MI的患者。
[0223] 健康对照和具有NSTEMI的患者之间的差异是非常显著的（p〈0. 0001)(表6)。平 行地确定cTnl。尽管如图5所示两种标志物在健康对照组和具有NSTEMI的患者之间非常 显著地不同，得自ROC分析的AUC曲线的对比证实，s⑶14-ST显示出较高区分能力（图6)。
[0224] 通过包括ROC衍生出的SCD14-ST阈值和PATHFAST cTnl的99%截止值（0. 02 ng/ m)，可以证实在急诊室中呈现胸痛的患者中的NSTEMI诊断的优越诊断准确度。结果显示在 图7中，该图证实了在290 pg/ml截止值时SCD14-ST的100%灵敏度，而根据国际指南使用 生产商推荐的健康参比群体的99%浓度的截止值，PATHFAST cTnl显示74. 1%的灵敏度。如 果最初测量的cTn值低于截止值且检测到在99%截止值以上的至少1个值的升高和/或下 降，该指南推荐在入院以后3-6小时确定cTn。
[0225] 表6 :健康对照组和具有NSTEMI的患者的s⑶14-ST值
[0226] 实施例6 急件心力衰竭的诊断 使用PATHFAST测定，在得自60位被收入急诊室的具有急性呼吸困难的患者的血浆样 品中确定s⑶14-ST浓度，通过超过300 pg/ml阈值浓度的升高的NT-proBNP值，评估所述 患者中的急性心力衰竭。所有患者表现出彡361 pg/ml的NT-proBNP血浆水平，从而证实 急性心力衰竭的诊断（表7)。
[0227] 表7 :在具有急性心力衰竭的患者（n=60)中的SCD14-ST和NT-proBNP值（pg/ml)
[0228] ROC分析的结果表明，就区分健康对照组和具有ADHF的患者而言，在311 pg/ml的 SCD14-ST阈值，分别具有100%的灵敏度和特异性的急性心力衰竭的"收进"和"排除"是可 能的（图8)。
[0229] 就区分具有CHF的患者和具有急性心力衰竭的患者而言，在354 pg/ml的 s⑶14-ST阈值和0. 993的AUC，ROC分析显示98. 3%的灵敏度和95. 0%的特异性（图9)。
[0230] 这些结果证实，使用s⑶14-ST血浆浓度，在急诊室"收进"和"排除"呈现急性呼 吸困难的患者中的急性心力衰竭显然是可能的（图10)。
[0231] 实施例7 具有急件心力衰竭的患者中的死亡风险预测 在研究中包括60位由于急性呼吸困难被收入急诊室的患者，在他们中通过超过300 pg/ml阈值浓度的升高的NT-proBNP值评估急性心力衰竭（Chen AA,等人.NT-proBNP levels, echocardiographic findings, and outcomes in breathless were patients: results from the ProBNP Investigating of Dyspnea in the Emergency Room (PRIDE) echocardiographic substudy· Euer Heart J 2006;27:839-845)。25 位患者在 2 年随访 期间死亡。
[0232] 表8 :存活者和非存活者中的s⑶14-ST值
[0233] 尽管s⑶14-ST在存活者和非存活者之间以非常显著的方式存在差异，NT-proBNP 值在两组之间没有表现出显著差异。
[0234] 用于对比s⑶14-ST与9种炎症性生物标志物和心血管生物标志物(它们在常规诊 断或临床研究中已经确立)的结果预测的ROC分析的结果揭示了 SCD14-ST在具有急性心力 衰竭的患者中的优良预后有效性（图13)。
[0235] 实施例8 可诜的心脏外科手术以后患者中的死亡风险预测 测量在m)TA血浆样品中的S⑶14-ST和NT-proBNP浓度，所述样品在手术后第一天得 自49位接受可选的心脏外科手术的患者。24位患者在2年随访期间死亡。
[0236] 表9 :存活者和非存活者中的s⑶14-ST值
[0237] s⑶14-ST和NT-proBNP在存活者和非存活者之间非常显著地不同，但是 NT-proBNP在两组之间仅表现出微小差异（图14)。
[0238] 用于对比 sCD14-ST (AUC = 0. 957,截止值 371 pg/ml，灵敏度 100%，特异性= 92.0%)和 NT-proBNP (AUC = 0.895，截止值=4249 pg/ml，灵敏度 87. 5%，特异性 84.0%) 的结果预测的ROC分析的结果揭示了 SCD14-ST在接受可选的心脏外科手术的患者中的优 良预后有效性（图15和16)。
[0239] 实施例9 在入院时心脏件和非心脏件胸痛之间的冈分 目的和方法 在研究中包括30位被收入急诊室的、疑似急性心肌梗塞（AMI)的胸痛患者。肌钙蛋白 最初是阴性的。根据当前的指南，通过标准诊断操作(包括系列肌钙蛋白测量、心电描记术 (ECG)和用于证实最初胸痛症状的非心脏起源的进一步护理）排除AMI、急性冠状动脉综合 征（ACS)或不稳定型心绞痛（UAP)。在入院时确定s⑶14-ST，并与在入院时在17位具有心 脏性胸痛、但是不具有AMI的患者组中测量的SCD14-ST值对比，在所述患者中建立最终的 诊断UAP。
