测试和分析， 其中所述唾液流体样品包含病毒。所加入的唾液流体样品的体积可以是约30yL至约 100 y L。当用唾液流体样品使样品垫变得饱和时，唾液流体样品迀移到包含检测分子的金 缀合物垫上，其中每个检测分子包含与金纳米颗粒相缀合的第一抗原特异性抗体，其中所 述第一抗原特异性抗体对肠道病毒特异。唾液流体样品和检测分子混合流经侧向流测试条 的毛细管床。在这样做时，如果唾液流体样品含有肠道病毒，则在进一步迀移经过毛细管床 时，第一抗原特异性抗体可与肠道病毒的特异性病毒表面蛋白（在这种情况下为VP1蛋白） 的第一区域相结合，从而形成一个或更多个抗体-抗原复合物。如果唾液流体样品不含肠 道病毒，则第一抗原特异性抗体不与病毒表面蛋白相结合。
[0170]所述一个或更多个抗体-抗原复合物进一步向下迀移到其上包被有第二抗原特 异性抗体的测试线上，其中所述第二抗原特异性抗体也对肠道病毒特异。第二抗原特异性 抗体可与肠道病毒的特异性病毒表面蛋白（在这种情况下为VP1蛋白）的第二区域相结 合，从而形成一个或更多个抗体-抗原夹心复合物。经过一段时间后，随着越来越多的唾液 流体样品通过侧向流测试条，越来越多的抗体-抗原夹心复合物积累。随着抗体-抗原夹 心复合物的积累，金纳米颗粒的数量积累产生可见的或视觉可观察的红色线。红色线的形 成表示阳性测试，所述阳性测试证实唾液流体样品含有肠道病毒。可通过人眼在视觉上观 察到红色线。不出现红色线表示阴性测试，所述阴性测试证实唾液流体不包含肠道病毒。 [0171]MM.
[0172] 图3示出了使用本公开内容之侧向流免疫层析测定和侧向流测试条的一个实施 方案来检测不同类型之病毒的测试运行的实验结果，其中，C是对照线，T是测试线。如图3 所示，侧向流免疫层析测定和侧向流测试条对肠道病毒特异。例如，用于测试包含肠道病毒 E6、CA16、EV71和CB2之唾液流体样品的每个测试条均示出红色线的形成，从而提供了阳性 测试并证实每个唾液流体样品均包含肠道病毒。然而，用于测试包含非肠道病毒CMV和HSV 之唾液流体样本的每个测试条没有显示形成红色线，从而提供了阴性测试并证实唾液流体 样品不含肠道病毒。
[0173] 每个测试条在将样品流体唾液添加到样品垫的10分钟时间内提供结果。
[0174] 如通过实验结果所证明的，本公开内容的现场侧向流免疫层析测定和侧向流测试 条在检测肠道病毒中表现出改善的效率。
[0175] 虽然本文公开了多个方面和实施方案，但是显然，在阅读前述公开内容后，在不脱 离本发明的精神和范围的情况下，对本发明进行的多种其他修改和调整对于本领域的技术 人员而言是显而易见的，并且所有这些修改和改编均旨在落入所附权利要求书的范围之 内。本文所公开的多个方面和多个实施方案是出于举例说明的目的，并不旨在进行限制，本 发明的真正范围和精神由所附的权利要求书所表示。
【主权项】
1. 用于检测肠道病毒之存在的侧向流测试条，其中所述测试条包含： 缀合物垫，其包含多个检测分子；和 测试线，其包含多个捕获分子； 其中，所述测试条检测肠道病毒。
2. 根据权利要求1所述的侧向流测试条，其中所述测试条特异性地用于检测肠道病 毒。
3. 根据权利要求1或2所述的侧向流测试条，其中所述测试条100%特异性地用于检 测肠道病毒。
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的侧向流测试条，其中每个所述检测分子包含与 可检测颗粒相缀合的第一抗原特异性抗体。
5. 根据权利要求4所述的侧向流测试条，其中所述可检测颗粒包含金纳米颗粒。
6. 根据权利要求4或5所述的侧向流测试条，其中所述第一抗原特异性抗体对病毒表 面蛋白的第一区域特异。
7. 根据权利要求1至6中任一项所述的侧向流测试条，其中每个所述捕获分子包含第 二抗原特异性抗体。
8. 根据权利要求7所述的侧向流测试条，其中所述第二抗原特异性抗体对所述病毒表 面蛋白的第二区域特异。
9. 根据权利要求1至8中任一项所述的侧向流测试条，其中所述测试条在约30分钟或 更短时间内提供测试结果。
10. 根据权利要求1至9中任一项所述的侧向流测试条，其中所述测试条在约20分钟 或更短时间内提供测试结果。
11. 根据权利要求1至10中任一项所述的侧向流测试条，其中所述测试条在约10分钟 内提供测试结果。
12. 根据权利要求1至11中任一项所述的侧向流测试条，其中所述测试条提供准确度 约90%或更高的测试结果。
