控线带" I "，形成一条红色带" I "表示为阴性。如 果纤维素膜上没有任何红色线带显示，则表明试纸已失效。
[0030] 以下实施例具体说明试纸的结构、检测方法及特性。
[0031] 实施例一：参见图1和图2。图中1为支撑层，用塑胶薄片条制成；2为样品垫，用 玻璃纤维棉制成；3为结合垫，吸附有胶体金纳米颗粒标记的SBA鼠源单克隆抗体的玻璃纤 维棉；4为纤维素膜，采用硝酸纤维素膜；手柄端的吸水垫5用吸水滤纸制成。将样品垫2、 结合垫3、纤维素膜4、吸水垫5从左至右依次黏贴固定在支撑层1上，彼此之间交界处纤维 互相重叠。在纤维素膜4上设有隐形检测线6,用SBA兔源多克隆抗体溶液制成；隐形质控 线7用羊抗小鼠 IgG抗体溶液在纤维素膜上喷点制成，两条线带平行排列，形成组合印迹带 "II"。
[0032] 8-1为覆盖在样品垫2和结合垫3上面的样品端白色保护膜，8-2为覆盖在吸水垫 5上面的其它颜色保护膜(如黄色)，9为样品标记线，该标记线位于样品垫2与结合垫3交 界处对应的白色保护膜上偏向样品垫2 -侧约0. 5cm处，在标记线左侧保护膜上印有箭头 及Max字样。
[0033] 待测样品的制备及检测步骤： 检测脱脂奶粉：将样品用含有〇. Olmol/L NaHSO3的水溶液以1:15的料液比溶解后，用 lmol/L的NaOH调pH至9. 0,在45°C水浴条件下搅拌lh，将混合溶液在常温下1000 Orpm离 心30min，分离上清液用于检测。
[0034] 操作方法：将SBA试纸样品端插入待测样品中，插入深度不超过标记线，约10~20 秒钟取出试纸，水平放置，IOmin后观察判定检测结果。
[0035] 结果判定：（a)阳性如果在纤维素膜上显示有两条红色印迹带" I I "，表示检测 结果为阳性，说明在待测样品中含有SBA ;(b)阴性如果在纤维素膜上显示有一条红色印 迹带" I "，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中不含SBA;(c)失效如果在纤维素膜上 没有红色带显示，则表明试纸已失效。
[0036] 实施例二：试纸结构和实施例一基本相同，不同之处在于：样品垫2用尼龙膜制 成，纤维素膜4采用纯纤维素膜。
[0037] 检测饲料：先将样品进行粉碎，过60目筛，再用石油醚对粉碎后的样品进行脱脂 处理。随后的样品制备方法、操作方法和结果判定同实施例一。
[0038] 实施例三：试纸结构和例一基本相同，不同之处在于：样品垫2用聚偏二氟乙烯 PVDF膜制成，隐形质控印迹7用兔抗小鼠 IgG抗体溶液在纤维素膜上制成，纤维素膜4采用 羧化纤维素膜。
[0039] 检测饲料：样品制备同例二；操作方法和结果判定同例一。
[0040] 实施例四：试纸结构和例一基本相同，不同之处在于：样品垫2用聚酯膜制成，纤 维素膜4采用羧化纤维素膜。检测样品、操作方法和结果判定同例一。
[0041] 实施例五：试纸结构和例一基本相同，不同之处在于：样品垫2用尼龙膜制成，隐 形质控印迹7用兔抗小鼠 IgG抗体溶液在纤维素膜上制成。检测样品、操作方法和结果判 定同例一。
[0042] 实施例六：本发明试纸的敏感性和特异性试验。
[0043] 敏感性：取十个梯度的SBA标准溶液，浓度分别为Ong/mL，50ng/mL，100ng/mL， 200ng/mL，400ng/mL，800ng/mL，1600ng/mL，3200ng/mL，6400ng/mL，12800ng/mL。各取上述 浓度的标准溶液lOOKL，用实施例一中的试纸进行检测，IOmin后观察结果，以检测线显色 结果评价试纸的敏感性。结果表明，试纸的灵敏度可以达到l〇〇ng/mL。
[0044] 特异性：用该试纸检测分别检测高浓度的glycinin、β -conglycinin、大豆 Kunitz胰蛋白酶抑制因子和大豆Bowman-Brik胰蛋白酶抑制因子，浓度为2〇Pg/mL，结果检 测线均不显色，说明该试纸与这几种大豆蛋白均没有交叉反应，具有良好的特异性。
【主权项】
