采用uplc-ms检测保健品中孔雀石绿残留的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种采用UPLC-MS检测保健品中孔雀石绿残留的方法
【背景技术】
[0002] 孔雀石绿作为染料，原来被用作治理鱼类或鱼卵的寄生虫、真菌或细菌感染；孔雀 石绿中的化学功能团三苯甲烷可致癌，很多国家已经禁用，但仍有渔民在防治鱼类感染真 菌时使用；2002年5月中国农业部已将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清 单》，是重要的食品安全质量项目。
[0003] 开发孔雀石绿及其代谢物的检测能够节约经费、提升效益，目前尚无超高效液相 质谱联用仪检测孔雀石绿残留方法的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种重现性好，准确率高，试剂消耗量小分析周期短的，采用 UPLC-MS检测保健品中孔雀石绿残留的方法。
[0005] 本发明的技术方案概述如下：
[0006] 采用UPLC-MS检测保健品中孔雀石绿残留的方法，包括如下步骤：
[0007] (1)提取：精密称取5. OOg保健品样品于50mL第一离心管中，加入200 μ L浓度 为lug/ml的氘代孔雀石绿-D5乙腈溶液为内标标准溶液，加入9-llmL乙腈，超声波振荡 提取 I. 5-3min，7500-8500r/min 匀浆提取 20-40s，3500-4500r/min 离心 4-6min，上清液转 移至25mL比色管中；另取50mL第二离心管加入9-llmL乙腈，洗涤匀浆刀头10s，洗涤液移 入第一离心管中，用玻棒捣碎第一离心管中的沉淀，漩涡混匀器上振荡20-40S，超声波振荡 4_6min，3500_4500r/min离心4_6min，上清液合并至25mL比色管中，用乙腈定容至25mL，摇 勾备用；
[0008] (2)净化：移取5.00mL步骤（1)获得的溶液加至已活化的中性氧化铝柱上，用浓 缩瓶接收流出液，用4mL乙腈洗涤中性氧化铝柱，收集全部流出液，40-50°C旋转蒸发至小 于ImL的残液，残液用乙腈定容至ImL,超声振荡4-6min,加入I. 0mL5mmol/L乙酸铵水溶 液，超声振荡Imin,经0. 2 μ m滤膜过滤；
[0009] (3)测定：取步骤（2)获得的滤液进行UPLC-MS测定，
[0010] 分别吸取1 μ L浓度为lug/ml的孔雀石绿乙腈标准溶液、1 μ L浓度为lug/ml的氘 代孔雀石绿-D5的乙腈标准溶液，在以下色谱条件下进行分析，获得色谱图；
[0011] UPLC 条件为：
[0012] a)色谱柱：AcquityBEHC18 柱，SOmmX 2. Imm,粒度 1. 8 μ m ;
[0013] b)流动相：A-乙腈；B-5mmol/L乙酸铵水溶液；
[0014]
【主权项】
1.采用UPLC-MS检测保健品中孔雀石绿残留的方法，其特征是包括如下步骤： (1) 提取：精密称取5. OOg保健品样品于50mL第一离心管中，加入200 μ L浓度为 lug/ml的氘代孔雀石绿-D5乙腈溶液为内标标准溶液，加入9-llmL乙腈，超声波振荡提 取 I. 5-3min，7500-8500r/min 匀浆提取 20-40s，3500-4500r/min 离心 4-6min，上清液转移 至25mL比色管中；另取50mL第二离心管加入9-llmL乙腈，洗涤匀浆刀头10s，洗涤液移 入第一离心管中，用玻棒捣碎第一离心管中的沉淀，漩涡混匀器上振荡20-40S，超声波振荡 4_6min，3500_4500r/min离心4_6min，上清液合并至25mL比色管中，用乙腈定容至25mL，摇 勾备用； (2) 净化：移取5. OOmL步骤（1)获得的溶液加至已活化的中性氧化铝柱上，用浓缩瓶 接收流出液，用4mL乙腈洗涤中性氧化铝柱，收集全部流出液，40-50°C旋转蒸发至小于ImL 的残液，残液用乙腈定容至ImL,超声振荡4-6min,加入I. 0mL5mmol/L乙酸铵水溶液，超声 振荡Imin,经0. 2 μ m滤膜过滤； (3) 测定：取步骤（2)获得的滤液进行UPLC-MS测定， 分别吸取1 μ L浓度为lug/ml的孔雀石绿乙腈标准溶液、1 μ L浓度为lug/ml的氣代孔 雀石绿-D5的乙腈标准溶液，在以下色谱条件下进行分析，获得色谱图； UPLC条件为： a) 色谱柱：AcquityBEHC18 柱，SOmmX 2. 1mm，粒度 1. 8 μ m ; b) 流动相：A-乙腈；B-5mmol/L乙酸铵水溶液； c) 柱揾;
d) 进样量：lyL。
【专利摘要】本发明公开了一种采用UPLC-MS检测保健品中孔雀石绿残留的方法，包括如下步骤：（1）提取:精密称取5.00g保健品样品，于第一离心管中，加入氘代孔雀石绿-D5乙腈溶液为内标标准溶液，加乙腈，提取，离心，上清液移至比色管中；另取第二离心管加入乙腈，洗刀头，洗涤液移入第一离心管中，捣碎沉淀，超声波振荡，离心，上清液合并至比色管中，用乙腈定容；（2）净化:移取步骤（1）获得的溶液加至已活化的中性氧化铝柱上，收集全部流出液，蒸发，残液用乙腈定容，超声振荡,加入乙酸铵水溶液，超声振荡，滤膜过滤；（3）测定：滤液进行UPLC-MS测定，本发明的方法快速、准确，降低有机试剂消耗，重现性好。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104730157
【申请号】CN201310733708
【发明人】李星芝, 王俊全, 陈绪卓
【申请人】天津优标技术检测服务有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年12月23日