原标记抗体荧光探针上未反应的羧基，同时用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针处理结合垫并37°C烘干；
[0034]3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条，在样品垫上滴加500ng/mL标准癌胚抗原CEA。
[0035]如图3-b所示，在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮；如图4-b所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条T线荧光强度为24211，C线荧光强度27703，T/C值为0.87。
[0036]实施案例3:
[0037]I)将质量分数配比为1:4000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点；
[0038]2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:50)，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体2.5h，离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针，然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基，同时用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针处理结合垫并37°C烘干；
[0039]3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条，在样品垫上滴加250ng/mL标准癌胚抗原CEA。
[0040]如图3-c所示，在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮；如图4-c所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条T线荧光强度为21763，C线荧光强度36234，T/C值为0.60。
[0041]实施案例4:
[0042]I)将质量分数配比为1:6000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点；
[0043]2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1: 10)，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体2.5h，离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针，然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基，同时用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针处理结合垫并37°C烘干；
[0044]3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条，在样品垫上滴加125ng/mL标准癌胚抗原CEA。
[0045]如图3-d所示，在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮；如图4-d所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条T线荧光强度为17976，C线荧光强度39930，T/C值为0.45。
[0046]实施案例5:
[0047]I)将质量分数配比为1:8000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点；
[0048]2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1: 10)，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体2.5h，离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针，然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基，同时用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针处理结合垫并37°C烘干；
[0049]3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条，在样品垫上滴加62.5ng/mL标准癌胚抗原CEA。
[0050]如图3-e所示，在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮；如图4_e所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条的T线荧光强度为13944，C线荧光强度35023，T/C值为0.40。
[0051]实施案例6:
[0052]I)将质量分数配比为1:10000的量子点QDs和EDC (1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点；
[0053]2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1: 10)，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体3h，离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针，然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基，同时用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针处理结合垫并37°C烘干；
[0054]3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条，在样品垫上滴加31.25ng/mL标准癌胚抗原CEA。
[0055]如图3-f所示，在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮；如图4-f所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条的T线荧光强度为9439，C线荧光强度32705，T/C值为0.29。
[0056]实施案例7:
[0057]I)将质量分数配比为1:10000的量子点QDs和EDC (1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点；
[0058]2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:50)，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体3h，离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针，然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基，同时用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针处理结合垫并37°C烘干；
[0059]3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条，在样品垫上滴加胎牛血清FBS(0ng/mL标准癌胚抗原CEA)。
[0060]如图3-g所示，在紫外灯下试纸条C线亮而T线不亮；如图4-g所示，量子点免疫荧光检测仪检测得出，试纸条T线荧光强度为7441，C线荧光强度34586，T/C值为0.22。
【主权项】
1.一种基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法；其特征是步骤如下: 1)将量子点QDs、EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)和PBS缓冲液加入反应器，在旋转混合架上活化量子点的羧基，离心得到免疫量子点； 2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合，加入PBS缓冲液，在旋转混合架上偶联抗体2?3h，离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针，然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基，同时用处理液处理样品垫和结合垫并37°C烘干，然后用上述荧光探针处理结合垫并37°C烘干； 3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起，得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条。2.如权利要求1所述的方法，其特征是将量子点:EDC质量份数配比为1:4000?10000ο3.如权利要求1所述的方法，其特征是量子点:癌胚抗原抗体质量分数比=1:10?50 ο4.如权利要求1所述的方法，其特征是选用PBS缓冲液用以保持癌胚抗原抗体的活性。5.如权利要求1所述的方法，其特征是处理液是蔗糖、牛血清白蛋白BSA、聚乙二醇PEG、聚氧乙烯山梨醇单月桂酸酯Tween-20的混合溶液。6.如权利要求1所述的方法，其特征是根据试纸条夹心结构捕获的量子点荧光强度和癌胚抗原浓度之间的关系，定性定量检测癌胚抗原CEA。7.如权利要求6所述的方法，其特征是在样品垫上滴加不同浓度的标准癌胚抗原CEA，不同浓度优选O?1000ng/mL，建立标准曲线。
【专利摘要】本发明涉及一种基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法；通过EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)活化作用，量子点的羧基和癌胚抗原抗体的氨基生成牢固的化学键，探针、癌胚抗原(carcino embryonic antigen CEA)和包埋在试纸条的另一种癌胚抗原抗体通过抗体抗原之间的作用，形成一种类似夹心的结构，定性定量的检测CEA癌胚抗原肿瘤标志物。本发明的特点在于：整个制备过程简单，适合于产业化生产；根据量子点的荧光特性，可定性定量检测癌胚抗原，且特异性良好；整个检测过程，成本低廉且操作非常简便，适合高危人群的社区肿瘤筛选，建立了一种肿瘤检测的新方法。
【IPC分类】G01N33/52, G01N33/558, G01N33/574, G01N33/533
【公开号】CN104991063
【申请号】CN201510359722
【发明人】常津, 武玉东, 宫晓群, 张健, 姚颖异
【申请人】天津大学
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月25日