1. 一种快速检测大豆凝集素SBA的胶体金免疫层析试纸，底层为支撑层，中间层为吸 附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫， 其特征在于：在纤维素膜设有用SBA兔源多克隆抗体溶液喷点的隐形检测线以及用羊抗小 鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点的隐形质控线；所述结合垫吸附有胶体金纳米颗 粒标记的SBA鼠源单克隆抗体。2. 根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征是：所述支撑层用不吸水的韧性材 料制成；样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；结合垫用玻璃纤维 棉、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成；纤维素膜用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素 膜制成；吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成。3. 根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征是：所述隐形检测线和隐形质控线为 平行排列的"II"直线式；在所述样品垫、结合垫及吸水垫上覆盖有保护层，在样品垫与结 合垫交界处对应的保护层上喷点有样品标记线。4. 根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征是：其中SBA兔源多克隆抗体的制备 方法如下： 取清洁级3月龄的新西兰大白兔，用SBA溶液进行免疫，颈部皮下分4~6点注射，首次 免疫剂量为2001^/只，用无菌PBS稀释SBA，与等量弗氏完全佐剂混合，25000r/min充分乳 化IOmin;加强免疫剂量增大至3001^/只，免疫4次，用无菌PBS稀释SBA，与等量弗氏不完 全佐剂混合，25000r/min充分乳化lOmin，共免疫4次，每次免疫间隔3周，最后一次免疫30 天后，以ELISA法测定效价，并鉴定其敏感性和特异性，心脏采血并分离收集血清； 以饱和硫酸铵盐析法纯化兔源多克隆抗体，即取1份血清加2份pH7. 2的PBS混匀，加 等体积饱和硫酸铵溶液混匀，置4°C冰箱12h，4°C、1000 Orpm离心30min，弃上清，再以适量 pH7. 2的PBS溶解沉淀，加饱和硫酸铵溶液至终浓度33%，置4°C冰箱12h，4°C、1000 Orpm离 心30min，弃上清，以适量pH7. 2的PBS溶解沉淀，置4°C冰箱内用pH7. 2的PBS透析48~72h， 中间换液6~8次，4°C、12000rpm离心15min，收集上清，得初步纯化的SBA兔源多克隆抗体； 然后采用ProteinG亲和层析柱进一步纯化，先用10倍柱体积的PBS起始缓冲液平衡层析 柱，将初步纯化的SBA兔源多克隆抗体用起始缓冲液1:1稀释后，通过0. 22ym的一次性无 菌过滤器过滤后加样，随后用10倍柱体积的起始缓冲液流洗，除去未结合的抗体，最后用2 倍柱体积的洗脱缓冲液洗脱，用盛有中和液的离心管收集，再用PBS充分透析备用；所述洗 脱缓冲液为〇?lmol/L的甘氨酸-盐酸，pH值为2. 5 ;中和液为0?lmol/L的Tris-HCl、pH 值为9.0。5. 根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征是：其中SBA鼠源单克隆抗体的制备 方法如下： 取SPF级6~8的周龄BALB/c小鼠，用SBA溶液进行免疫，剂量为501^/只，背部皮下分 4~6点注射，免疫4次，首次免疫用无菌PBS稀释SBA，然后与等量FCA混合，加强免疫用无 菌PBS稀释SBA，与等量FIA混合，25000r/min充分乳化lOmin，免疫间隔3周，确定抗体效 价符合要求后，以501^/只的剂量不加佐剂进行超强免疫，之后3~4天将免疫小鼠眶下窦采 血，分离阳性血清；脱颈致死，用体积比为75%的酒精浸泡小鼠5~10min消毒体表，无菌操 作取其脾脏，将脾脏剪碎并研磨，经120目尼龙纱