sCD14或它的片段或衍生物用于风险分级、诊断和预后的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于评估关于心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的诊断或预后的方 法的领域，和涉及用于评价受试者的心血管或动脉粥样硬化风险的方法。
[0002] 更具体地，本发明涉及用于诊断心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的新方法。提 供了 s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14的片段或衍生物作为用于诊断心血管 疾病或病症或动脉粥样硬化的新标志物。本发明进一步包含一种用于评价受试者发展将来 心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的风险的方法。此外，提供了用于在表现出心血管疾病 或病症或动脉粥样硬化征象的受试者中诊断急性心脏事件的方法。优选地，根据本发明的 方法允许鉴别是否要将受试者收入医院或重症监护病房或受试者是否可以出院。本发明的 方法可以进一步用于区分各种心血管疾病或病症。本发明也包括用于实现前述方法的装置 和套件。
【背景技术】
[0003] 当受试者由于任何种类的不适而送至急诊科时，为了鉴别引起他的不适的原因和 避免对受试者的健康的后果，受试者的病理学状态的快速诊断是强制性的。一个高度相关 的课题是决定患者是否收入医院一一以便将来的、耗时的分析和/或重症监护治疗一一或 是否可以允许患者回家。
[0004] 例如，在急性心血管事件的情况下，特定治疗方案的决策经常必须在短时间段内 做出。心血管疾病，特别是心脏疾病，是西半球的发病率和死亡率的主要原因。心血管疾病 可以在长时间段内保持无症状。但是，一旦发生急性心血管事件，诸如心肌梗塞（MI)或急 性代偿失调性心力衰竭（ADHF)，它们可能具有严重的后果。因此，存在快速诊断患者的指 南，所述患者被送给医师，通常在急诊室中，且被怀疑遭受急性冠状动脉综合征（ACS)(即 不稳定型心绞痛（UAP)或心肌梗塞（MI))或急性代偿失调性心力衰竭（ADHF，参见J. Am. Coll.Cardiol. 2000; 36，第959-969页）。在被怀疑具有急性MI的受试者中，记录心电 图，并确定肌钙蛋白T或肌钙蛋白I (cTn)的水平。此外，分析被怀疑的受试者是否显示明 显的综合征如胸痛、呼吸困难、心悸、恶心、呕吐和本领域技术人员已知的其它综合征。如 果受试者在2/3的标准中是阳性的，那么将他或她收入医院以备将来检查。在被怀疑具有 ADHF的受试者中，在被评价呼吸困难的、具有与心力衰竭相符的征象或症状的患者中推荐 血浆 BNP 或 NT-proBNP 浓度的确定，参见 J Card Fail 2010;16(6):第 el34-155 页。
[0005] 但是，被送至急诊室的受试者的组成是不均匀的，包括大约50%的遭受心血管疾 病或病症（包括急性的、即缺血性病症和非缺血性病症两者）的受试者、10%的遭受肺并发 症的受试者和40%的遭受其它并发症(例如肿瘤)且可能额外遭受心血管疾病或病症的受试 者。常规诊断技术，特别是对于紧急情形而言，经常不允许覆盖这些不同病理学状态的可靠 诊断和/或风险评估。其它缺点是进行复杂诊断技术和测定的足够人员的缺乏和急诊室的 变化占用。
[0006] 目前，不存在覆盖医师在急诊科中可能遇到的各种心血管疾病和病症的标准化诊 断操作。因而，在急诊科中不可以以足够的准确度执行心血管疾病或病症的快速且准确的 诊断，所述诊断允许决定受试者是否可以出院（排除）或必须收入医院（收进）以备将来 检查或重症监护治疗（其可以是挽救生命的）。作为其后果，许多患者被错误地收进或错误 地放行。
[0007] 在某些情况下，所谓的分子标志物允许建立受试者的病理学状态的快速且足够准 确的诊断。一个突出的例子是CTn (用于诊断急性MI，如前所述）或利钠肽、尤其是BNP和 NT-proBNP (用于各种非缺血性心脏疾病，例如心力衰竭)。cTn的血液水平是心肌坏死的灵 敏且特异性的标志物，其常规地用于诊断急性MI。关于cTn的确定，作为缺血性标志物的一 个例子，参考 Katus 等人（Mol Cell Cardiol 1989; 21:1349-53)、Hamm 等人（NEJM 1992; 327: 146-50)、Ohmann 等人（NEJM 1996; 335: 1333-34)、Christenson 等人（ClinChem 1998; 44: 494-501)和EP-A-O 394 819。尽管已经介绍了新一代的高灵敏度cTn试验，仍 然缺乏心肌梗塞诊断的诊断灵敏度和特异性，特别是在被送至急诊室的有症状患者中，参 见 Apple 和 Christenson (Clin Chem 2012; 58: 54-61);和 Thygesen 等人（JACC 2012， 60(16):1581-98)。
