M、0. 3yM、0. 5yM、0. 7yM、0. 9yM、l. 1yM、 1. 3yM、1. 5yM，9份混合溶液的最终体积均为2mL，室温下放置5分钟后，分别向上述9 份混合溶液中加入10UL浓度为10_4M的表面活性剂CTAB，此时各混合溶液中CTAB的浓 度为0. 5yM，观察溶液颜色变化并测定吸光度比值A65(lnm/A52(lmi，目视观察到溶液颜色随着 硫氰酸盐浓度的提高，溶液的颜色逐渐由蓝色变为-紫红色-红色，金纳米逐渐呈现分散状 态。目视观察的检测限为〇. 1UM，当测定吸光度比值A65(lmi/A52(lnm时，随着硫氰酸盐浓度的 增大而吸光度比值A65(lnm/A52(lnm逐渐减小，吸光度比值A65(lnm/A52(lnm与硫氰酸根浓度在0-1. 5 yM范围内呈线性关系，检测限为6.5nM。
[0015] 实施例3: 液态奶的预处理：将2g液态奶加入到1. 5mL质量分数为10%的三氯乙酸溶液和5. 0mL乙腈的混合溶液中以除去牛奶样品中的蛋白质和脂肪，然后将样品超声震荡15分钟后 转移到离心管中，12000rpmmirT1转速下离心15min，取上清液，并将上清液通过0. 22ym 膜过滤器移去脂肪，取滤液，将滤液的pH调至6. 8,12000rpmmirT1转速下离心后，取上清 液再次通过0.22ym膜过滤器过滤，然后将滤液用二次超纯水定容至10mL，即得样品溶 液； 婴儿配方奶粉的预处理：首先取2.0mL水溶解0.6g样品，再加入到1.5mL质量分数 为10%的三氯乙酸溶液和5.OmL乙腈的混合溶液中，超声震荡15min后将混合溶液移至离 心管中，12000rpmmirT1转速下离心15min，取上清液通过0. 22ym膜过滤器移去脂肪，取 滤液，将滤液的pH调制6. 8,12000rpmmirT1转速下离心后，取上清液再次通过0. 22ym 膜过滤器过滤，然后将滤液用二次超纯水定容至10mL，即得样品溶液； 实施例4 : 取100yL样品溶液加入到400yL浓度为15nM的金纳米溶液中，用PBS缓冲溶液稀 释至2mL，向混合体系中加入10yL浓度为10_4M的表面活性剂CTAB，观察溶液颜色变化 以及测定吸光度比值A65(lnm/A52(lnm，计算样品回收率，结果见表1。
[0016]
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细说明，不能认定本发 明的具体实施只局限于这些说明。对于本领域的普通技术人员来说，可以根据本发明的技 术方案和发明构思，作出相应改变和替代，而且性能或用途相同，都应当视为本发明的保护 范围。
【主权项】
1. 一种基于金纳米比色法实现硫氰酸根离子可视化检测的方法，其特征在于：主要包 括以下几个步骤： (1) 金纳米粒子的制备； (2) 硫氰酸根离子的检测； (3) 样品的预处理； (4) 样品的检测。2. -种基于金纳米比色法实现硫氰酸根离子可视化检测的方法，其特征在于：主要包 括以下几个步骤： (1) 金纳米粒子的制备 本发明中所使用的玻璃器皿均经过王水浸泡，二次超纯水清洗，100 ° C下烘干备用； 向250mL三口烧瓶中加入I mM氯金酸水溶液100 mL，充分搅拌下加热至沸腾，匀速搅拌下 快速加入5 mL 38.8 mM柠檬酸三钠水溶液，金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为酒红 色，继续冷凝回流15 min，冷却后，4°C下保存，即制得金纳米溶液，浓度为15 nM，纳米金粒 径为13 nm ; (2) 硫氰酸根离子的检测 取9份400 yl浓度为15 nM的金纳米溶液，分别向金纳米溶液中加入不同浓度的硫氰 酸根离子，加缓冲溶液PBS (0. 01M，Na2HPO4-NaH2PO4, pH=7. 0)稀释，使9份混合溶液中硫氰 酸根离子的最终浓度分别为 〇 uM、0.1 yM、0. 3 yM、0. 5 yM、0. 7 yM、0. 9yM、l. I yM、 I. 3 y M、I. 5 y M，9份混合溶液的最终体积均为2 mL，室温下放置5分钟后，分别向上述9 份混合溶液中加入10 U L浓度为KT4M的表面活性剂CTAB，此时各混合溶液中CTAB的浓 度为0. 5 y M，观察溶液颜色变化并测定吸光度比值A65cinmA52cimi，目视观察到溶液颜色随着 硫氰酸盐浓度的提高，溶液的颜色逐渐由蓝色变为-紫红色-红色，金纳米逐渐呈现分散状 态；目视观察的检测限为〇. I UM，当测定吸光度比值A65tlmiA52tlmi时，随着硫氰酸盐浓度的 增大而吸光度比值A 65cimiA52cinm逐渐减小，吸光度比值A 65(lnm/A52(lnm与硫氰酸根浓度在0-1. 5 y M范围内呈线性关系，检测限为6.5 nM; (3) 样品的预处理 液态奶的预处理：将2 g液态奶加入到I. 5 mL质量分数为10%的三氯乙酸溶液和5. 0 mL乙腈的混合溶液中以除去牛奶样品中的蛋白质和脂肪，然后将样品超声震荡15分钟后 转移到离心管中，12000 rpm HiirT1转速下离心15 min，取上清液，并将上清液通过0.22 ym 膜过滤器移去脂肪，取滤液，将滤液的pH调至6. 8,12000 rpm HiirT1转速下离心后，取上清 液再次通过0.22 ym膜过滤器过滤，然后将滤液用二次超纯水定容至10 mL，即得样品溶 液； 婴儿配方奶粉的预处理：首先取2.0 mL水溶解0.6 g样品，再加入到1.5 mL质量分数 为10%的三氯乙酸溶液和5. OmL乙腈的混合溶液中，超声震荡15 min后将混合溶液移至离 心管中，12000 rpm rnirT1转速下离心15 min，取上清液通过0. 22 ym膜过滤器移去脂肪， 取滤液，将滤液的pH调制6. 8,12000 rpm HiirT1转速下离心后，取上清液再次通过0. 22 y m 膜过滤器过滤，然后将滤液用二次超纯水定容至10 mL，即得样品溶液； (4) 样品的检测 取100 y L样品溶液加入到400 y L浓度为15nM的金纳米溶液中，用PBS缓冲溶液稀 释至2 mL，向混合体系中加入10 y L浓度为KT4M的表面活性剂CTAB，观察溶液颜色变化 并测定吸光度比值A65toZA52tlnm，计算样品回收率。
【专利摘要】本发明公开了一种简单快捷的基于金纳米可视化检测乳制品中硫氰酸根离子的比色方法，属于分析化学技术领域。硫氰酸根离子能阻止表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）所导致的金纳米粒子的聚集，从而表现出溶液颜色和紫外吸收光谱特征性变化。本发明提供的检测方法所用的检测总时间低于30 min，可简单、快速、灵敏的检测乳制品中的硫氰酸根离子，并且有很高的灵敏度，检测限为6.5 nM，为以后的研究、生产、监管等提供了方便。
【IPC分类】G01N21/33, G01N21/78
【公开号】CN104990915
【申请号】CN201510351777
【发明人】吴芳英, 宋娟, 万益群
【申请人】南昌大学
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月24日