-ms/ms检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品检测领域，具体涉及茶叶(茶叶基质或类似茶叶基质）中草甘膦和 草铵膦农药(除草剂）残留量的柱前衍生-UPLC-ESI+-MS/MS检测方法。
【背景技术】
[0002] 草甘膦和草铵膦是两种广谱触杀性除草剂，被广泛应用于农业、林业及园艺的栽 培中。因草甘膦、草铵膦除草剂使用量的日益增大和不合理，使其常被发现存在于环境水 样、土壤及植物中，这样长期积累会引起环境污染，并会对人类健康造成严重威胁。随着 GB2763-2012 (食品安全国家标准食品中农药最大残留限量)的发布实施，草甘膦、草铵膦被 新增为茶叶农药残留的强检项目。
[0003] 草甘膦和草铵膦结构类似，且均含有膦酸基、羟基、氨基，是极强的两性化合物，难 挥发。目前，草甘膦和草铵膦的检测方法有①液相色谱法，②柱前衍生后气相色谱法、气相 色谱-质谱法及液相色谱-质谱/质谱法。
[0004] 基于茶叶基质的复杂性，以上方法用于茶叶中草甘膦、草铵膦农药(除草剂）残留 量的测定存在以下缺陷：
[0005] ①液相色谱法：草甘膦和草铵膦的分子结构中没有共轭双键，仅存在η- π共轭， 紫外区基本无吸收，直接测定灵敏度差，不能满足农药残留量的分析测试要求。在进行茶叶 中草甘膦和草铵膦农药(除草剂）残留提取后，提取液往往会引入茶多酚、咖啡碱、果胶、糖 类等杂质，然而现有净化方式又很难将这些杂质完全去除，最终未除尽的杂质会对检测造 成干扰，导致测量结果不准确。
[0006] ②柱前衍生法：柱前衍生法的原理为：在一定条件下，将草甘膦、草铵膦目标物与 衍生试剂反应，生成检测器能够探测、响应度高、灵敏度好的待测物质。采用气相色谱法、气 相色谱-质谱法主要是因为草甘膦、草铵膦目标物通过柱前衍生后，生成易挥发、易溶于有 机溶剂等的待测物，该检测方法虽然具有较高的灵敏度，但将草甘膦和草铵膦目标物转化 为易气化物质的过程中，引入的试剂较多，操作过程相对繁琐，检测效率极低。采用液相色 谱-质谱/质谱法，在离子源ESI方面，标准SN/T1923-2007 (进出口食品中草甘膦残留量 的检测方法液相色谱-质谱/质谱法）采用ESI源的正离子模式，而文献（液相色谱-串 联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基膦酸残留，曹赵云、牟仁祥、陈铭学，色谱，2010年第 28卷第8期，743-748)研究结果为负离子模式下峰型、响应重复性更好，因文献研究结果 的不统一，给后续方法的摸索造成了一定困扰；在茶叶中草甘膦、草铵膦等提取与净化方 面，现有资料需要用不同浓度的氢氧化钾、盐酸等溶液进行PH的精密调节，操作过程十分 复杂，且采用离子交换小柱净化分析得出的加标回收率低、不稳定（SN/T1923-2007进出口 食品中草甘膦残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法)。
[0007] 此外，上述方法均只涉及单一农药残留物质的分析，至今还未出现能够同时检测 茶叶中草甘膦和草铵膦(特别是草铵膦）含量的方法，相关机构或国家单位也未发布过检测 标准，未检索到相关的研究文献。
【发明内容】
[0008] 为解决现有茶叶中草甘膦和草铵膦农药(除草剂）残留量测定中的问题，本发 明的目的是提供一种样品前处理简单快速，并可同时测定茶叶(茶叶基质或类似茶叶 基质）中草甘膦和草铵膦（除草剂）残留量的高效、准确、重复性好、灵敏度高的柱前衍 生-UPLC-ESΓ-MS/MS 检测方法。
[0009] 本发明茶叶中草甘膦和草铵膦农药残留量的柱前衍生-UPLC-ESI+-MS/MS检测方 法，茶叶按GB/T8303制得茶样包括以下步骤：
[0010] a)茶样用超纯水和二氯甲烷超声提取或回旋振荡，取上清液；
[0011] b)上清液经C18反相硅胶键合固相萃取柱（C18小柱）净化得到净化液；
[0012] c)用FMOC-Cl丙酮衍生液、硼酸钠缓冲盐溶液衍生净化液制得衍生样品(待测 液）；
