，离心，弃上清；
步骤5，在步骤4所得沉淀中加入正丁醇和三氯甲烷的混合液，搅拌后静置，弃沉淀；步骤6，在步骤5所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，所得沉淀经无水乙醇洗涤，即得红松种仁多糖；
步骤7，将步骤6所得红松种仁多糖用紫外分光光度计，490nm处测定吸光度值，以葡萄糖做对照，测定含量。
[0028]步骤I中红松种仁的用量为45g，蒸馏水的用量为28mL。
[0029]步骤I中回流提取温度为80 0C，时间为2h。
[0030]步骤2中纳滤膜孔径为150nmo
[0031]步骤2中冷冻离心的条件为-10°C、4000rpm，时间为12min。
[0032]步骤3中浓缩液的用量为8mL，正戊醇和乙酸乙酯的混合液的用量为30mL，混合液中正戊醇和乙酸乙酯的体积比为3:7。
[0033]步骤4中上清和95%乙醇水溶液的体积比为6:11。
[0034]步骤5中沉淀用量为5g，正丁醇和三氯甲烷的混合液的用量为45mL，混合液中正丁醇和三氯甲烷的体积比为5:9。
[0035]步骤6中上清和95%乙醇水溶液的体积比为7:22。
[0036]经上述检测方法检测，红松种仁多糖含量为65.4%。
[0037]实施例3
红松种仁多糖的检测方法，包括以下步骤:
步骤I，取干燥的红松种仁，加入蒸馏水，回流提取；
步骤2，将步骤I所得提取液冷冻离心，所得离心上清纳滤浓缩；
步骤3，在步骤2所得浓缩液加入正戊醇和乙酸乙酯的混合液，搅拌后静置，弃沉淀； 步骤4，在步骤3所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，弃上清；
步骤5，在步骤4所得沉淀中加入正丁醇和三氯甲烷的混合液，搅拌后静置，弃沉淀；步骤6，在步骤5所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，所得沉淀经无水乙醇洗涤，即得红松种仁多糖；
步骤7，将步骤6所得红松种仁多糖用紫外分光光度计，490nm处测定吸光度值，以葡萄糖做对照，测定含量。
[0038]步骤I中红松种仁的用量为60g，蒸馏水的用量为50mL。
[0039]步骤I中回流提取温度为90 0C，时间为3h。
[0040]步骤2中纳滤膜孔径为200nm。
[0041]步骤2中冷冻离心的条件为-1CTC、5000rpm，时间为15min。
[0042]步骤3中浓缩液的用量为10mL，正戊醇和乙酸乙酯的混合液的用量为45mL，混合液中正戊醇和乙酸乙酯的体积比为5:9。
[0043]步骤4中上清和95%乙醇水溶液的体积比为9:14。
[0044]步骤5中沉淀用量为20g，正丁醇和三氯甲烷的混合液的用量为50mL，混合液中正丁醇和三氯甲烷的体积比为6:12。
[0045]步骤6中上清和95%乙醇水溶液的体积比为12:25。
[0046]经上述检测方法检测，红松种仁多糖含量为67.8%。
[0047]本发明提供的检测方法简单，所需样品量少，为进一步研宄红松种仁多糖的药效作用提供了一种实用有效的提取分析方法。
【主权项】
1.红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤I，取干燥的红松种仁，加入蒸馏水，回流提取； 步骤2，将步骤I所得提取液冷冻离心，所得离心上清纳滤浓缩； 步骤3，在步骤2所得浓缩液加入正戊醇和乙酸乙酯的混合液，搅拌后静置，弃沉淀； 步骤4，在步骤3所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，弃上清； 步骤5，在步骤4所得沉淀中加入正丁醇和三氯甲烷的混合液，搅拌后静置，弃沉淀； 步骤6，在步骤5所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，所得沉淀经无水乙醇洗涤，即得红松种仁多糖； 步骤7，将步骤6所得红松种仁多糖用紫外分光光度计，490nm处测定吸光度值，以葡萄糖做对照，测定含量。2.根据权利要求1所述的红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:步骤I中红松种仁的用量为20?60g，蒸馏水的用量为10?50mL。3.根据权利要求1所述的红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:步骤I中回流提取温度为70?90°C，时间为I?3h。4.根据权利要求1所述的红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:步骤2中纳滤膜孔径为100?200nm。5.根据权利要求1所述的红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:步骤2中冷冻离心的条件为-1O0C >3000?5000rpm，时间为10?15min。6.根据权利要求1所述的红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:步骤3中浓缩液的用量为5?10mL，正戊醇和乙酸乙酯的混合液的用量为25?45 mL，混合液中正戊醇和乙酸乙酯的体积比为I?5:3?9。7.根据权利要求1所述的红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:步骤4中上清和95%乙醇水溶液的体积比为2?9:7?14。8.根据权利要求1所述的红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:步骤5中沉淀用量为5?20g，正丁醇和三氯甲烷的混合液的用量为30?50mL，混合液中正丁醇和三氯甲烷的体积比为I?6:4?12。9.根据权利要求1所述的红松种仁多糖的检测方法，其特征在于:步骤6中上清和95%乙醇水溶液的体积比为3?12:5?25。
【专利摘要】本发明公开了一种红松种仁多糖的检测方法，先取干燥的红松种仁，加入蒸馏水，回流提取，提取液冷冻离心，离心上清纳滤浓缩；在浓缩液加入正戊醇和乙酸乙酯的混合液，搅拌后静置，弃沉淀；在所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，弃上清；在所得沉淀中加入正丁醇和三氯甲烷的混合液，搅拌后静置，弃沉淀；在所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，所得沉淀经无水乙醇洗涤，即得红松种仁多糖；将所得红松种仁多糖用紫外分光光度计，490nm处测定吸光度值，以葡萄糖做对照，测定含量。该检测方法简单，所需样品量少，为进一步研究红松种仁多糖的药效作用提供了一种实用有效的提取分析方法。
【IPC分类】G01N21/33
【公开号】CN104949933
【申请号】CN201510365851
【发明人】熊开胜, 张海防, 谢建庭
【申请人】苏州东辰林达检测技术有限公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年6月29日