[0240] 结果 与具有非心脏性胸痛的患者组相比，具有UAP和最初的心脏性胸痛的患者组表现出显 著更高的 SCD14-ST 值（ρ〈(λ 0001 ;表 9，图 17)。
[0241] 表9 :在收入急诊室时具有心脏性和非心脏性胸痛的患者中的s⑶14-ST浓度
[0242」 用卞凶甘心肶T王和非心肶?王洞涌的按叹有探忭有狩?王（KUUj甘机掏不U. yw的 AUC值，其具有94. 1%的对应灵敏度和96. 0%的特异性（参见图18)。
[0243] 结论 ROC分析的结果证实了 s⑶14-ST用于区分心脏性和非心脏性胸痛的高区分能力。ROC 衍生的截止值为255 pg/ml，且根据在心脏疾病的诊断中建立的s⑶14-ST的其它阈值。
[0244] 结果表明，具有低于255 pg/ml截止值的SCD14-ST值的胸痛患者可以分配至具有 非心脏性胸痛的患者，且不经进一步诊断操作(例如系列肌钙蛋白测量、ECG或进一步护理） 从急诊室出院。
[0245] 实施例10 sCD40和SCD40-ST作为具有急件心力衰竭（AHF)的患者中的死亡风险预测的心脏标志 ? 方法 在基线血浆样品中测量sCD14和SCD14-ST浓度，所述样品得自35位到达急诊科的 患者（32-89岁，中位值67岁；13位女性，22位男性）。根据PRIDE研究使用300 ng/L 的NT-proBNP截止值，通过NT-proBNP确定来证实急性心力衰竭（AHF)的诊断（Januzzi J 等人· ： The N-terminal Pro-BNP investigation of dyspnea in the emergency department (PRIDE) study. Am J Cardiol 2005;95:948-54)。结果量度是在28天内的死 亡率。使用 Quantikine 人 sCD14 免疫测定（R&D Systems Inc. Minneapolis, MN, USA)测 量 sCD14。使用 PATHFAST 前腐败素测定（Mitsubishi Chemical Medience)确定 sCD14_ST〇 使用 ELECSYS proBNP 测定（Roche Diagnostics)测量 NT-proBNP〇
[0246] 结果 分别对于NT-proBNP、sCD14和sCD14-ST，研究组的基线浓度范围为17 - 2264 ng/L， 中位值=208 ng/L;6677 - 26000 ng/L，中位值=12800 ng/L 和 300 - 8893 ng/L，中位 值952 ng/L。15位患者显示高于截止水平300 ng/L的NT-proBNP值，从而证实AHF的诊 断。在28-天随访期间，总研究组的5位患者（14. 3%)和AHF组的3位患者（20. 0%)死亡。 从用于区分总研究组和AHF组的存活者和非存活者的ROC分析得到的曲线下面积（AUC)显 示在表10中，且ROC曲线显示在图19 (图（A):总研究组；图（B): AHF组）中。尽管发 现s⑶14的浓度是s⑶14-ST的大约10倍，两种标志物显示出足够的关联，如通过Bablok -Passing回归所证实的（图20)。与总研究组相比，sCD40、SCD14-ST和NT-proBNP的ROC-AUC 显示出在AHF组的存活者和非存活者之间显著更高的区分能力（表10，图19)。
[0247] 表10 :R0C分析的结果
[0248] 结论 与已经建立的心脏标志物NT-proBNP相比，s⑶14和s⑶14-ST显示得自用于具有急性 心力衰竭的患者中的死亡风险预测的ROC分析的优良结果，从而证实sCD14和SCD14-ST可 以用作心脏标志物。
[0249] 实施例11 用于具有急件心力衰竭（AHF)的患者的风险分级的多标志物方案 该研究证实了与额外标志物组合地同时评估SCD14-ST的额外诊断和预后价值。在具 有急性心力衰竭的患者中，与以下标志物配对组合地评估s⑶14-ST :- -白介素-1受体家族的标志物（ST2 -可溶性ST2的血浆浓度在炎性疾病中和在心脏 疾病中增加，特别是在急性心力衰竭中增加）， -神经激素标志物（NT-proBNP)， -缺血性心脏标志物（高灵敏度cTnT，即hsTnT)，或 -炎症标志物（CRP)。
[0250] 方法：在基线血浆样品中测量标志物浓度，所述样品得自60位到达急诊科的具 有急性心力衰竭的患者（50-90岁，中位值77岁；26位女性，34位男性）。排除具有心肌 梗塞或脓毒症的患者。结果量度是在2年时的死亡率。使用Presage ST2测定（Critical Diagnostics, SanDiego, CA, USA)测量 ST2。使用 PATHFAST 前腐败素测定（Mitsubishi Chemical Medience)确定 sCD14_ST。使用 ELECSYS 试验（Roche Diagnostics)测量氨基 端B-型利钠肽原（NT-proBNP)、高灵敏度心脏肌钙蛋白T (hscTnT)和C-反应蛋白（CRP)。