[0008] -项研究宣称，在老年成年人中存在s⑶14水平和心血管风险之间的关 耳关(Reiner AP 等人·： Soluble CD14: Genomewide Association Analysis and Relationship to Cardiovascular Risk and Mortality in Older Adults. Arterioscler Thromb Vase Biol; 2012年11月15日在线公开）。但是，在中年人中的另一项研究指示， 在s⑶14和具有冠心病的受试者之间不存在关联（Morange PE等人.：TLR4/Asp299Gly， CD14/C-260T, plasma levels of the soluble receptor CD14 and the risk of coronary heart disease: The PRIME Study. Eur J Hum Genet. 2004; 12:1041-1049)。
[0009] 因此，需要诊断或预后措施，其允许进行评估和/或个别风险分级，特别是对于在 症状发作以后及早送至急诊科的受试者。所述措施应当也允许在以前没有诊断出心血管疾 病或病症、特别是急性心血管疾病的受试者中进行该评估/风险分级。
[0010] 作为本发明基础的技术问题可以视作符合前述要求的装置和方法的提供。
[0011] 在权利要求书和下文中表征的实施方案解决了该技术问题。
【发明内容】
[0012] 本发明提供了以下方面、主题和优选的实施方案，它们分别单独地或组合地使用， 进一步为解决本发明的目的做出贡献： 1. 一种用于评价受试者的发展心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的风险的方法，所 述方法包括下述步骤： a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，评价受试者的发展心血管疾病或病症的个体风险。
[0013] 2. -种用于诊断受试者的心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的方法，所述方法 包括 a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，确定心血管疾病或病症的存在或不存在。
[0014] 3. -种用于在具有心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的受试者中评价死亡风险 的方法，所述方法包括 a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，确定受试者的死亡风险。
[0015] 4. -种用于评价具有心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的受试者是否将受益于 使用选自抗生素、益生菌和乳果糖的物质的治疗的方法，所述方法包括下述步骤： a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，评价所述可能性。
[0016] 5. -种用于确定受试者是否由于心血管疾病或病症或动脉粥样硬化而需要住院 的方法，所述方法包括 a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，确定所述受试者是否需要住院。
[0017] 6.根据项目1-5中的任一项的方法，所述方法另外包括下述步骤 a'）在相同个体的相同或不同样品中确定至少一种额外标志物， b'）将在步骤a'）中确定的至少一种额外标志物的量与所述额外标志物的至少一个 参比量对比，和 c'）通过组合关于所述化合物在步骤b)中得到的结果和关于所述至少一种额外标志 物在步骤b'）中得到的结果，执行各个步骤c)。
[0018] 7.根据项目6的方法，其中步骤c'）包括，通过组合在步骤b)中分别关于所述化 合物和关于所述至少一种额外标志物得到的结果，评价受试者的发展心血管疾病或病症或 动脉粥样硬化的个体风险。
[0019] 8.根据项目6的方法，其中步骤c'）包括，通过组合在步骤b)中分别关于所述化 合物和关于所述至少一种额外标志物得到的结果，确定心血管疾病或病症或动脉粥样硬化 的存在或不存在。
[0020] 9.根据项目6的方法，其中步骤c'）包括，通过组合在步骤b)中分别关于所述化 合物和关于所述至少一种额外标志物得到的结果，确定受试者的死亡风险。
[0021] 10.根据项目6的方法，其中步骤c'）包括，通过组合在步骤b)中分别关于所述 化合物和关于所述至少一种额外标志物得到的结果，确定受试者是否将受益于使用选自抗 生素、益生菌和乳果糖的物质的治疗。
[0022] 11.根据项目6的方法，其中步骤c'）包括，通过组合在步骤b)中分别关于所述 化合物和关于所述至少一种额外标志物得到的结果，确定受试者是否需要住院。
[0023] 12.根据项目4或6的方法，其中所述抗生素不被肠再吸收。
[0024] 13.根据项目4、6或12中的任一项的方法，其中所述抗生素是氨基糖苷。
[0025] 14.根据项目4、6、12或13中的任一项的方法，其中所述抗生素是新霉素或巴龙 霉素。