13. 根据权利要求1至12中任一项所述的侧向流测试条，其中所述测试条提供准确度 约95%或更高的测试结果。
14. 根据权利要求1至13中任一项所述的侧向流测试条，其中所述测试条提供准确度 约99%或更高的测试结果。
15. 根据权利要求1至14中任一项所述的侧向流测试条，其中所述测试条提供准确度 约100%的测试结果。
16. 根据权利要求1至15中任一项所述的侧向流测试条，其中所述肠道病毒包括一种 或更多种肠道病毒。
17. 根据权利要求1至16中任一项所述的侧向流测试条，其中所述测试条是现场侧向 流测试条。
18. 制造权利要求1至17中任一项所述的侧向流测试条的方法，其中所述方法包括： 制造缀合物垫； 制备包含检测分子的检测分子溶液；以及 将所述缀合物垫浸泡在所述检测分子溶液中。
19. 用于检测一种或更多种肠道病毒的诊断试剂盒，其中所述诊断试剂盒包含权利要 求1至17中任一项所述的侧向流测试条。
20. 根据权利要求19所述的诊断试剂盒，其还包含：用于收集生物流体样品的样品收 集装置。
21. 使用侧向流免疫层析测定来确定肠道病毒之存在的方法，所述方法包括： 提供样品； 提供包含多个检测分子和多个捕获分子的侧向流测试条； 将所述样品添加到所述侧向流测试条的样品垫上；以及 使所述样品暴露于所述多个检测分子。
22. 根据权利要求21所述的方法，其中每个所述检测分子包含与可检测颗粒相缀合的 第一抗原特异性抗体。
23. 根据权利要求22所述的方法，其中所述可检测颗粒包含金纳米颗粒。
24. 根据权利要求22所述的方法，其中所述第一抗原特异性抗体对包含病毒表面蛋白 的病毒抗原特异，其中如果所述样品包含肠道病毒，则所述第一抗原特异性抗体与所述病 毒表面蛋白相结合以形成一个或更多个第一复合物，其中如果所述样品不包含肠道病毒， 则所述第一抗原特异性抗体不与所述病毒表面蛋白相结合。
25. 根据权利要求24所述的方法，其中每个所述捕获分子包含第二抗原特异性抗体， 其中使所述一个或更多个第一复合物暴露于所述第二抗原特异性抗体，其中所述第二抗原 特异性抗体对所述病毒表面蛋白特异，其中所述第二抗原特异性抗体与所述病毒表面蛋白 相结合以形成一个或更多个第二复合物。
26. 根据权利要求25所述的方法，其中所述一个或更多个第二复合物的形成导致红色 线的形成，其中所述红色线表示肠道病毒的存在。
27. 根据权利要求21至26中任一项所述的方法，其中所述样品包含生物流体。
28. 根据权利要求21至27中任一项所述的方法，其中所述生物流体包含唾液。
29. 根据权利要求21至28中任一项所述的方法，其中所述肠道病毒包括一种或更多种 肠道病毒。
30. 根据权利要求21至29中任一项所述的方法，其中所述侧向流免疫层析测定是现场 侧向流免疫层析测定。
31. 根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中所述方法在约30分钟或更短时 间内提供测试结果。
32. 根据权利要求21至31中任一项所述的方法，其中所述方法在约20分钟或更短时 间内提供测试结果。
33. 根据权利要求21至32中任一项所述的方法，其中所述方法在约10分钟内提供测 试结果。
34. 根据权利要求21至33中任一项所述的方法，其中，所述方法提供准确度约90%或 更高的测试结果。
35. 根据权利要求21至34中任一项所述的方法，其中，所述方法提供准确度约95%或 更高的测试结果。
36. 根据权利要求21至35中任一项所述的方法，其中，所述方法提供准确度约99%或 更高的测试结果。
37.根据权利要求21至36中任一项所述的方法，其中，所述方法提供准确度约100% 的测试结果。
【专利摘要】本公开内容涉及用于直接检测肠道病毒的现场侧向流免疫层析测定(point-of-care lateral flow immunochromatographic assay)。特别地，本公开内容涉及使用对肠道病毒特异的抗体来检测手足口病(HFMD)之病原体的现场侧向流免疫层析测定。
【IPC分类】G01N30-90, G01N33-569
【公开号】CN104781671
【申请号】CN201380053413
【发明人】李佳俊, 陈恩李
【申请人】创新市场私人有限公司
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2013年9月12日
【公告号】WO2014042594A1