[0251] 结果：研究组的基线NT-proBNP浓度范围为361 - 27287 ng/L，中位值（IQR)= 5773 (2207 - 8488) ng/L，从而证实了急性心力衰竭的诊断。在2年随访期中，25位患者 (41. 7%)死亡。用于区分存活者和非存活者的Mann-Whitney独立样品检验和ROC-分析的 结果总结在表11中。
[0252] 表12含有标志物ST2、CRP、hsTnT和NT-proBNP与SCD14-ST的组合的ROC分析和 净重新分类的结果。标志物组合的同时评估会增强预后有效性，如AUC值和净重新分类指 数的增加所证实的。
[0253] 表11 :AHF中的死亡率预测的预后有效性标准
[0254] 表12 :使用标志物与s⑶14-ST的组合的死亡风险预测
[0255] 结论：与单独标志物的确定相比，在具有急性心力衰竭的患者中的s⑶14-ST和 ST2、SCD14-ST 和 NT-proBNP、SCD14-ST 和 hsTnT、或 SCD14-ST 和 CRP 的同时评估会改善死 亡风险预测。
【主权项】
1. 一种用于评价受试者的发展心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的风险的方法，所述 方法包括下述步骤： a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，评价受试者的发展心血管疾病或病症或动脉粥样硬 化的个体风险。2. -种用于诊断受试者的心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的方法，所述方法包括 a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，确定心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的存在或不 存在。3. -种用于在具有心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的受试者中评价死亡风险的方 法，所述方法包括 a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，确定受试者的死亡风险。4. 一种用于评价具有心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的受试者是否将受益于使用 选自抗生素、益生菌和乳果糖的物质的治疗的方法，所述方法包括下述步骤： a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，评价可能性。5. -种用于确定受试者是否由于心血管疾病或病症或动脉粥样硬化而需要住院的方 法，所述方法包括 a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤b)中得到的结果，确定所述受试者是否需要住院。6. 根据权利要求1-5中的任一项的方法，所述方法另外包括下述步骤 a'）在相同个体的相同或不同样品中确定至少一种额外标志物， b'）将在步骤a'）中确定的至少一种额外标志物的量与所述额外标志物的至少一个 参比量对比，和 c'）通过组合关于所述化合物在步骤b)中得到的结果和关于所述至少一种额外标志 物在步骤b'）中得到的结果，执行各个步骤c)。7. 根据权利要求6所述的方法，其中所述至少一种额外标志物选自：神经激素标志物、 水平衡调节剂、缺血性心脏标志物、细胞因子、炎症标志物和细胞粘附分子，优选地其中所 述至少一种额外标志物选自：原降钙素、C-反应蛋白和转化生长因子-13细胞因子超家族的 标志物，和/或神经激素标志物、缺血性心脏标志物；炎症标志物和任选的白介素-1受体家 族的标志物。8. 根据权利要求1-7中的任一项所述的方法，其中所述受试者显示选自以下的一种或 多种心血管疾病或病症的症状：急性冠状动脉综合征、急性心力衰竭、慢性心力衰竭、冠状 动脉疾病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风、出血性中风、短暂脑缺血发作。9. 根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中所述心血管疾病或病症是以下的任 一种： ⑴慢性心力衰竭，优选地其中所述化合物的量是115 pg/ml或更高，更优选150 pg/ ml或更高，甚至更优选260 pg/ml或更高； (ii) 心绞痛，优选地其中所述化合物的量是214 pg/ml或更高，更优选216 pg/ml或 更高，甚至更优选222 pg/ml或更高； (iii) 急性心力衰竭，优选地其中所述化合物的量是295 pg/ml或更高，更优选354 pg/ml或更高，甚至更优选455 pg/ml或更高； (iv) 心肌梗塞，优选地其中所述化合物的量是260 pg/ml或更高，更优选276 pg/ml 或更高，甚至更优选295 pg/ml或更高。