[0026] 15.根据项目4、6或12-14中的任一项的方法，其中所述受试者具有心血管疾病 或病症，优选急性心力衰竭。
[0027] 16.根据项目6的方法，其中步骤c'）包括，通过组合在步骤b)中分别关于所述 化合物和关于所述至少一种额外标志物得到的结果，确定受试者是否需要住院。
[0028] 17.根据项目6-16中的任一项的方法，其中所述至少一种额外标志物选自：神经 激素标志物、水平衡调节剂、缺血性心脏标志物、细胞因子、炎症标志物和细胞粘附分子。
[0029] 18.根据项目6-17中的任一项的方法，优选地其中所述至少一种额外标志物选 自：原降钙素、C-反应蛋白、肽素和转化生长因子-β细胞因子超家族的标志物；和/或神经 激素标志物、缺血性心脏标志物；炎症标志物和任选的白介素-1受体家族的标志物。
[0030] 19.根据项目1-18中的任一项的方法，其中所述受试者显示选自以下的一种或 多种心血管疾病或病症的症状：急性冠状动脉综合征、急性心力衰竭、慢性心力衰竭、冠状 动脉疾病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风、出血性中风和短暂脑缺血发作。
[0031] 20.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断慢性心力衰竭，优 选地其中所述化合物（优选sCD14-ST)的量是115 pg/ml或更高，更优选150 pg/ml或更 高，甚至更优选260 pg/ml或更高。
[0032] 21.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断慢性心力衰竭，优 选地其中所述化合物（优选sCD14-ST)的量是115 pg/ml至4000 pg/ml之间，更优选150 pg/ml至3000 pg/ml之间，甚至更优选260 pg/ml至2000 pg/ml之间。
[0033] 22.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断不稳定型心绞痛， 优选地其中所述化合物（优选sCD14-ST)的量是214 pg/ml或更高，更优选216 pg/ml或 更高，甚至更优选222 pg/ml或更高。
[0034] 23.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断不稳定型心绞痛， 优选地其中所述化合物（优选s⑶14-ST)的量是214 pg/ml至4000 pg/ml之间，更优选 216 pg/ml 至 3000 pg/ml 之间，甚至更优选 222 pg/ml 至 2000 pg/ml 之间。
[0035] 24.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断急性心力衰竭，优 选地其中所述化合物（优选sCD14-ST)的量是295 pg/ml或更高，更优选354 pg/ml或更 高，甚至更优选455 pg/ml或更高。
[0036] 25.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断急性心力衰竭，优 选地其中所述化合物（优选s⑶14-ST)的量是295 pg/ml至4000 pg/ml之间，更优选354 pg/ml至3000 pg/ml之间，甚至更优选455 pg/ml至2000 pg/ml之间。
[0037] 26.根据项目1_19、24或25中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断急性代偿 失调性心力衰竭（ADHF)。
[0038] 27.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断心肌梗塞，优选地 其中sCD14-ST的量是260 pg/ml或更高，更优选276 pg/ml或更高，甚至更优选295 pg/ml 或更高。
[0039] 28.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断心肌梗塞，优选地 其中所述化合物（优选sCD14-ST)的量是260 pg/ml至4000 pg/ml之间，更优选276 pg/ ml至3000 pg/ml之间，甚至更优选295 pg/ml至2000 pg/ml之间。
[0040] 29.根据项目1-19、27或28中的任一项的方法，其中所述方法用于诊断非-ST升 高的心肌梗塞。
[0041] 30.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于区分慢性心力衰竭和 急性心力衰竭，其中优选地在得自具有急性心力衰竭的受试者的样品中的所述化合物（优 选sCD14-ST)的量是340 pg/ml或更高，更优选354 pg/ml或更高，甚至更优选455 pg/ml 或更高。