[0013] d)将待测液进行UPLC-ESI+-MS/MS扫描，扫描结果用草甘膦、草铵膦各自标准校正 曲线进行校正，分别得出待测液中草甘膦、草铵膦残留量的质量体积浓度c ( μ g/mL);
[0014] e)用下述算式分别计算出茶叶中草甘膦、草铵膦残留量：
【主权项】
1. 茶叶中草甘膦和草铵膦农药残留量的柱前衍生-UPLC-ESI+-MS/MS检测方法，茶叶按 GB/T8303制得茶样，其特征在于，包括以下步骤： a) 茶样用超纯水和二氯甲烷超声提取或回旋振荡，取上清液； b) 上清液经C18反相硅胶键合固相萃取柱（C18小柱）净化得到净化液； c) 用FMOC-Cl丙酮衍生液、硼酸钠缓冲盐溶液衍生净化液制得衍生样品(待测液）； d) 将待测液进行UPLC-ESI+-MS/MS扫描，扫描结果用草甘膦、草铵膦各自标准校正曲 线进行校正，分别得出待测液中草甘膦、草铵膦残留量的质量体积浓度c ( μ g/mL); e) 用下述算式分别计算出茶叶中草甘膦、草铵膦残留量： 式中：
X-为茶叶中草甘膦或草铵膦残留量，mg/kg ; c一待测衍生液中草甘膦或草铵膦的质量体积浓度，μ g/mL ; v一前述步骤6)中超纯水的体积，mL ; d-为常数3,衍生时提取净化液的稀释倍数； m-称取待测茶样的质量，g。
2. 根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤a)中茶样、超纯水、二氯甲烷的用 料比为 lg:20mL:5mL。
3. 根据权利要求1或2所述检测方法，其特征在于，步骤a)操作过程为：茶样置于SOmL 具盖离心管中，加入超纯水，涡旋混匀静置约2min，再加入二氯甲烷，混匀，超声提取或回旋 振荡约30min，低速离心机离心，取上清液。
4. 根据权利要求1或2或3所述检测方法，其特征在于，步骤b)中净化操作为：取5mL 上清液过C18净化小柱，弃去前ImL流出液，收集后2-3mL流出液，制得净化液。
5. 根据权利要求1或2或3或4所述检测方法，其特征在于，步骤c)中硼酸钠缓冲盐 溶液浓度为30g/L-60g/L (优选50g/L)，FM0C-Cl丙酮溶液浓度为10g/L-30g/L (优选20g/ L)。
6. 根据权利要求1至5任一所述检测方法，其特征在于，步骤c)中衍生时间为2h或 以上。
7. 根据权利要求1至6任一所述检测方法，其特征在于，步骤c)操作过程：按体积 1: 1:1比例依次取净化液、硼酸钠缓冲溶液、FMOC-Cl丙酮液混合至均匀，室温静置2h或以 上，4500r/min离心5min，取上清液过0. 2 μ m有机滤膜，得到衍生样品(待测液)。
8. 根据权利要求1至7任一所述检测方法，其特征在于，步骤d)所述UPLC-ESI+-MS/ MS扫描时确定的参数为： ① 流动相：流动相A为0. 1%甲酸-乙酸铵-水，流动相B为纯乙腈、纯甲醇、纯乙腈、 0. 1%甲酸乙腈和50%甲醇乙腈等中一种； ② 超高效液相色谱（UPLC)参数确定：草甘膦和草铵膦检测的液相梯度洗脱程序为： 5%流动相A保持0. 5min，I. 5min内流动相A由5%变为95%，95%流动相A保持I. 5min， 〇· 5min 内流动相 A 由 95 % 变为 5 % ;流速 0· 3mL/min，UPLCBEH C18 柱（规格 L 7 μ m， 2. I X 50mm)，样品室温度15°C，色谱柱温度40°C，进样量1-6 μ L ; ③ 质谱调谐参数的确定：电喷雾离子源（ESI)，确定用正离子模式（ESI+)，多反应监 测（MRM)，毛细管电压2. 5kv，雾化气和脱溶剂气均为氮气，碰撞气为氩气，脱溶剂气温度 400°C，脱溶剂气流速为800L/Hr，锥孔气流速为100L/Hr，离子源温度为150°C ; ④ 质谱参数的确定：确定草甘膦衍生物的特征离子对392/88的锥孔电压25v，碰撞电 压20v，草甘膦衍生物的特征离子对392/214的锥孔电压25v，碰撞电压