10. 根据权利要求1-9中的任一项所述的方法，其中所述方法用于鉴别具有高死亡风 险的、具有心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的受试者，其中所述化合物的量优选地是500 pg/ml或更高，更优选800 pg/ml或更高，甚至更优选1300 pg/ml。11. 根据权利要求1-10中的任一项所述的方法，其中所述方法用于评价不具有心血管 疾病或病症或动脉粥样硬化的临床征象的受试者发展心血管疾病或病症或动脉粥样硬化 的风险。12. 选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14的片段或衍生物的化合物作 为心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的标志物的用途，所述片段或衍生物包含SCD14的10 个连续氨基酸。13. 用于治疗受试者的选自抗生素、益生菌和乳果糖的物质，所述受试者具有（i)心血 管疾病或病症或动脉粥样硬化和（ii)选自sCD14、sCD14-ST或除了 SCD14-ST以外的sCD14 的片段或衍生物的化合物的增加的血浆水平。14. 根据权利要求13的所使用的物质，其中所述增加的血浆水平是345 pg/ml或更高， 优选地800 pg/ml或更高，更优选1300 pg/ml或更高。15. -种套件，其用于诊断心血管疾病或病症或动脉粥样硬化、用于评价受试者的发展 心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的风险、用于评价在具有心血管疾病或病症或动脉粥样 硬化的受试者中的死亡风险、用于评价具有心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的受试者将 受益于使用选自抗生素、益生菌和乳果糖的物质的治疗的可能性和/或用于评价受试者是 否由于心血管疾病或病症或动脉粥样硬化而需要住院，所述套件包括 a) 用于在得自受试者的样品中确定选自sCD14、SCD14-ST或除了 SCD14-ST以外的 sCD14的片段或衍生物的化合物的量的工具； b) 基于通过a)确定的量进行诊断和/或风险评价的说明书；和任选的 c) 用于确定至少一种额外标志物的量的工具，和基于确定的所述至少一种额外标志 物的量进行诊断和/或风险评价的说明书。16. 根据权利要求3所述的方法，其中所述死亡风险是心脏外科手术以后的死亡风险， 或所述受试者已经经历心脏外科手术。17. 选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14的片段或衍生物的化合物作 为评价心脏外科手术以后受试者中的死亡风险的标志物的用途。18. -种用于在呈现胸痛的受试者中区分心脏性和非心脏性胸痛的方法，所述方法包 括下述步骤： a) 在所述受试者的样品中确定选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14 的片段或衍生物的化合物的量， b) 将在步骤a)中确定的量与至少一个参比量对比，和 c) 基于在步骤（b)中得到的结果，确定心脏性胸痛的存在或不存在。19. 选自s⑶14、s⑶14-ST或除了 s⑶14-ST以外的s⑶14的片段或衍生物的化合物作 为用于区分心脏性和非心脏性胸痛的标志物的用途。20. 根据权利要求1-11、16或18中的任一项所述的方法、根据权利要求12、17或19中 的任一项所述的用途、根据权利要求13或14所述的物质、或根据权利要求15所述的套件， 其中所述化合物是SCD14-ST。
【专利摘要】本发明涉及用于诊断心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的方法和用于评价受试者发展心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的风险的方法。进一步提供了用于评价受试者的死亡风险、用于评价受试者是否将受益于某种治疗或受试者是否需要住院治疗或受试者是否可以出院的方法。本发明提供了sCD14或其片段或衍生物(尤其包括sCD14-ST)作为一般心血管风险的新标志物，更具体地作为心血管疾病或病症或动脉粥样硬化的标志物。
【IPC分类】G01N33/68
【公开号】CN105102984
【申请号】CN201380068266
【发明人】E.斯帕努斯
【申请人】美迪恩斯生命科技株式会社
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2013年12月27日
【公告号】EP2939028A1, US20150346217, WO2014102333A1