[0042] 31.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于鉴别具有高死亡风 险的、具有心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的受试者，优选地其中所述化合物（优选 sCD14-ST)的量是500 pg/ml或更高，更优选800 pg/ml或更高，甚至更优选1300 pg/ml。
[0043] 32.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于鉴别具有高死亡风 险的、具有心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的受试者，优选地其中所述化合物（优选 sO)14-ST)的量是 500 pg/ml 至 4000 pg/ml 之间，更优选 800 pg/ml 至 3000 pg/ml 之间， 甚至更优选1300 pg/ml至2000 pg/ml之间。
[0044] 33.根据项目1_19、31或32中的任一项的方法，其中所述方法用于鉴别具有高死 亡风险的、具有急性心力衰竭的受试者亚组。
[0045] 34.根据项目1-33中的任一项的方法，其中所述方法用于评估具有心血管疾病 或病症或动脉粥样硬化的受试者的预后。
[0046] 35.根据项目1-19中的任一项的方法，其中所述方法用于评价不具有心血管疾 病或病症或动脉粥样硬化的临床征象的受试者发展心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的 风险。
[0047] 36.根据项目35的方法，其中如果在得自受试者的样品中确定的所述化合物（优 选s⑶14-ST)的量优选地是225 pg/ml或更高，更优选240 pg/ml或更高，甚至更优选260 pg/ml或更高，那么所述受试者具有发展心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的高风险。
[0048] 37.根据项目1-36中的任一项的方法，其中在健康受试者中的所述化合物（优选 s⑶14-ST)的参比量优选地是在223 pg/ml至262 pg/ml之间。
[0049] 38.根据项目1-37中的任一项的方法，其中所述样品是血液样品。
[0050] 39.根据项目38的方法，其中所述样品是已经从受试者分离的样品。
[0051] 40.根据项目1-39中的任一项的方法，所述方法在体外进行。
[0052] 41.根据项目1-40中的任一项的方法，其中确定所述化合物的量和/或所述至少 一种额外标志物的量包括以下步骤：（i)使所述肽与特异性配体接触，（ii)(任选地）除 去未结合的配体，（iii)测量结合的配体的量。
[0053] 42.根据项目1-41中的任一项的方法，其中通过免疫测定来确定所述化合物的 量和/或所述至少一种额外标志物的量。
[0054] 43.根据项目1-42中的任一项的方法，其中所述化合物是s⑶14-ST，且使用对 S⑶14-ST具有特异性的抗体确定S⑶14-ST的量。
[0055] 44.根据项目43的方法，其中所述对s⑶14-ST具有特异性的抗体不结合s⑶14。
[0056] 45.根据项目1-44中的任一项的方法，其中所述在步骤b)或b'）中的对比分别 是计算机辅助的。
[0057] 46.根据项目45的方法，其中通过计算机程序将所述化合物、s⑶14-ST和/或所 述至少一种额外标志物的确定量的值与各个参比量的对应值进行对比。
[0058] 47.根据项目46的方法，其中所述计算机程序评价对比的结果并以合适的输出 形式提供评价的结果。
[0059] 48.选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14的片段或衍生物的化合 物作为心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的标志物的用途。
[0060] 49.根据项目48的用途，其中所述心血管疾病或病症选自：急性冠状动脉综合 征、急性心力衰竭、慢性心力衰竭、冠状动脉疾病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风、出血性中 风、短暂脑缺血发作和肺栓塞。
[0061] 50.根据项目48或49的用途，其中所述标志物用在体//测定中。
[0062] 51.用于治疗受试者的选自抗生素、益生菌和乳果糖的物质，所述受试者具有心 血管疾病或病症或动脉粥样硬化且具有增加的选自sCD14、sCD14-ST或除了 SCD14-ST以外 的sCD14的片段或衍生物的化合物的血浆水平。
[0063] 52.用于根据项目51的用途的物质，其中所述抗生素不被肠再吸收。
[0064] 53.用于根据项目51或52的用途的物质，其中所述抗生素是氨基糖苷。
[0065] 54.用于根据项目51-53中的任一项的用途的物质，其中所述抗生素是新霉素或 巴龙霉素。
[0066] 55.用于根据项目51-54中的任一项的用途的物质，所述物质不是用于治疗脓毒 症或与吞噬细胞功能障碍有关的疾病诸如尿毒症、血清调理素活性下降、补体缺乏、先天性 吞噬功能障碍、慢性肉芽肿病、髓过氧化物酶