南、 湖北、四川、云南、江西、广东、广西、福建等省区。性味苦、甘、寒，归肝、胆经，具有清热利 湿、退黄、凉血散瘀的功效，用于治疗湿热黄疸、湿热泻痢、跌打瘀痛、急性黄疸型肝炎、急性 胆囊炎、痢疾、肠炎等疾病。
[0003] 溪黄草为华南地区民间习用草药。溪黄草作为清肝利胆药在广东大部分地区民间 有着很长的使用历史。民间和历代名医把溪黄草用作清热祛湿、利胆退黄药，治疗急性黄疸 型肝炎、急性胆囊炎，为预防和治疗肝胆疾病的常用药。
[0004] 溪黄草水提液具有较强的抗炎、保肝活性，溪黄草水提液中具有较多的水溶性成 分，其中水溶性总黄酮所占比例较大。黄酮类化合物具有多方面的生物活性。溪黄草被载 入2010版《中国药典》，质量控制方法有待进一步研宄。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的为制备溪黄草水溶性总黄酮，并建立其HPLC指纹图谱检测方法。 [0006] 为达到本发明的目的所采用的技术方案：用现代色谱技术富集纯化溪黄草水溶性 总黄酮，用高效液相色谱法建立溪黄草水溶性总黄酮的指纹图谱检测方法，具体包括如下 步骤：
[0007] ①、溪黄草水溶性总黄酮的制备：取溪黄草药材，打粗粉，加入10BV的水煎提， 1. 5h，3次，过滤并合并滤液，浓缩至1. 6mg/mL，过HPD100大孔树脂，湿法上样，流速控制在 2BV/h，4BV水洗，5BV的95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液，浓缩回收乙醇，乙酸乙酯萃 取，弃去乙酸乙酯层，水层除去少量乙酸乙酯，浓缩至2.Omg/mL，再湿法上80-100目聚酰 胺柱，流速2BV/h，2BV水洗，6BV30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩、干 燥，即得；
[0008] ②、对照品溶液的制备：精密称取新西兰牡荆苷-2对照品，用水配制成每lmL含新 西兰牡荆苷-20. 2?0. 5mg/mL的溶液，作为对照品溶液；
[0009] ③、供试品溶液的制备：精密称取溪黄草水溶性总黄酮粉末，用水配制成每lmL含 溪黄草水溶性总黄酮〇. 5?1.Omg/mL的溶液，过0. 45ym的微孔滤膜，取续滤液，即得供试 品溶液。
[0010] ④、色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为 甲醇与冰乙酸水溶液组成的梯度洗脱液，紫外检测：波长300-400nm。
[0011] ⑤、测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得 到指纹图谱。
[0012] 进一步优选的方法可以通过下述步骤实施：
[0013] ②对照品溶液的制备，采用精密称取新西兰牡荆苷-2粉末2. 50mg，置于10mL具塞 锥形瓶中，加水溶解，定溶至刻度，配成0. 25mg/mL的新西兰牡荆苷-2溶液，即得。
[0014] ③供试品溶液的制备，采用精密称取溪黄草水溶性总黄酮粉末20.OOmg，置于 25mL具塞锥形瓶中，加20mL水，超声溶解，放冷，加水定容至25mL，配制成0. 80mg/mL的溪 黄草水溶性总黄酮溶液，过0. 45ym滤膜，取续滤液，即得；
[0015] ④色谱条件，采用色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相 为甲醇与〇. 2?2. 0%冰乙酸水溶液组成的梯度洗脱液；柱温20?40°C;紫外检测：波长 300_400nm;流速：0? 5 ?1. 2ml/min;时间：80 ?120min;
[0016] ⑤测定，采用精密吸取供试品溶液10 y L注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱 法则定，得到指纹图谱。
[0017] 本发明最佳的检测方法可以通过下述步骤实施：
[0018] 步骤④色谱条件中流动相为甲醇与0. 5%冰乙酸水溶液组成的梯度洗脱液，柱温： 25°C;检测波长为334nm;流速为0. 8ml/min;分析时间为llOmin。
[0019] 步骤④色谱条件中所述的梯度洗脱，梯度洗脱程序以如下体积浓度配置进行：
[0020] 0分钟时，流动相A为25%的甲醇溶液、流动相B为75%的0. 5%冰乙酸水溶液；
[0021] 25分钟时，流动相A为32%的甲醇溶液、流动相B为68%的0.5%冰乙酸水溶液；
[0022] 40分钟时，流动相A为32%的甲醇溶液、流动相B为68%的0. 5%冰乙酸水溶液；
[0023] 45分钟时，流动相A为34%的甲醇溶液、流动相B为66%的0.5%冰乙酸水溶液；
[0024] 70分钟时，流动相A为36%的甲醇溶液、流动相B为64%的0. 5%冰乙酸水溶液；
[0025] 90分钟时，流动相A为50%的甲醇溶液、流动相B为50%的0. 5%冰乙酸水溶液；
[0026] 110分钟时，流动相A为55 %的甲醇溶液、流动相B为45 %的0. 5 %冰乙酸水溶液。
[0027] 具体见下表：
【主权项】
1. 一种溪黄草水溶性总黄酮及其指纹图谱检测方法，其包括以下步骤： ① 、溪黄草水溶性总黄酮的制备：取溪黄草药材，打粗粉，加入10BV的水煎提，1. 5h，3 次，过滤并合并滤液，浓缩至1. 6mg/mL，过HPD100大孔树脂，湿法上样，流速控制在2BV/h， 4BV水洗，5BV的95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液，浓缩回收乙醇，乙酸乙酯萃取，弃去 乙酸乙酯层，水层除去少量乙酸乙酯，浓缩至2.Omg/mL，再湿法上80-100目聚酰胺柱，流速 2BV/h，2BV水洗，6BV30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩、干燥，即得； ② 、对照品溶液的制备：精密称取新西兰牡荆苷-2对照品，用水配制成每lmL含新西兰 牡荆苷-2 0. 2?0. 5mg/mL的溶液，作为对照品溶液； ③ 、供试品溶液的制备：精密称取溪黄草水溶性总黄酮粉末，用水配制成每lmL含溪黄 草水溶性总黄酮0. 5?1.Omg/mL的溶液，过0. 45Mm的微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶 液； ④ 、色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为甲醇 与冰乙酸水溶液组成的梯度洗脱液，紫外检测：波长300-400nm; ⑤ 、测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指 纹图谱。<